鐘　鳴　于杜娟　靳榮輝　譚　平

(吉林大學(xué)中日聯(lián)誼醫(yī)院，吉林　長春　130033)

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老年非小細(xì)胞肺癌患者GRP94及GRP78蛋白表達(dá)及其臨床意義

鐘鳴于杜娟靳榮輝譚平

(吉林大學(xué)中日聯(lián)誼醫(yī)院，吉林長春130033)

〔摘要〕目的研究非小細(xì)胞肺癌(NSCLC)中細(xì)胞應(yīng)激因子GRP94及GRP78蛋白表達(dá)及其與臨床分期及生存期的關(guān)系。方法選取該院接受外科手術(shù)切除治療的64例NSCLC患者，應(yīng)用電話隨訪的方式了解患者的術(shù)后情況和生存期；使用免疫組化技術(shù)檢測研究對象的病理切片標(biāo)本中GRP78和GRP94的表達(dá)水平。結(jié)果GRP94與GRP78蛋白在NSCLC腫瘤細(xì)胞中明顯高表達(dá)狀態(tài)；GRP94、GRP78蛋白的表達(dá)與NSCLC病理類型有關(guān)，與分化程度、腫瘤T分期、腫瘤N分期、WHO臨床分期具有不同程度的聯(lián)系，也與腫瘤的大小、浸潤、轉(zhuǎn)移有關(guān)；與性別和年齡無關(guān)。GRP94及GRP78蛋白的高表達(dá)與NSCLC患者生存期及生存率呈明顯負(fù)相關(guān)，其蛋白表達(dá)水平越高，患者的生存期越短，生存率越低。結(jié)論GRP78和GRP94是NSCLC發(fā)生、發(fā)展中的重要因子，可作為腫瘤分期和預(yù)測預(yù)后的一項指標(biāo)。

〔關(guān)鍵詞〕非小細(xì)胞肺癌(NSCLC)；GRP94；GRP78；生存期

糖調(diào)節(jié)蛋白GRP94與GRP78是高度保守的內(nèi)質(zhì)網(wǎng)駐留糖蛋白。有研究報道，GRP94和GRP78在惡性腫瘤(淋巴瘤、食管癌、乳腺癌、肝癌、胃癌)中均呈高表達(dá)，提示GRP94和GRP78的高表達(dá)與腫瘤的發(fā)生、發(fā)展、轉(zhuǎn)移、浸潤、化療及預(yù)后密切相關(guān)〔1~4〕。本文擬探討GRP94與GRP78在非小細(xì)胞肺癌(NSCLC)中的臨床意義及對預(yù)后的影響。

1材料與方法

1.1研究對象收集2001~2010年在吉林大學(xué)中日聯(lián)誼醫(yī)院胸外科進(jìn)行手術(shù)的部分NSCLC患者的腫瘤組織石蠟封存標(biāo)本，患者術(shù)前均未進(jìn)行放療或化療，共64例。年齡60~75歲，平均67歲，其中男53例、女11例，有吸煙史37例，無20例，不詳7例；病理類型：鱗癌43例，腺癌21例；病理分化程度：低分化16例，中分化43例，高分化5例；T分期：T1 23例，T2 35例，T3 6例；N分期：N0 37例，N1 15例，N2 11例，N3 1例;pTNM分期：Ⅰ期29例，Ⅱ期23例，Ⅲ期12例；局部浸潤：有16例，無48例；生存時間：5年以上0例，3~5年9例，1~3年46例，1年以內(nèi)9例。

1.2試劑anti-GRP94購買于Santa Cruz公司；anti-GRP78購買于Cell Signaling公司；正常山羊血清工作液、生物素標(biāo)記山羊抗兔IgG工作液(二抗)、濃縮型DAB試劑盒購買于北京中杉金橋生物技術(shù)有限公司。

1.3免疫組化檢測GRP78、GRP94蛋白表達(dá)嚴(yán)格按試劑盒說明書操作。兩種蛋白主要在細(xì)胞質(zhì)內(nèi)表達(dá)，呈棕黃色或棕褐色顆粒。首先在100倍低倍鏡下選擇具有代表性區(qū)域，轉(zhuǎn)到400倍高倍鏡下選擇5個有陽性表達(dá)集中的視野，應(yīng)用評分法對陽性細(xì)胞進(jìn)行半定量評估，以陽性細(xì)胞所占視野百分比計分：無染色或單個表達(dá)的細(xì)胞計為-，陽性細(xì)胞數(shù)<10計為+，10%~50%計為，50%~80%計為，>80%計為。

1.4統(tǒng)計學(xué)方法使用SPSS19.0軟件，采用非參數(shù)檢驗和Spearman分析。應(yīng)用電話隨訪，2011年8月隨訪停止。采用Kaplan-Meier分析和log-rank檢驗。

2結(jié)果

2.1NSCLC中GRP94與GRP78蛋白表達(dá)結(jié)果在NSCLC中，GRP94與GRP78蛋白表達(dá)明顯增高，見圖1、2，均差異顯著。二者表達(dá)多在腫瘤細(xì)胞胞質(zhì)中，GRP94蛋白表達(dá)強(qiáng)度為~，GRP78蛋白表達(dá)強(qiáng)度為+~，癌旁組織可見少量表達(dá)。配對T檢驗提示GRP94與GRP78的蛋白表達(dá)具有相關(guān)性(r=0.053，P=0.000),GRP94:GRP78+7例，1例；GRP94：GRP78+15例，12例，3例；GRP94：GRP78+4例，11例，11例。

圖1　NSCLC中GRP94蛋白表達(dá)(×100)

圖2　GRP78在NSCLC中的表達(dá)(×100)

2.2NSCLC中GRP94與GRP78蛋白表達(dá)與臨床因素的相關(guān)性分析在NSCLC中，病理類型對GRP94蛋白表達(dá)有影響，而病理類型和病理分化程度對GRP78蛋白表達(dá)水平無影響，見表1。

2.3NSCLC中GRP94與GRP78蛋白表達(dá)與生存率的相關(guān)性分析在NSCLC中，GRP94強(qiáng)度為、、的患者5年生存率分別為25%、23%、3.8%。GRP94的蛋白表達(dá)水平與生存期具有顯著的統(tǒng)計學(xué)相關(guān)性，P=0.026，與病理類型有一定的相關(guān)性(P=0.001)，生存函數(shù)分析顯示GRP94蛋白表達(dá)水平越高，患者生存期越短。NSCLC中，GRP78強(qiáng)度為+、、的患者5年生存率分別為7.8%、23%、17%，GRP78蛋白的表達(dá)與生存期有顯著的統(tǒng)計學(xué)相關(guān)性，P=0.008，生存函數(shù)分析發(fā)現(xiàn)同GRP94蛋白表達(dá)水平一樣，GRP78蛋白表達(dá)水平越高，患者的生存期越短。

表1　NSCLC中GRP94/GRP78蛋白表達(dá)與臨床因素的

3討論

GRP94和GRP78是葡萄糖調(diào)節(jié)蛋白家族中目前研究最多的蛋白，和熱休克蛋白具有高度的同源性，作為一種應(yīng)激蛋白分布于內(nèi)質(zhì)網(wǎng)腔中。最初在葡萄糖饑餓的雞胚細(xì)胞發(fā)現(xiàn)，為細(xì)胞應(yīng)激因子。它們參與蛋白質(zhì)合成時新生肽鏈的折疊，行使分子伴侶功能。然在腫瘤細(xì)胞中糖蛋白的誘導(dǎo)表達(dá)出來低糖、酸性環(huán)境、缺氧等，也可能是腫瘤細(xì)胞對宿主主動免疫的一種防御機(jī)制。GRP94和GRP78在腫瘤的發(fā)生、發(fā)展、增殖等過程中起作用外，還參與了腫瘤耐藥機(jī)制的形成〔5〕。

本研究結(jié)果與近年來國內(nèi)研究一致〔6，7〕。GRP94和GRP78兩種蛋白的升高可能是由于在腫瘤細(xì)胞生長、增殖過程中，細(xì)胞常處于葡萄糖葡饑餓、酸中毒、缺氧的微環(huán)境中，這種微環(huán)境能夠促使糖基化和錯誤折疊蛋白的積累，導(dǎo)致折疊蛋白反應(yīng)，促進(jìn)內(nèi)質(zhì)網(wǎng)分子伴侶糖調(diào)節(jié)蛋白表達(dá)。GRP94和GRP78表達(dá)水平升高，對腫瘤細(xì)胞的的生存有重要作用，其可介導(dǎo)腫瘤細(xì)胞的免疫逃避機(jī)制，使腫瘤對不良環(huán)境的耐受力增加，對凋亡的抵抗性增強(qiáng)，使得腫瘤細(xì)胞能夠更好地生存、生長、增殖和轉(zhuǎn)移。GRP94和GRP78在腫瘤細(xì)胞中高表達(dá)與腫瘤的發(fā)生、發(fā)展、轉(zhuǎn)移有關(guān)，被認(rèn)為是評估惡性腫瘤生物學(xué)行為和預(yù)后的重要標(biāo)志物。近期研究發(fā)現(xiàn)，部分惡性腫瘤細(xì)胞中，二者呈高表達(dá)狀態(tài)，其中包括NSCLC，并且在NSCLC中其基因和蛋白的表達(dá)程度與WHO分期和病理分化程度相關(guān)〔8〕。

GRP94的蛋白表達(dá)水平越高，患者的生存期越短，與病理類型有一定的相關(guān)性。因為GRP94具有刺激細(xì)胞生長、存進(jìn)血管生成的功能，這種功能能夠使腫瘤細(xì)胞在不利其生存的環(huán)境中繼續(xù)存活。本研究提示GRP94可能與腫瘤的轉(zhuǎn)移、進(jìn)展有一定的聯(lián)系；腫瘤細(xì)胞的分化過程可能有GRP94的參與；其表達(dá)對腫瘤患者的預(yù)后有一定影響。GRP78蛋白表達(dá)水平越高，患者的生存期越短。

總之GRP94和GRP78的在肺癌組織中高表達(dá)，與性別、腫瘤T分期、病理分化程度及病理類型有一定關(guān)系，且與生存期呈負(fù)相關(guān)，在預(yù)測肺癌發(fā)生、發(fā)展、預(yù)后有重要意義。

4參考文獻(xiàn)

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〔2015-03-10修回〕

(編輯李相軍)

〔中圖分類號〕R730.4

〔文獻(xiàn)標(biāo)識碼〕A

〔文章編號〕1005-9202(2016)07-1632-03；

doi：10.3969/j.issn.1005-9202.2016.07.043

通訊作者：譚平(1963-)，男，教授，主任醫(yī)師，主要從事肺癌及COPD方面的研究。

第一作者：鐘鳴(1977-)，女，主治醫(yī)師，主要從事腫癌相關(guān)因子的研究。