李海燕

【摘 要】 目的：對(duì)酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)和中和抗體試驗(yàn)在麻疹抗體檢測(cè)中的應(yīng)用價(jià)值進(jìn)行分析探討。方法：將酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)作為麻疹抗體檢測(cè)中最為可靠和準(zhǔn)確的治療標(biāo)準(zhǔn)，然后將酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)的試劑盒對(duì)300份麻疹抗體滴度進(jìn)行檢測(cè)，對(duì)兩種檢測(cè)方法進(jìn)行分析和比較。結(jié)果：酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)的陽(yáng)性率明顯低于中和抗體試驗(yàn)，酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)的陽(yáng)性率隨著滴度的增加呈現(xiàn)出明顯的增高趨勢(shì)，抗體活性值與中和抗體試驗(yàn)的滴度呈現(xiàn)出明顯的正相關(guān)，兩組數(shù)據(jù)對(duì)比均差異顯著，具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。結(jié)論：酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)試劑盒在檢測(cè)滴度麻疹抗體時(shí)出現(xiàn)假陰性的幾率較高，檢測(cè)高滴度麻疹抗體時(shí)，兩種方法敏感性接近，可用于麻疹人群的抗體水平檢測(cè)。

【關(guān)鍵詞】 酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn) 中和抗體試驗(yàn) 麻疹抗體

酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)是酶免疫測(cè)定技術(shù)中應(yīng)用非常廣泛的一項(xiàng)專業(yè)技術(shù)，其基本原理是酶分子與抗體或抗體分子之間的共價(jià)結(jié)合，將已知的抗體吸附在固相載體的表面，使得酶標(biāo)記的抗原抗體反應(yīng)在固相表面進(jìn)行，用洗滌法將液相中的游離成分清理掉[1]。而中和抗體試驗(yàn)則是病毒或毒素與相應(yīng)的抗體結(jié)合之后，失去對(duì)易感動(dòng)物的致病力的試驗(yàn)方法，但由于需要組織培養(yǎng)，耗時(shí)費(fèi)力而受到限制[2]。本文用上述兩種不同方法檢測(cè)300份麻疹疫苗免疫前患者血清中的麻疹抗體水平，進(jìn)而對(duì)其臨床應(yīng)用效果進(jìn)行分析和評(píng)價(jià)，具體內(nèi)容如下：

1 資料與方法

1.1 一般資料

隨機(jī)選取未患過(guò)麻疹的患者作為本次的研究對(duì)象，年齡階段分別為3、5、7、8、9月齡，每組60例，3、5、7、8月齡的患者均未接受過(guò)麻疹疫苗的治療，9月齡的患者是指按免疫程序及時(shí)接種麻疹疫苗后一個(gè)月的患者。

1.2 檢測(cè)方法

1.2.1 酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法與抗體的檢測(cè)

使用酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)的試劑盒按照操作說(shuō)明對(duì)抗體進(jìn)行檢測(cè)，血清按照1：100的比例進(jìn)行稀釋后與之發(fā)生反應(yīng)，以200IU/L位判斷標(biāo)準(zhǔn)，≥200IU/L為陽(yáng)性，<200IU/L則為陰性，本次試驗(yàn)過(guò)程中同時(shí)設(shè)置空白、陽(yáng)性和陰性對(duì)照。

1.2.2 中和抗體的檢測(cè)

將準(zhǔn)備檢測(cè)的55℃血清在30分鐘內(nèi)進(jìn)行滅活，稀釋比例從1：2到1：1024，在96孔細(xì)胞版中，25各稀釋度血清分別與25麻疹病毒液進(jìn)行混合，在37℃中中和1個(gè)小時(shí)，然后將100的細(xì)胞放置在同等溫度、且濃度為5%的二氧化碳中進(jìn)行培養(yǎng)，觀察時(shí)間為一周左右，觀察內(nèi)容主要為細(xì)胞產(chǎn)生病變的程度，至一周半時(shí)可停止觀察，此時(shí)對(duì)其中和結(jié)果進(jìn)行記錄和分析，如果抗體滴度在1：2以上時(shí)，則顯示為陽(yáng)性，要確保每次試驗(yàn)都能做到陽(yáng)性、陰性血清對(duì)照和病毒滴度回滴，確定攻擊病毒的范圍為32-320TCID50。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

對(duì)以上收集到的兩組研究數(shù)據(jù)采用SPSS16.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行分析，酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)抗體與中和試驗(yàn)抗體的結(jié)果比較采用秩相關(guān)，采用Fisher精確概率對(duì)兩種試驗(yàn)方法的陽(yáng)性符合率進(jìn)行檢驗(yàn)，檢驗(yàn)的標(biāo)準(zhǔn)為=0.05。

2 結(jié)果

2.1 酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)和中和抗體試驗(yàn)對(duì)麻疹抗體定性檢測(cè)的結(jié)果分析

酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)的陽(yáng)性率明顯低于中和抗體試驗(yàn)，酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)的陽(yáng)性率隨著滴度的增加呈現(xiàn)出明顯的增高趨勢(shì)，抗體活性值與中和抗體試驗(yàn)的滴度呈現(xiàn)出明顯的正相關(guān)。

2.2 中和試驗(yàn)抗體下不同滴度的酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)抗體的定量結(jié)果

在300份血清檢測(cè)樣本中，酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)抗體的活性值在0.1-8130.2IU/L之間，平均值為47.54IU/L；中和試驗(yàn)抗體的活性值在<1：2～>1：1024之間，平均值為1：5.52。將酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)的定量結(jié)果分為3個(gè)等級(jí)，<200IU/L為陰性、200-800IU/L為低抗體保護(hù)水平，800IU/L以上則為中高抗體保護(hù)水平。確保中和試驗(yàn)抗體和酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)抗體在檢測(cè)結(jié)果上具有相關(guān)性。如表1：

2.3 不同滴度的中和抗體下兩種檢測(cè)方法的陽(yáng)性符合率分析

按照不同的滴度標(biāo)準(zhǔn)對(duì)中和抗體進(jìn)行分組，同時(shí)對(duì)酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)的結(jié)果進(jìn)行定性分析，通過(guò)檢測(cè)可發(fā)現(xiàn)兩種方式下陽(yáng)性符合率與滴度之間成正比例，滴度的增加會(huì)導(dǎo)致陽(yáng)性符合率不斷上升，在中和抗體的不同組別中，1：2和1：4組與其他各組的陽(yáng)性符合率呈現(xiàn)出明顯的差異性特征，其對(duì)比具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05），此外，1：8組和1：64以上組的陽(yáng)性符合率差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05），其余各組則無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。見表2：

3 討論

麻疹的主要發(fā)病人群多為兒童，由于他們的免疫系統(tǒng)并不十分成熟，所以在面臨此病時(shí)抵抗力較弱，導(dǎo)致死亡率比較高，而且麻疹的傳染性又較強(qiáng)，因此發(fā)病率整體較高[3]。隨著醫(yī)學(xué)技術(shù)手段的不斷發(fā)展和進(jìn)步，在治療麻疹方面已經(jīng)不再像過(guò)去那樣談之色變，麻疹疫苗的出現(xiàn)使得患病兒童的死亡率逐漸降低，在臨床治療上有著比較理想的效果。

盡管麻疹的較大范圍傳染已經(jīng)得到基本控制，但目前我國(guó)的麻疹治療形勢(shì)依然相當(dāng)嚴(yán)峻，麻疹疫苗只能在短時(shí)間內(nèi)起到預(yù)防和控制的作用，并無(wú)法從源頭上徹底治療。而且成人也會(huì)患此病，雖然幾率較小，但一旦出現(xiàn)，則說(shuō)明癥狀比較嚴(yán)重，通常情況下表現(xiàn)為患者的體溫維持在40℃左右，有麻疹粘膜斑，半數(shù)患者的皮疹有出血傾向，并伴有嗜睡等一系列癥狀。比較樂(lè)觀的是患者的并發(fā)癥的發(fā)生率較低，接受醫(yī)護(hù)人員的治療后效果較為理想。

就現(xiàn)階段有關(guān)麻疹的臨床研究來(lái)看，已經(jīng)取得了諸多方面的進(jìn)步，例如現(xiàn)在已經(jīng)有中和抗體試驗(yàn)、血凝抑制試驗(yàn)、酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)等多種方法對(duì)麻疹抗體水平的血清進(jìn)行檢測(cè)，其中酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)為麻疹抗體檢測(cè)中最為可靠和準(zhǔn)確的治療方法，但也存在一些弊端和缺陷，例如在檢測(cè)低水平的抗體時(shí)容易出現(xiàn)假陰性現(xiàn)象[6]。因此，即便檢測(cè)出了酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)的結(jié)果，也要對(duì)其中的相關(guān)數(shù)據(jù)進(jìn)行認(rèn)真、詳細(xì)地分析和研究，以確保檢測(cè)結(jié)果的真實(shí)性和可靠性。只有經(jīng)過(guò)反復(fù)的檢驗(yàn)，酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)才能廣泛的應(yīng)用于麻疹流行病的研究當(dāng)中，對(duì)具體患者的身體的免疫狀況進(jìn)行細(xì)致地觀察和分析，然后對(duì)檢測(cè)出的結(jié)果進(jìn)行評(píng)估和記錄，進(jìn)而為制定消除麻疹的有效措施提供強(qiáng)有力的科學(xué)依據(jù)。

本研究結(jié)果表明，酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)的陽(yáng)性率明顯低于中和抗體試驗(yàn)，酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)的陽(yáng)性率隨著滴度的增加呈現(xiàn)出明顯的增高趨勢(shì)，抗體活性值與中和抗體試驗(yàn)的滴度呈現(xiàn)出明顯的正相關(guān)，兩組數(shù)據(jù)對(duì)比均差異顯著，具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。由此可見，酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)試劑盒在檢測(cè)滴度麻疹抗體時(shí)出現(xiàn)假陰性的幾率較高，檢測(cè)高滴度麻疹抗體時(shí)，兩種方法敏感性接近，可用于麻疹人群的抗體水平檢測(cè)。因此，在面臨患者不同生命體征時(shí)，酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)和中和抗體實(shí)驗(yàn)都有著不同的優(yōu)勢(shì)和缺陷，應(yīng)根據(jù)具體的實(shí)際情況進(jìn)行比較和分析。

參考文獻(xiàn)

[1]傅燕，許國(guó)章，董紅軍等.酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)與中和抗體試驗(yàn)檢測(cè)麻疹抗體比較研究[J].中國(guó)預(yù)防醫(yī)學(xué)雜志，2011，12（07）：1024-1026.

[2]張金芳，丁曉光，王建國(guó)等.酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)和血球凝集抑制試驗(yàn)檢測(cè)健康人群麻疹抗體比較[J].中國(guó)計(jì)劃免疫，2010，02（05）：6-8.

[3]張晉琳，王保生，許曉國(guó)等.血凝抑制試驗(yàn)與酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)檢測(cè)麻疹抗體兩方法的比較[J].疾病監(jiān)測(cè)，2014，12（10）：472-473.