任　羽, 賀愛軍, 葛繁梅

(延安大學(xué)附屬醫(yī)院, 1. 血液科; 2. 普外科, 陜西 延安, 716000)

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nm23-H1蛋白在急性髓細(xì)胞白血病患者中的表達(dá)及其療效

任羽1, 賀愛軍2, 葛繁梅1

(延安大學(xué)附屬醫(yī)院, 1. 血液科; 2. 普外科, 陜西 延安, 716000)

摘要:目的探討nm23-H1蛋白在急性髓細(xì)胞白血病(AML)患者中的表達(dá)及其療效。方法86例急性髓性白血病患者設(shè)為觀察組，79例健康人群作為對(duì)照組。結(jié)果86例AML患者免疫分型陽性表達(dá)率由高到低依次為CD33(94.17%)、MPO(86.05%)、CD13(77.91%); CD13+組患者血清nm23-H1蛋白表達(dá)情況顯著高于CD13-組(t=3.641, P<0.001)。CD33+組患者血清nm23-H1蛋白表達(dá)情況顯著高于CD33-組(t=2.699, P=0.008)。MPO+組患者血清nm23-H1蛋白表達(dá)情況顯著高于MPO-組(t=3.402, P=0.001)。初治組患者、CR組、復(fù)發(fā)組血清nm23-H1蛋白表達(dá)顯著高于對(duì)照組(P<0.05)。結(jié)論AML免疫抗原CD13、CD33、MPO表達(dá)陽性患者血中nm23-H1蛋白呈現(xiàn)表達(dá)上調(diào)。

關(guān)鍵詞:急性髓細(xì)胞白血病; 免疫分型; 酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)

急性髓性白血病(AML)是一種骨髓與外周血中原始和優(yōu)質(zhì)髓性細(xì)胞異常增生的惡性疾病，患者主要表現(xiàn)為貧血、出血、感染、臟器浸潤、肝、脾及淋巴結(jié)腫大等特點(diǎn)[1]。對(duì)于AML的分型，臨床有眾多的標(biāo)準(zhǔn)，其中細(xì)胞形態(tài)學(xué)和免疫學(xué)標(biāo)準(zhǔn)對(duì)于AML的診斷和治療意義重大，且能互相印證，分型符合率一致性較高。有研究[2]發(fā)現(xiàn)nm23-H1的表達(dá)能抑制人類造血干細(xì)胞的分化，與腫瘤的轉(zhuǎn)移和腫瘤細(xì)胞增殖、分化密切相關(guān)，是一種腫瘤轉(zhuǎn)移抑制基因。本研究主要分析nm23-H1在AML患者不同免疫分型抗原CD13、CD33、MPO中的表達(dá)情況與不同療效下患者血中nm23-H1定量含量的變化，為AML患者的診斷和治療提供參考與依據(jù)。

1資料與方法

1.1一般資料

選取2013年1月—2014年12月在本院接受治療的86例急性髓性白血病患者為觀察組，其中男54例，女32例，平均年齡(67.6±9.4)歲；按FAB分型可分為原粒細(xì)胞微分化型(M0) 1例，原粒細(xì)胞白血病未分化型(M1)6例，原粒細(xì)胞白血病部分分化型(M2)25例，顆粒增多的早幼粒細(xì)胞白血病(M3) 20例，粒-單核細(xì)胞白血病(M4) 9例，單核細(xì)胞白血病(M5) 22例，紅白血病(M6) 2例，巨核細(xì)胞白血病(M7) 1例。同時(shí)選取 79例在本院進(jìn)行體檢的健康人群作為對(duì)照組，其中男42例，女37例，平均年齡(65.8±7.5)歲。2組研究對(duì)象一般臨床資料比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，具有可比性。

1.2檢測(cè)與治療方法

入院后取觀察組患者髂骨處0.2 mL骨髓做涂片(6張)，按照FAB標(biāo)準(zhǔn)形態(tài)學(xué)分類。再取患者骨髓5 mL, 置于枸櫞酸抗凝管中盡快送檢。選用美國BD流式細(xì)胞儀，單克隆抗體選擇髓系相關(guān)抗體CD13、CD33、MPO進(jìn)行測(cè)量[3]，單克隆試劑由美國BD公司出品。免疫分型以CD45/SCC設(shè)計(jì)，檢測(cè)10 000個(gè)細(xì)胞，判斷標(biāo)準(zhǔn)如下[4]: 以白血病細(xì)胞表面抗原表達(dá)≥20%和胞內(nèi)抗原≥10%為陽性。各抗原積分根據(jù)白血病免疫學(xué)分型研究組積分系統(tǒng)確定免疫類型。取觀察組患者清晨靜脈血5 mL, 離心后用0.22 μm超微濾紙進(jìn)行過濾后，置于-80 ℃環(huán)境下進(jìn)行測(cè)定。采用酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(ELISA)法測(cè)定患者血清中nm23-H1蛋白的含量，試劑盒由深圳依諾金生物科技有限公司提供，操作方法詳見產(chǎn)品說明書。

M3型AML采用全反式維甲酸聯(lián)合柔紅霉素進(jìn)行治療，其余類型的AML患者采用柔紅霉素+阿糖胞苷(DA)、高三尖杉酯堿+阿糖胞苷(HA)或去甲氧柔紅霉素+阿糖胞苷(IA)進(jìn)行化療[5]。

按照國內(nèi)2004年AML療效判斷標(biāo)準(zhǔn): ① 完全緩解(CR): 中性粒細(xì)胞≥1.5×109/L, 血小板>100×109/L, 骨髓細(xì)胞面積>20%, 骨髓幼稚細(xì)胞<5%，無Auer小體。② 復(fù)發(fā): CR患者外周血中出現(xiàn)幼稚細(xì)胞或骨髓中幼稚細(xì)胞的數(shù)量超過5%。

1.3觀察指標(biāo)

比較2組研究對(duì)象一般臨床資料；不同F(xiàn)AB分類免疫分型抗原CD13、CD33、MPO表達(dá)情況；比較nm23-H1蛋白在免疫分型抗原CD13、CD33、MPO中表達(dá)情況; nm23-H1蛋白在AML患者和健康人群中表達(dá)情況。

1.4統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

采用SPSS 19.0軟件對(duì)收集的數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。計(jì)量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差表示，進(jìn)行t檢驗(yàn)。計(jì)數(shù)資料使用卡方(χ2)檢驗(yàn)。P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2結(jié)果

2.1一般資料

本研究共納入研究對(duì)象165例，其中觀察組86例，對(duì)照組79例。2組患者一般資料見表1。2組研究對(duì)象性別比例、年齡、體質(zhì)指數(shù)(BMI)、吸煙及飲酒史比較，差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。

表1　2組研究對(duì)象一般資料比較

2.2不同F(xiàn)AB分類免疫分型抗原CD13、CD33、MPO表達(dá)情況

86例不同F(xiàn)AB分型AML患者免疫分型抗原CD13、CD33、MPO表達(dá)情況見表2。86例AML患者免疫分型陽性表達(dá)率由高到低依次為CD33(94.17%)、MPO(86.05%)、CD13(77.91%)。其中CD33表達(dá)陽性率為94.17%(81/86), M0～M7的CD33表達(dá)陽性率為1.23%(1/81)，7.41%(6/81)、29.63%(24/81)、23.46%(16/81)、9.88%(7/81)、27.16%(22/81)、1.23%(1/81)、0。

2.3nm23-H1蛋白在免疫分型抗原CD13、CD33、MPO中表達(dá)情況比較

CD13+組患者血清nm23-H1蛋白表達(dá)情況明顯高于CD13-組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(t=3.641,P<0.001)。CD33+組患者血清nm23-H1蛋白表達(dá)情況明顯高于CD33-組，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(t=2.699,P=0.008)。MPO+組患者血清nm23-H1蛋白表達(dá)情況明顯高于MPO-組，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(t=3.402,P=0.001)。見表3。

表2　不同F(xiàn)Ab分類免疫分型抗原CD13、CD33、

表3　nm23-H1蛋白在免疫分型抗原CD13、CD33、

與CD13-比較, **P<0.01; 與CD33-比較, ##P<0.01;

與MPO-比較, △△P<0.01。

2.4nm23-H1蛋白在AML患者和健康人群中表達(dá)情況

經(jīng)過治療后發(fā)現(xiàn)，初治組患者、CR組、復(fù)發(fā)組血清nm23-H1蛋白表達(dá)水平依次為(47.05±8.61)、(11.34±0.92)、(65.19±10.87) ng/mL, 顯著高于對(duì)照組的(5.62±0.94) ng/mL(P<0.05)。初治組、復(fù)發(fā)組患者血清nm23-H1蛋白表達(dá)顯著高于CR組(P<0.05)。

3討論

以往醫(yī)學(xué)界對(duì)于AML的診斷分型主要依靠形態(tài)學(xué)FAB分型標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行診斷。隨著免疫學(xué)、遺傳和分子生物學(xué)技術(shù)的發(fā)展，F(xiàn)AB分型的局限性逐漸顯露出來。遺傳和分子生物學(xué)檢測(cè)手段由于操作復(fù)雜，成本較高，作為AML的常規(guī)診斷尚需時(shí)日[6-7]。有學(xué)者[8]發(fā)現(xiàn)，免疫學(xué)分型具有較強(qiáng)的抗原特異性和異質(zhì)性，交叉表達(dá)出現(xiàn)的概率較小，可根據(jù)白血病患者不同分化階段的特異性抗原的表達(dá)情況對(duì)白血病進(jìn)一步分型，分型準(zhǔn)確性可高達(dá)90%以上。有學(xué)者[9]發(fā)現(xiàn)，AML患者最常見的表達(dá)抗原為CD13和CD33，可作為AML特異性免疫抗原標(biāo)記。本研究發(fā)現(xiàn), 86例AML患者免疫分型陽性表達(dá)率由高到低依次為CD33(94.17%)、MPO(86.05%)、CD13(77.91%)，與上述文獻(xiàn)的觀點(diǎn)一致。有研究發(fā)現(xiàn)，CD33是髓系細(xì)胞分化抗原，主要分布在髓系血細(xì)胞，主要存在于分化的早期階段。90%以上的AML患者存在CD33表達(dá)上調(diào)，可以作為髓系白血病治療的良好靶點(diǎn)。

腫瘤轉(zhuǎn)移抑制基因(nm23)家族是一組抑制腫瘤細(xì)胞的轉(zhuǎn)移表型，有研究[10]發(fā)現(xiàn)在人體內(nèi)nm23基因主要包括nm23-H1、nm23-H2。nm23-H1、nm23-H2是RNA的2個(gè)完全不同的基因，受兩個(gè)獨(dú)立的調(diào)控系統(tǒng)調(diào)節(jié)，其中nm23-H1的mRNA的水平表達(dá)降低與癌細(xì)胞轉(zhuǎn)移呈反相關(guān)。對(duì)于nm23-H1基因在惡性腫瘤中的表達(dá)研究較少，但是近年來有學(xué)者[11]發(fā)現(xiàn)nm23-H1具有二磷酸核苷激酶相同的結(jié)構(gòu)，能夠?qū)⒌鞍踪|(zhì)上的二磷酸核苷轉(zhuǎn)化成三磷酸腺苷，當(dāng)體內(nèi)nm23-H1表達(dá)下調(diào)時(shí)可減低三磷酸核苷的生成，從而影響微管聚合和細(xì)胞素信號(hào)傳導(dǎo)功能，促進(jìn)腫瘤細(xì)胞發(fā)生浸潤。本研究發(fā)現(xiàn)，CD13、CD33、MPO免疫抗原表達(dá)陽性的患者血中nm23-H1的表達(dá)強(qiáng)度高于CD13、CD33、MPO免疫抗原表達(dá)陰性的患者，說明nm23-H1基因在AML患者血中呈現(xiàn)高表達(dá)，可能與nm23-H1參與AML患者血中原始和幼稚細(xì)胞異常增生有關(guān)[12-13]。作者還發(fā)現(xiàn)，通過化療治療后, AML完全緩解的患者血中nm23-H1出現(xiàn)低表達(dá)，而在復(fù)發(fā)患者中出現(xiàn)異常的高表達(dá)的情況，說明nm23-H1高表達(dá)預(yù)示AML患者預(yù)后多為不良，可作為評(píng)價(jià)治療效果和預(yù)后的特異性指標(biāo)。

綜上所述, AML免疫抗原CD13、CD33、MPO表達(dá)陽性患者血中nm23-H1蛋白呈現(xiàn)表達(dá)上調(diào)，而在完全緩解的患者中表達(dá)降低，臨床上可作為AML患者診斷和預(yù)后觀察的指標(biāo)。

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Expression of nm23-H1 protein in patients with acute myelocytic leukemia and its efficacy

REN Yu1, HE Aijun2, GE Fanmei1

(1.DepartmentofHematology; 2.DepartmentofGeneralSurgery,TheAffiliatedHospitalofYan′anUniversity,Yan′an,Shaanxi, 716000)

ABSTRACT:ObjectiveTo explore expression of nm23-H1 protein in patients with acute myelocytic leukemia (AML) and its efficacy. MethodsEighty six patients with AML were selected as observation group, while 79 normal people were selected as control group. ResultsPositive expression rates of immune classification from high to low in 86 patients with AML were 94.17% of CD33, 86.05% of MPO and 77.91% of CD13. Expression of nm23-H1 protein in CD13+ group was significantly higher than that in CD13- group (t=3.641, P<0.001). Expression of nm23-H1 protein in CD33+ group was significantly higher than that in CD33- group (t=2.699, P=0.008). Expression of nm23-H1 protein in MPO+ group was significantly higher than that in MPO- group (t=3.402, P=0.001). Expressions of serum nm23-H1 protein in initial treatment group, CR group and recurrence group were significantly higher than control group (P<0.05). ConclusionIn AML patients with positive expressions of immune antigen CD13, CD33and MPO, expression of serum nm23-H1 protein is up-regulated.

KEYWORDS:acute myelocytic leukemia; immune typing; enzyme linked immunosorbent assay

中圖分類號(hào):R 733.7

文獻(xiàn)標(biāo)志碼:A

文章編號(hào):1672-2353(2016)05-043-03

DOI:10.7619/jcmp.201605013

基金項(xiàng)目:陜西省延安市科技局項(xiàng)目(2014KW-03)

收稿日期:2015-11-19