摘 要：本文通過考察茯苓三萜提取物對酪氨酸酶活性的影響來確認(rèn)茯苓三萜類化合物對酪氨酸酶是否起到抑制作用。

關(guān)鍵詞：酪氨酸酶 茯苓 三萜類化合物 L-酪氨酸

茯苓是中藥“四君八珍”其中之一。其味甘、性平，入藥具有利水滲濕，健脾化痰，寧心安神的功效。可通過提取的茯苓三萜有效成分與酪氨酸酶液反應(yīng)，通過測定吸光值進(jìn)行比較判定茯苓三萜類化合物是否對酪氨酸酶具有抑制作用。觀察了解茯苓三萜類化合物是否可以治療黃褐斑，達(dá)到美白效果。

1、茯苓三萜類化合物的制備

將茯苓研制成粗粉，取茯苓生藥粗粉20g放入圓底燒瓶中，向其中加入120ml的95%乙醇進(jìn)行加熱回流1.5h，冷卻后過濾，再向?yàn)V渣中加入80ml95%乙醇，繼續(xù)回流1.5h，冷卻過濾合并濾液，置旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀中回收乙醇成稠膏狀，稱量后置4℃冰箱保存。

1.1 試劑配制

3、檢測方法

總反應(yīng)體系為5mL。在此體系中，受試液、陽性對照熊果苷的終濃度（mg·mL-1）梯度均為0.03l25、0.0625、0.125、0.25、0.5。實(shí)驗(yàn)時(shí)，向試管中依次加入指定劑量的磷酸鈉緩沖液、不同濃度梯度的茯苓受試液（包括陽性對照熊果苷）、酪氨酸酶液，于溫度30℃下水浴10 min。然后向試管中加入底物L(fēng)-酪氨酸，立即開始計(jì)時(shí)。反應(yīng)時(shí)間20 min后在475 nm波長下測定吸光度值。測定時(shí)，以相應(yīng)的陰性對照做參比，“受試液”、“標(biāo)準(zhǔn)對照”、“陽性對照”分別以“陰性對照1”、“陰性對照2”、“陰性對照3”調(diào)零。

用下列公式計(jì)算茯苓三萜受試液（包括陽性對照）對酪氨酸酶活性的抑制率，并跟據(jù)濃度—酶抑制率曲線估計(jì)半數(shù)抑制濃度（IC50）的近似值。

抑制率=[（A-B）/A]×l00%。

其中：“A”為標(biāo)準(zhǔn)對照的吸光值，“B”為受試液（或陽性對照）的吸光值。每個(gè)實(shí)驗(yàn)做3個(gè)平行。抑制率高表明其對酪氨酸酶活性的抑制強(qiáng)度就越高。

4、實(shí)驗(yàn)結(jié)果

4.1實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)。本次實(shí)驗(yàn)測得的各個(gè)濃度的茯苓三萜受試液、標(biāo)準(zhǔn)對照液與熊果苷陽性對照液在475nm處的吸光度值見表2-4。

表中數(shù)據(jù)為各個(gè)濃度的受試液、標(biāo)準(zhǔn)對照、陽性對照熊果苷測得三組吸光度的平均值，可以根據(jù)吸光度值計(jì)算出茯苓三萜對酪氨酸酶的抑制率。

4.2 茯苓三萜對酪氨酸酶的抑制率。通過抑制率公式最終得到的各個(gè)濃度的茯苓三萜提取物與熊果苷對酪氨酸酶的抑制率。由數(shù)據(jù)可知，茯苓三萜與熊果苷對酪氨酸酶的抑制作用均隨著濃度的增加而逐漸增強(qiáng)。并且茯苓三萜對酪氨酸酶的抑制強(qiáng)度要強(qiáng)于熊果苷對酪氨酸酶的抑制強(qiáng)度。

4.3 抑制率曲線

4.3.1 茯苓三萜的濃度-抑制率曲線通過研究茯苓三萜類化合物對酪氨酸酶活性的抑制作用，得到了茯苓三萜對酪氨酸酶活性抑制的曲線?？芍?，茯苓三萜類化合物對酪氨酸酶具有抑制作用，且抑制作用隨著濃度的增加而逐漸增強(qiáng)，最后隨著濃度的增加而增長緩慢。

4.3.2 二者的抑制率曲線比較通過研究茯苓三萜類化合物對酪氨酸酶活性的抑制作用，得到了茯苓三萜與陽性對照熊果苷對酪氨酸酶活性抑制的曲線。通過繪制茯苓三萜類化合物與熊果苷對酪氨酸酶的抑制率曲線，可知茯苓三萜與陽性對照熊果苷對酪氨酸酶的抑制作用均隨著濃度的增加而逐漸增強(qiáng)。對比可知，茯苓三萜類化合物對酪氨酸酶的抑制作用強(qiáng)于熊果苷對酪氨酸酶的抑制作用。由此可知，茯苓三萜類化合物可以通過抑制酪氨酸酶的活性來治療黃褐斑，達(dá)到增白美容的效果。

本次實(shí)驗(yàn)從中藥茯苓中進(jìn)行有效成分的提取。本次試驗(yàn)檢測的僅是茯苓中茯苓三萜類化合物對酪氨酸酶的抑制作用，本方法僅適用于對茯苓三萜類化合物的祛斑機(jī)制的研究。其他中藥抑制黑色素的其他機(jī)制還有待進(jìn)一步探討。

參考文獻(xiàn)：

[1] 王海峰. 茯苓的現(xiàn)代研究進(jìn)展[J]. 社區(qū)醫(yī)學(xué)雜志， 2011，9（12）：44-45.