張云 程立軍 謝向機 陳澤宇 林妙端

摘 要：建立了土壤中氰蟲酰胺、氯蟲苯甲酰胺、氟蟲酰胺等3種鄰氨基苯甲二酰胺類殺蟲劑殘留量的快速檢測方法。土壤中的鄰氨基苯甲二酰胺類殺蟲劑殘留量，經(jīng)磷酸鹽緩沖溶液和甲醇混合提取液提取后，調(diào)pH至2.0～3.0，用固相萃取柱凈化，以乙腈-5mmol/L乙酸銨-甲酸作為流動相，梯度洗脫，UPLC-MS/MS電噴霧離子源，正離子多反應監(jiān)測模式測定，外標法定量。測定結果表明：采用本方法檢測3種鄰氨基苯甲二酰胺類殺蟲劑，方法檢測低限均能達到2.0μg/kg以下，在曲線濃度2～50μg/L之間線性相關系數(shù)（r）均>0.9985，在2.0、5.0、10μg/kg添加水平回收率較高，在72.5%～87.1%范圍之間；回收率相對標準偏差范圍在2.9%～9.8%之間。

關鍵詞：土壤；鄰氨基苯甲二酰胺；超高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜；測定

氟蟲酰胺、氰蟲酰胺和氯蟲苯甲酰胺是目前市面上常見的3種鄰氨基苯甲二酰胺類殺蟲劑。該類殺蟲劑是近幾年Dupont公司從鄰氨基苯甲二酰胺類化合物中篩選出來的兩代廣譜殺蟲劑[1]，大鼠急性經(jīng)口LD50>5000mg/kg[2]。該類殺蟲劑能高效激活昆蟲魚尼丁受體，使昆蟲癱瘓導致死亡[3]，可有效防治鱗翅目、鞘翅目和半翅目等昆蟲[4-5]。該類農(nóng)藥具有很好的市場潛力和廣泛的應用前景[6-8]，其登記和使用范圍在逐年持續(xù)擴大。由于其化學性質(zhì)較為穩(wěn)定，長期使用會富集于土壤中，導致環(huán)境污染。

目前，國內(nèi)外有關鄰氨基苯甲二酰胺類農(nóng)藥檢測的報道，主要集中在原藥[9]和食品[10-12]中，土壤中鄰氨基苯甲二酰胺殺蟲劑的檢測方法較少，檢測項目較單一，且未見超高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法同時測定氰蟲酰胺、氯蟲苯甲酰胺和氟雙酰胺3種鄰氨基苯甲二酰胺類殺蟲劑的公開文獻。本研究建立了超高效液相色譜-四級桿串聯(lián)質(zhì)譜ESI+離子、MRM模式下，土壤中3種鄰氨基苯甲二酰胺類目標物有效成分分析和定量方法。此方法適用于氰蟲酰胺、氯蟲苯甲酰胺和氟蟲酰胺的同時測定，并具有簡便、快速、準確、靈敏度高、重復性好的特點。適用于土壤環(huán)境的分析檢測。

1 實驗部分

1.1 儀器與試劑

1.1.1儀器設備

AB SCIEX3500三重四級桿串聯(lián)質(zhì)譜儀（配ESI源） ，固相萃取裝置，均質(zhì)器，離心機，電子天平，旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀，超聲波清洗器，超純水機等。

1.1.2試劑、藥品

乙腈、甲醇、乙酸、乙酸胺為色譜純，磷酸、磷酸氫二鉀、磷酸二氫鉀為分析純。水：符合GB/T 6682中一級水的規(guī)定。固相萃取柱Oasis HLB：200mg，6mL。

1.1.3溶液

磷酸鹽緩沖液a：稱取41.70g磷酸氫二鉀和2.30g磷酸二氫鉀加水溶解至1000mL。磷酸鹽緩沖液b：用磷酸將磷酸鹽緩沖液a調(diào)節(jié)pH至2～3。提取液：將磷酸鹽緩沖溶液a與甲醇體積分數(shù)為50%混合均勻。

1.1.4標準物質(zhì)

氟蟲酰胺（CAS號272451-65-7）、氰蟲酰胺（CAS號736994-63-1）、氯蟲苯甲酰胺（CAS號500008-45-7），標準品純度均≥97%。將上述標準物質(zhì)用甲醇配置成濃度為100ng/mL的標準儲備溶液，存放于2℃～8℃冰箱中，可保存3個月。臨用時用流動相配置成相應濃度的工作液。

1.2 實驗方法

1.2.1試樣制備

按照NY/T 1121.1中有關規(guī)定采集土壤，去雜物后充分混勻，保存在-18℃冷凍冰箱中。按照NY/T 52平行取三份新鮮土壤，（105±2）℃的烘箱中烘烤12h后在干燥箱中冷卻后稱重，測定土壤的水分含量（α），再計算土樣換算至烘干的水分換算系數(shù)K（K=1-α）

1.2.2樣品提取

稱取10g試樣（精確到0.01g）于200mL錐形瓶中，加入100mL提取液，用振蕩器振蕩30min，超聲提取10min，將上清液裝入50mL離心管中，4000r/min離心5min。準確移取20mL在40℃下旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)至10mL左右，用磷酸調(diào)節(jié)pH至2～3之間，待凈化。

1.2.3樣品凈化

依次用5mL甲醇，5mL磷酸鹽緩沖液b淋洗活化固相萃取柱，將待凈化液轉(zhuǎn)移上柱，抽干，棄去流出液。再用6mL乙腈洗脫，收集洗脫液于10mL氮吹管中，45℃下吹干，加入1mL流動相，漩渦混勻1min，過0.22μm有機系濾膜后，超高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜測定。

1.2.4色譜條件

色譜柱：Thermo syncronic C18 Dim.（mm） 50×2.1，ParticleSz.（?） 1.7；進樣量：10?L；柱溫：35℃；流速：0.3mL/min；梯度洗脫設定程序見表1。

1.2.5質(zhì)譜條件

離子源：ESI+；掃描方式：MRM；輔助加熱氣、霧化氣、碰撞氣均為高純氮氣；定性定量離子對、去簇電壓、碰撞氣體能量、碰撞池出口電壓見表2。

1.2.6定量測定

用混合標準工作溶液對樣品溶液進行外標法定量，樣品溶液中待測物的響應值應與相應濃度的對照標準物質(zhì)響應值相當。

2 結果與討論

2.1凈化條件的優(yōu)化

由于土壤樣品基質(zhì)復雜，干擾因素較多，特別是一些可溶性物質(zhì)嚴重影響分離效果和檢測靈敏度。固相萃取技術由于溶劑用量少，操作方便，回收率高等特點，廣泛用于食品、環(huán)境中微量成分的測定[13-14]。本文對比了硅膠柱、活性炭柱和Oasis HLB柱的凈化效果，只有Oasis HLB能將樣品中的雜質(zhì)有效分離，雜峰干擾較少，凈化效果最佳。同時由于Oasis HLB柱在酸性條件下極性捕獲基團保留效果最佳。因此，樣液過柱前先調(diào)節(jié)pH至酸性條件，富集目標物于凈化柱上，過柱后用乙腈將目標物洗脫收集，回收率較高。不同pH條件下回收率對比圖見圖1。

2.2 儀器條件的優(yōu)化

本研究采用正負離子質(zhì)譜掃描模式，對氟蟲酰胺、氯蟲苯甲酰胺和氰蟲酰胺的質(zhì)譜條件進行對以尋優(yōu)，在混合標準濃度均為1mg/L條件下。負離子模式下Q1信號強度均在1×103左右，強度較低，不適合采用；在正離子Q1模式下，分別掃描[+H]和[+NH4]的信號強度，3種物質(zhì)母離子強度均超過了1×107，但Q3模式下，氰蟲酰胺和氯蟲苯甲酰胺只有[+H]產(chǎn)生的子離子強度較穩(wěn)定。因此，經(jīng)過多方比較，最后選擇信號強且穩(wěn)定的m/z：474.9/285.9，474.9/177.0，483.9/452.9，483.9/285.9，683.0/408.0，683.0/273.9為定性離子對，其中信號較高的m/z：474.9/285.9，483.9/452.9和683.0/408.0為定量離子對。3種鄰氨基苯甲二酰胺類化合物的提取離子對色譜圖見圖2。

2.3 方法的線性范圍和相關性及測定低限

準確配置鄰氨基苯甲二酰胺類標準品系列標準溶液，質(zhì)量濃度分別為2、5、10、20、50μg/L。按照1.2.4-1.2.5中的儀器條件進樣分析后，以峰面積y對質(zhì)量濃度x繪制工作曲線。線性相關系數(shù)r均大于0.9985，在2～50μg/L范圍內(nèi)呈良好的線性關系。對空白樣品進行加標回收試驗，根據(jù)信噪比S/N≥10為定量限和S/N≥3為檢出限的參考規(guī)定，結合樣品處理過程中的稀釋倍數(shù)，計算各組分的方法定量限和檢出限，測定底限均小于1.0μg/kg，靈敏度較高。結果見表3。

2.4 方法的準確度和精密度

以不含氰蟲酰胺、氯蟲苯甲酰胺和氟蟲酰胺的土壤樣品為本底，分別添加系列濃度的待測藥物標準溶液，按照1.2節(jié)所述實驗方法進行回收率實驗，重復測定6次，結果見表4。

2.5 實際樣品測定

采用本研究所建立的檢測方法對三明地區(qū)20個農(nóng)田、菜園采集的土壤樣品進行實際樣品檢測，結果顯示，其中一批樣品檢出氰蟲酰胺0.72mg/kg，3批樣品不同程度檢出氯蟲苯甲酰胺和氟蟲酰胺，最高檢出值達1.27 mg/kg，其余均未檢出。

3 結論

本研究采用Oasis HLB固相萃取技術和UPLC-MS/MS檢測技術相結合測定土壤中氰蟲酰胺、氯蟲苯甲酰胺和氟蟲酰胺等3種鄰氨基苯甲二酰胺類農(nóng)藥殘留。各化合物測定低限均可達到2.0μg/kg；在濃度2～50μg/L之間線性關系良好，相關系數(shù)（r）均>0.9985；對于2.0、5.0、10μg/kg三個水平添加回收，回收率平均值在72.5%～87.1%之間，相對標準偏差（RSDs）在2.9%～9.8%之間。該方法快速簡便、靈敏度高、凈化效果好，顯著地縮短了檢測時間，可應用于土壤中鄰氨基苯甲二酰胺類農(nóng)藥的快速分析。

【基金項目：國家質(zhì)檢總局科技計劃項目（2015IK034）資助?！?/p>