戚建芬　王　琳　謝　曦

(黔南州醫(yī)院胃腸外科，貴州　都勻　558000)

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老年三陰型乳腺癌中高遷移率蛋白和聚ADP核糖聚合酶1表達(dá)與預(yù)后相關(guān)性

戚建芬王琳謝曦1

(黔南州醫(yī)院胃腸外科，貴州都勻558000)

〔摘要〕目的觀察老年三陰型乳腺癌中高遷移率蛋白(HMG)A2和聚ADP核糖聚合酶(PARP)1的表達(dá)，分析其在乳腺癌組織中表達(dá)的臨床特點(diǎn)并探討其與預(yù)后的相關(guān)性。方法選擇三陰型老年局部晚期乳腺癌標(biāo)本和正常乳腺組織各68例，免疫組化染色(SP)法檢測(cè)HMGA-2和PARP1蛋白在不同組織中表達(dá)，分析其與臨床分級(jí)、病理類型及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移等臨床特點(diǎn)相關(guān)性，并通過(guò)生存曲線法比較兩組預(yù)后情況。結(jié)果乳腺癌組織中HMGA-2、PARP1的陽(yáng)性表達(dá)率分別為51.47%、67.65%。HMGA-2、PARP1表達(dá)與無(wú)瘤生存時(shí)間、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移和分化程度相關(guān)(P<0.05)。Pearson直線相關(guān)分析顯示，三陰乳腺癌組織中 HMGA-2和PARP1的表達(dá)呈正相關(guān)(r=0.399，P<0.001)。生存曲線分析結(jié)果提示隨著HMGA-2和PARP1陽(yáng)性表達(dá)增加，患者術(shù)后生存期縮短。結(jié)論老年三陰型乳腺癌中PARP1和HMGA-2表達(dá)可作為乳腺癌的分子標(biāo)志物，PARP1和HMGA-2陽(yáng)性表達(dá)率越高，分化程度越高，更易發(fā)生淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移，無(wú)瘤生存時(shí)間愈短，預(yù)后差。

〔關(guān)鍵詞〕乳腺癌；高遷移率蛋白(HMG)A2;聚ADP核糖聚合酶(PARP)1;三陰型

在美國(guó)，每年有18.5萬(wàn)婦女罹患乳腺癌，并且有4.4萬(wàn)人死于這種疾病，年紀(jì)越大，患者乳腺癌的概率越大〔1〕。 “三陰乳腺癌”特指孕激素受體(PR)及人表皮生長(zhǎng)因子受體(HER)-2和雌激素受體(ER)均為陰性的乳腺癌患者〔2〕。這種乳腺癌在所有類型的乳腺癌中約占15%，具有特異的生物學(xué)標(biāo)志物和臨床病理特征。聚 ADP 核糖聚合酶(PARP)1是細(xì)胞發(fā)生基因突變后，堿基切除修復(fù)通路的核心分子，抑制PARP1表達(dá)就能阻斷細(xì)胞堿基切除修復(fù)通路，這樣細(xì)胞就不能得到損傷修復(fù)，從而發(fā)生凋亡〔3〕。高遷移率蛋白(HMG)A2是多種腫瘤細(xì)胞染色體斷裂點(diǎn)編碼的一個(gè)基因，目前此基因的異常表達(dá)與腫瘤的關(guān)系已經(jīng)在國(guó)際上引起關(guān)注。本研究通過(guò)分析HMGA2和PARP1在正常組織和癌癥組織中的表達(dá)差異，探討其與預(yù)后的相關(guān)性。

1資料與方法

1.1一般資料2010年3月至2015年3月我院病理科存檔的68例乳腺癌石蠟標(biāo)本作為實(shí)驗(yàn)組。經(jīng)過(guò)病理活檢確診，均為女性，平均年齡(65.72±4.78)歲，病理類型均為浸潤(rùn)性導(dǎo)管癌。根據(jù)2014年中國(guó)《NCCN乳腺癌臨床實(shí)踐指南》〔4〕，均為三陰乳腺癌，其中Ⅱ B 期28 例，Ⅲ A 期 15 例，Ⅲ B 期17例，Ⅲ C 期 8 例。均給予3個(gè)周期環(huán)磷酰胺+吡柔比星方案化療，后行乳腺癌改良根治術(shù)。進(jìn)行常規(guī)胸部X線、CT或腹部超聲、CT進(jìn)行檢查。

1.2一般方法采用組織活檢槍，14~16 G活檢穿刺針，標(biāo)本用4%的甲醛固定，石蠟包埋，切片。術(shù)后進(jìn)行電話隨訪3年，從手術(shù)日期到復(fù)發(fā)日或是隨訪截止日期(2015年3月)稱為無(wú)瘤生存期(DFS)〔5〕。其中有5例(7.35%)失訪，48例存活(其中18例復(fù)發(fā))，15例因?yàn)槠渌膊』蛞馔舛劳觥ARP1及HMGA2的兔抗人單克隆抗體購(gòu)自美國(guó)Santa Cruz公司，免疫組化染色法(SP法)，具體操作步驟如下〔6〕：用磷酸鹽緩沖液(PBS)沖洗組織切片3次，每次5 min。3%過(guò)氧化氫甲醇溶液孵育10 min。PBS沖洗3次，每次5 min。每張切片加50 μl非免疫性動(dòng)物血清，室溫孵育10 min后吸去多余的水分。加一抗50 μl，4℃冰箱過(guò)夜。PBS沖洗3次，每次5 min。每張切片加50 μl鏈霉菌抗生物素蛋白-過(guò)氧化物酶溶液，室溫孵育10 min。PBS沖洗3次，每次5 min。二氨基聯(lián)苯胺顯色蘇木精復(fù)染，采用中性樹膠封固。

1.3結(jié)果判斷陽(yáng)性結(jié)果的細(xì)胞核呈棕褐色顆粒，根據(jù)陽(yáng)性細(xì)胞的比例及染色強(qiáng)度之和將免疫組化結(jié)果分為4級(jí)〔7〕，陰性(-)0分，弱陽(yáng)性(+)1~2分，陽(yáng)性(++)3~4分，強(qiáng)陽(yáng)性(+++)5~6分。著色強(qiáng)度深計(jì)為3分，著色適中2分，著色淡1分，無(wú)著色0分。陽(yáng)性細(xì)胞百分率：在高倍鏡(×400)下隨機(jī)抽取10個(gè)視野，計(jì)數(shù)每個(gè)視野內(nèi)100個(gè)細(xì)胞，計(jì)算其平均陽(yáng)性百分率。陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)<5%計(jì)0分，5%~24%計(jì)1分，25%~49%計(jì)2分，≥50%計(jì)3分。

1.4統(tǒng)計(jì)學(xué)方法應(yīng)用SPSS19.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行t檢驗(yàn)，χ2檢驗(yàn)。

2結(jié)果

2.1HMGA2、PARP1在三陰型乳腺癌組織中陽(yáng)性表達(dá)與臨床病理特征關(guān)系乳腺癌組織中HMGA-2的陽(yáng)性表達(dá)率為51.47%(35/68)，PARP1的陽(yáng)性表達(dá)率為67.65%(46/68)，無(wú)瘤生存日期≤5年的乳腺癌組織中HMGA2、PARP1的表達(dá)高于無(wú)瘤生存日期>5年(P<0.05)。有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的乳腺癌組織中HMGA2、PARP1表達(dá)較無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者明顯升高(P<0.05)。分化程度高的乳腺癌組織中HMGA2、PARP1表達(dá)較低分化的乳腺癌組織明顯升高(P<0.05)。宮頸癌組織中HMGA-2、PARP1表達(dá)與病理類型、臨床分期無(wú)關(guān)(P>O.05)，見表1和表2。

2.2HMGA2和PARP1表達(dá)的相關(guān)性三陰乳腺癌組織中 HMGA2和PARP1的表達(dá)呈正相關(guān)(r=0.399，P<0.001)，見表3。

2.3HMGA2和PARP1表達(dá)與患者術(shù)后5年無(wú)瘤生存時(shí)間的關(guān)系HMGA2表達(dá)(-)組5年無(wú)瘤生存率為78.9%，HMGA2表達(dá)(+)組5年無(wú)瘤生存率為43.7%，說(shuō)明隨著HMGA2陽(yáng)性表達(dá)的增加，患者術(shù)后生存期隨著下降，Log-rank 檢驗(yàn)結(jié)果顯示差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。PARP1表達(dá)(-)組5年無(wú)瘤生存率為71.2%，PARP1表達(dá)(+)組5年無(wú)瘤生存率為49.8%，說(shuō)明隨著PARP1陽(yáng)性表達(dá)的增加，患者術(shù)后生存期隨著下降(P<0.05)。

表1　HMGA2陽(yáng)性表達(dá)與三陰型乳腺癌臨床病理的關(guān)系

表2　PARP1陽(yáng)性表達(dá)與三陰型乳腺癌臨床病理的關(guān)系

表3　HMGA-2和PARP1表達(dá)的相關(guān)性(n)

3討論

乳腺癌的臨床分期可分為ⅡB期、ⅢA期、ⅢB期、ⅢC期。三陰型乳腺癌生物學(xué)特性和基底細(xì)胞樣型乳腺癌相似，但在基因表達(dá)和免疫表型等方面存在差異〔8〕。由于三陰型乳腺癌缺乏內(nèi)分泌及未找到抗HER2治療的靶點(diǎn)，目前尚無(wú)針對(duì)性的標(biāo)準(zhǔn)治療方案，此外老年患者身體合并其他疾病多，對(duì)化療耐性差，且常出現(xiàn)術(shù)后并發(fā)癥〔9〕。

在許多腫瘤細(xì)胞染色體斷裂點(diǎn)上均發(fā)現(xiàn)HMGA2基因的表達(dá)。夏青等〔10〕研究發(fā)現(xiàn)HMGA2基因可能通過(guò)上皮-間質(zhì)轉(zhuǎn)化來(lái)參與腫瘤對(duì)正常細(xì)胞的侵襲過(guò)程。此外，HMGA2還可以上調(diào)轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子中13信號(hào)通路介導(dǎo)腫瘤生成。因此HMGA2在多種惡性腫瘤組織或是轉(zhuǎn)移灶中的過(guò)表達(dá)已經(jīng)成為惡性腫瘤預(yù)后的指標(biāo)〔11〕。研究發(fā)現(xiàn)，早期腫瘤細(xì)胞發(fā)生的標(biāo)志是DNA損傷應(yīng)答途徑，DNA 的損傷應(yīng)答在于修復(fù)早期有癌病傾向的細(xì)胞和清理早期腫瘤細(xì)胞。當(dāng)此DNA修復(fù)途徑受到破壞時(shí)，機(jī)體將無(wú)法清除這些癌病的細(xì)胞，而PARP1介導(dǎo)的DNA修復(fù)途徑在機(jī)體的監(jiān)督過(guò)程具有不可替代的作用。PARP1是催化真核細(xì)胞中聚腺苷二磷酸核糖化的核膜，修飾翻譯后的蛋白質(zhì)，BRCA基因突變后將阻礙了同源重組修復(fù)通路〔12〕，導(dǎo)致DNA 修復(fù)異常，使用 PARP1抑制劑能阻礙細(xì)胞損傷后修復(fù)，使細(xì)胞出現(xiàn)凋亡，而不是癌變。

本研究結(jié)果表明PARP1和HMGA2表達(dá)與患者無(wú)瘤生存日期、腫瘤的分化程度和淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移等有關(guān)。研究發(fā)現(xiàn)PARP1和HMGA2表達(dá)呈正相關(guān)。提示PARP1和HMGA2可作為乳腺癌增殖的分子標(biāo)志物，對(duì)于預(yù)測(cè)乳腺癌的亞型和預(yù)后有重要的臨床意義。老年患者乳腺癌多屬于晚期，由于新生血管較少，無(wú)法供應(yīng)惡性腫瘤所需要的充足營(yíng)養(yǎng)，因此乳腺癌的生長(zhǎng)速度較慢。浸潤(rùn)性導(dǎo)管癌是乳腺癌最常見的病理類型，根據(jù)分化程度劃分，Ⅲ級(jí)分化屬于低分化，具有高度惡化，Ⅰ級(jí)分化屬于高分化，惡化程度較低。腫瘤組織分級(jí)愈高，惡化程度也增加，淋巴轉(zhuǎn)移越多，就越容易發(fā)生局部或遠(yuǎn)處的轉(zhuǎn)移，患者的預(yù)后越差，因此無(wú)瘤生存時(shí)間越短。

老年三陰型乳腺腫瘤中PARP1和HMGA2表達(dá)可作為乳腺癌的分子標(biāo)志物，PARP1和HMGA2陽(yáng)性表達(dá)率越高，分化程度越高，更易發(fā)生淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移，無(wú)瘤生存時(shí)間愈短，預(yù)后差，因此這兩指標(biāo)對(duì)評(píng)估老年腫瘤患者的預(yù)后具有一定的應(yīng)用價(jià)值。

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〔2014-11-23修回〕

(編輯苑云杰)

〔中圖分類號(hào)〕R451

〔文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼〕A

〔文章編號(hào)〕1005-9202(2016)05-1120-03；

doi：10.3969/j.issn.1005-9202.2016.05.045

1黔南州人民醫(yī)院肝膽外科

第一作者：戚建芬(1967-)，女，副主任醫(yī)師，主要從事普外科研究。