摘 要：本項目對蕁麻中藥飲片中總黃酮含量進(jìn)行測定，并對蕁麻飲片中黃酮的提取方法進(jìn)行研究。

關(guān)鍵詞：蕁麻 總黃酮 紫外分光光度法

蕁麻（Nettle），是一種多年生草本植物。莖高60-100厘米，葉對生，雌雄同株或異株。蕁麻廣泛分布于亞歐大陸，我國云南中部、貴州、四川東南部、湖北和浙江也有廣泛分布。蕁麻屬多種植物藥用 ，為我國常用的民間藥和民族藥，在漢族、維吾爾族、彝族等多個少數(shù)民族中廣泛使用，主要用于治療風(fēng)濕病、扭傷疼痛及皮膚瘙癢等病。

1、實驗方法

1.1 簡單回流提取法

精密稱取蕁麻葉粉末10.OO克，放在圓底燒瓶中，加入150ml95%乙醇，油浴加熱，連續(xù)回流2小時，放冷、過濾，回收乙醇，將濃縮液用石油醚脫脂3-5次，回收石油醚。再用多倍量的無水乙醇沉淀多糖和蛋白質(zhì)成分。最后將濃縮液在水浴鍋上蒸發(fā)到4～7ml時轉(zhuǎn)入到100ml的容量瓶中，用30%乙醇定容到10ml，得樣品溶液以備用。

1.2 超聲波提取法

精密稱取狹蕁麻葉粉末10.00克，放在200ml燒杯中，加入150ml95%乙醇，在超聲波清洗器上提取45分鐘，過濾，回收乙醇，將濃縮液用石油醚脫脂5次，回收石油醚。再用多倍量的無水乙醇沉淀多糖和蛋白質(zhì)成分。最后將濃縮液在水浴鍋上蒸發(fā)到4～7ml時轉(zhuǎn)入到10ml的容量瓶中，用30%乙醇定容到10ml，得樣品溶液以備用。

1.3 狹葉蕁麻中黃酮類成分的定性鑒別

1.3.1 化學(xué)法

1.3.2 色譜法（TLC）

1.3.2.1 展開系統(tǒng)。醋酸乙酯：甲醇：水=4：1：1

1.3.2.2 顯色系統(tǒng)。飽和醋酸鉛試劑

1.3.2.3 定性鑒別。用微量進(jìn)樣器取1微升樣品溶液（超聲波提?。┯诒影迳?，放入已飽和20分鐘的展開系統(tǒng)中展開，隨行蘆丁標(biāo)準(zhǔn)品。當(dāng)展開距離頂端5cm時取出晾干，以飽和醋酸鉛為顯色劑顯色，于105攝氏度烘烤5分鐘。

1.3.2.4 實驗結(jié)果。薄層板上出現(xiàn)黃色斑點.

1.4 標(biāo)準(zhǔn)曲線的測定

1.4.1 對照品溶液的制備

精密稱取蘆丁標(biāo)準(zhǔn)品10mg放入10ml容量瓶中，用95%乙醇定容到10ml，得對照品溶液以備用。

1.4.2 波長的選擇

黃酮類化合物與鋁鹽進(jìn)行絡(luò)合反應(yīng)，在堿性條件下生成紅色絡(luò)合物，將其用紫外分光光度計讀取吸光度數(shù)值，結(jié)果顯示510nm處有最大吸收峰，故選擇510nm為檢測波長[7]。

1.4.3 蘆丁標(biāo)準(zhǔn)曲線

精密量取0.0ml、0.1ml、0.2ml、0.3ml、0.4ml、0.5ml的1mg/ml的對照品溶液于10ml容量瓶中，分別加入30%乙醇0.5ml、0.4ml、0.3ml、0.2ml、0.1ml、0.0ml。再分別加入5%亞硝酸鈉0.5ml，搖勻靜置6min，再加5%硝酸鋁0.5ml，搖勻靜置6min，再加4%氫氧化鈉5ml，最后用30%乙醇定容，靜置15min。置于玻璃比色皿中，在510nm處測得吸光值。

2、結(jié)果與討論

2.1 精密度試驗

精密吸取1mg/ml的對照品液0.2ml于10ml容量瓶中按照標(biāo)準(zhǔn)曲線做法，平行做5個樣，RSD=0.276%，本實驗精密度良好。

2.2 重現(xiàn)性試驗

精密吸取樣品液0.5ml于10ml容量瓶中，按照標(biāo)準(zhǔn)曲線法平行測5個樣，求得RSD=0.280%，可見本實驗重現(xiàn)性良好。

2.3 穩(wěn)定性試驗

對照品溶液的穩(wěn)定性：精密吸取濃度為1mg/ml的對照品0.2ml于10ml容量瓶中，按照標(biāo)準(zhǔn)曲線做法測定。每隔10分鐘測一次，共測量1個小時，求得RSD=0.540%，可見穩(wěn)定性良好。

樣品溶液穩(wěn)定性：精密吸取樣品液0.2ml于10ml容量瓶中，按照標(biāo)準(zhǔn)曲線法做測定，每隔10分鐘測量一次，共測1小時，求得RSD=0.540%，可見穩(wěn)定性良好。

2.4 加樣回收率試驗

精密吸取樣品液0.02ml和蘆丁標(biāo)準(zhǔn)品溶液0.02ml于10ml容量瓶中，按標(biāo)準(zhǔn)曲線法測定，計算公式：回收率=（測得量-樣品含量）/加入量×100%，求得平均回收率為101.8%。

2.5 狹葉蕁麻中總黃酮的含量測定

精密吸取樣品液0.5ml于容量瓶中，按照標(biāo)準(zhǔn)曲線法進(jìn)行配制，用紫外可見分光光度計在510nm處測得吸光值。根據(jù)回歸曲線求的含量。

總黃酮含量測定結(jié)果：

結(jié)論：

1.本實驗對蕁麻中藥飲片中黃酮類成分進(jìn)行了定性和定量的分析，定性結(jié)果顯示蕁麻葉中含有黃酮類成分。定量結(jié)果顯示，用超聲波提取測得含量為0.159mg/ml，用加熱回流提取法測得含量為0.127。

2.本實驗比較了用加熱回流提取和超聲波提取兩種方法對黃酮的提取效率，發(fā)現(xiàn)用超聲波提取法更加簡便，提取時間短，提取效率。

3.用5%的亞硝酸鈉，5%的硝酸鋁，4%的氫氧化鈉顯色效果良好，且顯色穩(wěn)定，保證了實驗數(shù)據(jù)的可靠性。

4.黃酮類成分具有多種生物學(xué)活性，尤其是抗癌防癌作用明顯。本實驗證明了蕁麻中含有黃酮類化合物，擴(kuò)展了黃酮類成分的來源，也增加了蕁麻資源的利用。

參考文獻(xiàn)

[1]中國藥品生物制品檢驗所.中國民族藥志（1）[M].北京：人民衛(wèi)生出版社.