程立子，王冬娥，葉貴誠，袁春雷，彭建明

(廣東省中山市博愛醫(yī)院：1.生殖中心；2.檢驗中心，廣東中山 528403)

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·論著·

同型半胱氨酸及C677T基因多態(tài)性與妊娠期糖尿病關系分析*1

程立子1，王冬娥2，葉貴誠2，袁春雷2，彭建明2

(廣東省中山市博愛醫(yī)院：1.生殖中心；2.檢驗中心，廣東中山 528403)

摘要:目的探討同型半胱氨酸(Hcy)及亞甲基四氫葉酸還原酶(MTHFR)基因C677T位點多態(tài)性與妊娠期糖尿病(GDM)的相關性。方法以91例GDM孕婦為GDM組，123例正常妊娠孕婦為對照組，檢測MTHFR C677T基因多態(tài)性及血清Hcy、血糖水平。結果GDM組Hcy水平高于對照組，Hcy水平與空腹血糖水平呈正相關(P<0.05)。GDM組與對照組MTHFR C677T多態(tài)性基因CC、CT、TT分布頻率比較差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。GDM組TT型基因攜帶者Hcy水平高于CC型基因攜帶者(P<0.05)。結論Hcy與GDM的發(fā)生、發(fā)展密切相關。MTHFR C677T基因多態(tài)性可能通過影響Hcy水平而影響GDM的發(fā)生、發(fā)展。

關鍵詞:同型半胱氨酸；亞甲基四氫葉酸還原酶；基因多態(tài)性；妊娠期糖尿病

妊娠期糖尿病(GDM)是指在妊娠期間首次發(fā)現或發(fā)生的糖代謝紊亂，是妊娠期常見的并發(fā)癥，嚴重影響胎兒發(fā)育和母親健康，其病因尚不明確。有研究顯示GDM患者同型半胱氨酸(Hcy)水平高于正常妊娠者，提示Hcy可能與GDM發(fā)生、發(fā)展有關，但尚存較大爭議[1]。Hcy濃度除受營養(yǎng)因素影響外，還受遺傳因素的影響。亞甲基四氫葉酸還原酶(MTHFR)是調節(jié)葉酸代謝的關鍵酶，C677T是其常見的突變位點，基因多態(tài)性改變可降低酶活性而導致Hcy水平升高。C677T多態(tài)性改變是否可增加GDM發(fā)病風險，暫未見報道。本研究分析了血清Hcy水平及MTHFR C677T基因型分布情況，探討了其與GDM的關系，旨在為GDM的防治提供依據。

1資料與方法

1.1一般資料選擇2013年于廣東省中山市博愛醫(yī)院接受產檢的孕婦214例，孕24～28周，排除妊娠前糖尿病、高血壓、肝腎疾病等病史。GDM診斷參照國際糖尿病與妊娠關系研究協會2011年發(fā)布的相關標準：空腹血糖5.1 mmol/L，服用75 g葡萄糖后1 h血糖10.0 mmol/L，2 h血糖8.5 mmol/L，符合任意一項即診斷為GDM。214例孕婦分為GDM組91例，年齡(28.59±4.50)歲，正常妊娠孕婦(對照組)123例，年齡(28.15±4.09)歲。

1.2方法

1.2.1基因檢測采用棉拭子采集受檢者口腔黏膜上皮細胞，DNA提取采用硅膠吸附法，基因多態(tài)性檢測采用熒光定量聚合酶鏈反應，儀器及試劑購自美國ABI公司。

1.2.2Hcy及血糖檢測受試對象禁食12 h后次晨空腹采集靜脈血2 mL用于檢測血清Hcy和空腹血糖；服用75 g葡萄糖后，分別于1、2 h采集靜脈血檢測血糖水平；所有檢測在抽血后1 h內完成。檢測儀器采用德國西門子公司ADVIA2400全自動生化分析儀。Hcy檢測采用酶循環(huán)法，試劑購自浙江伊利康公司。血糖檢測采用己糖激酶法，試劑購自上?？迫A公司。

2結果

2.1GDM組與對照組Hcy水平比較GDM組、對照組Hcy水平分別為(8.93±1.54)、(4.35±1.64)μmol/L，GDM組Hcy水平高于對照組(t=7.244，P<0.05)

2.2Hcy與空腹血糖相關性分析Hcy與空腹血糖呈正相關，相關系數為0.488(P<0.05)。

2.3MTHFR C677T基因頻率及等位基因頻率分布比較兩組間基因型頻率比較差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)，等位基因頻率比較差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05)，見表1。

表1　　MTHFR C677T基因頻率及等位基因

-：表示無數據。

2.4不同基因型患者Hcy水平比較TT型基因攜帶者Hcy水平為(9.69±0.94)μmol/L，高于CC型基因攜帶者(8.69±1.51)μmol/L，t=2.733，P<0.05；CT型基因攜帶者Hcy水平為(9.10±1.67)μmol/L，與CC型基因攜帶者比較差異無統(tǒng)計學意義(t=1.089，P>0.05)。

3討論

3.1Hcy與GDM相關性Hcy是蛋氨酸代謝的中間產物，在體內主要有3種代謝途徑。(1)再甲基化途徑：Hcy接受5-甲基四氫葉酸提供的甲基，重新合成蛋氨酸，該過程需葉酸和維生素B12的輔助。(2)轉硫化途徑：Hcy在維生素B6輔助下，轉化為半胱氨酸，最終形成丙酮酸、硫酸和水。(3)細胞內Hcy釋放到細胞外：細胞內蛋氨酸水平過高時，Hcy可直接釋放到血液循環(huán)中。

過往研究表明，Hcy可能與GDM的發(fā)病有關，但結論仍頗有爭議。Aroni等[2]發(fā)現，糖尿病患者Hcy水平明顯升高；孫亞惠[3]的研究證實，GDM患者Hcy水平明顯高于正常妊娠者。本研究結果顯示，GDM患者Hcy水平高于正常妊娠者，且Hcy水平與空腹血糖水平呈正相關(P<0.05)，與上述研究結果相符，說明血清Hcy水平與GDM關系密切，Hcy可作為GDM病情監(jiān)測的指標，反映血糖控制情況。也有學者持不同觀點。黃翠波[4]的研究顯示，GDM患者Hcy水平與正常妊娠者比較差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05)。各研究結論不一致，可能與樣本數量、環(huán)境和遺傳因素等有關，尚待進一步證實。

GDM患者Hcy水平升高的原因尚不明確，可能為：(1)GDM患者血糖升高，引起過度排尿，使得葉酸、維生素B12和維生素B6等排泄增多，影響Hcy代謝，Hcy在體內蓄積；(2)妊娠期母體和胎盤分泌抗胰島素激素增加，胰島素抵抗引起Hcy水平升高，而Hcy水平升高又通過抑制B細胞分泌胰島素而導致血糖水平升高。兩者互為因果，互相影響，因此Hcy水平升高可能是促進GDM發(fā)生、發(fā)展的病理基礎[5-6]。Hcy水平升高可導致妊娠高血壓、神經管畸形、唐氏綜合征等妊娠相關疾病發(fā)病率增加[7]。補充葉酸是降低Hcy水平的有效方法[8]。因此，GDM患者除應及早進行血糖干預外，還應補充葉酸以降低Hcy水平，避免不良妊娠結局的發(fā)生。

3.2C677T基因多態(tài)性與Hcy及GDM相關性Hcy水平主要受營養(yǎng)和遺傳兩方面因素的影響。MTHFR基因突變引起的基因缺陷或酶活性降低是導致Hcy升高的重要原因[9]。MTHFR是參與Hcy代謝的關鍵酶，可催化5，10-亞甲基四氫葉酸轉化為5-甲基四氫葉酸，后者可促進Hcy轉化為蛋氨酸。MTHFR基因有多種突變類型，以C677位點突變最為多見。James等[10]以分娩過唐氏綜合征患兒的女性和50例未生育過唐氏綜合征患兒的女性為研究對象進行了研究，結果顯示C677基因CT雜合型突變可使酶活性下降35%，TT純合型突變更可使酶活性下降70%。酶活性降低可導致Hcy向蛋氨酸轉化受阻，使Hcy在體內蓄積而升高[11]。本研究發(fā)現，GDM患者與正常妊娠者C677T基因型分布差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)，提示C677T多態(tài)性可能是GDM遺傳危險因素。進一步分析顯示，TT型基因攜帶者Hcy水平明顯高于CC型基因攜帶者(P<0.05)，證實基因多態(tài)性改變可顯著影響Hcy水平，MTHFR C677T基因多態(tài)性可通過影響血清Hcy水平而與GDM相關。

綜上所述，Hcy與GDM密切相關，MTHFR C677T基因多態(tài)性可能通過影響Hcy水平而影響GDM的發(fā)生、發(fā)展。因此，檢測MTHFR C677T基因多態(tài)性有助于早期個性化干預Hcy水平，進而干預GDM的病程進展。

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Association between homocystine and C677T polymorphism with gestational diabetes mellitus*1

ChengLizi1，WangDonge2，YeGuicheng2，YuanChunlei2，PengJianming2

(1.ReproductiveMedicalCenter;2.DepartmentofMedicalLaboratory，Bo′aiHospital，Zhongshan，Guangdong528403，China)

Abstract:ObjectiveTo investigate the relationship between homocystine (Hcy)，methylenetetra hydrofolate reductase(MTHFR) C677T and gestational diabetes mellitus (GDM).MethodsA total of 91 GDM cases(GDM group) and 123 cases with normal pregnancy(control group) were detected for the C677T polymorphism of MTHFR and serum levels of Hcy and glucose.ResultsSerum Hcy level in GDM group was remarkable higher than that of control group(P<0.05).Hcy level was positively correlated with fasting plasma glucose(P<0.05).The genotype frequencies(CC，CT，TT) of MTHFR C677T in GDM group and control group were with significantly difference(P<0.05).Hcy was significantly higher in women with C677T TT genotype than those with CC genotype(P<0.05) .ConclusionHcy could be related to GDM.The mutation of MTHFR might affect serum Hcy level,and be involved in the occurrence and development of GDM.

Key words:homocystine;methylenetetra hydrofolate reductase;polymorphism;gestational diabetes mellitus

(收稿日期：2015-12-28)

DOI:10.3969/j.issn.1673-4130.2016.06.007

文獻標識碼：A

文章編號：1673-4130(2016)06-0736-02

基金項目：廣東省中山市科技計劃資助項目(20102A131)。

作者簡介：程立子，女，主管技師，主要從事輔助生殖及生殖醫(yī)學實驗研究。