羅婕 田雙如 徐波

（長(zhǎng)沙醫(yī)學(xué)院基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院 湖南長(zhǎng)沙 410219）

關(guān)于益陽(yáng)市某餐館大腸桿菌中毒的調(diào)查報(bào)告

羅婕 田雙如 徐波

（長(zhǎng)沙醫(yī)學(xué)院基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院 湖南長(zhǎng)沙 410219）

目的：分析益陽(yáng)市食物中毒案列流行病學(xué)特點(diǎn)及其流行的原因，為今后類似的相關(guān)案列采取針對(duì)性的措施提供科學(xué)依據(jù)。方法：針對(duì)此次食物中毒案列的調(diào)查進(jìn)行科學(xué)的分析。結(jié)果：此次食物中毒均為因致病菌感染的食物中毒事件。

大腸桿菌 食物中毒 調(diào)查報(bào)告

大腸埃希氏菌類于腸桿菌科，歸屬于埃希菌屬，是人和許多動(dòng)物腸道中最主要且數(shù)量最多的一種細(xì)菌，主要寄生在大腸內(nèi)。它侵入人體一些部位時(shí)，起病一般較慢，也可急性起病。輕癥不發(fā)熱，主要癥狀為腹瀉，大便每天3～5次，呈黃色蛋花樣帶奶瓣，量多。病情繼續(xù)發(fā)展則出現(xiàn)發(fā)熱、嘔吐、食欲缺乏、腹脹、中毒性腸麻痹。在出現(xiàn)腸麻痹前腹瀉加重，可出現(xiàn)黏液血便。成人患者常急性起病，有臍周隱痛、腹鳴，偶有里急后重，表現(xiàn)為“痢疾樣”。在食品安全、環(huán)境監(jiān)測(cè)、疾病預(yù)防等方面造成了巨大的威脅，對(duì)人體健康造成了很大危害。下面我將深入研究一起由于大腸桿菌所引起的食物中毒事件。

1 事件的相關(guān)回顧

2015年，某餐館， 7人聚餐，吃完飯后5-7小時(shí)內(nèi)，先后5人發(fā)病。到當(dāng)天深夜發(fā)病住院人數(shù)4人。發(fā)病者的主要癥狀是為腹瀉，嘔吐、腹脹、并出現(xiàn)發(fā)熱溫度均在38℃以下，少數(shù)病人出現(xiàn)黏液血便。發(fā)病者去益陽(yáng)市四醫(yī)院采用抗菌相關(guān)治療和輸液補(bǔ)水對(duì)癥處理后，患者都痊愈并且無(wú)不良預(yù)后表現(xiàn)。

經(jīng)過(guò)去餐館調(diào)查，發(fā)現(xiàn)該公司食堂的衛(wèi)生條件差，廚房餐具保存不合格，防蠅防塵設(shè)施不合格，食材也不新鮮，有些食材在餐前一到兩天已經(jīng)買來(lái)。經(jīng)過(guò)調(diào)差和采訪相關(guān)食堂相關(guān)員工，初步確定是細(xì)菌性的食物中毒事件。

2 取樣

2.1 樣品來(lái)源： 當(dāng)天用餐所剩的食物，瘦肉1份，蝦1份，蔬菜1份，餐具2份，以及患者肛拭子1份、糞便樣品3份，共計(jì)9份檢樣。將涂抹樣品保存于緩沖蛋白胨肉湯中，其余都放置在無(wú)菌袋中冷藏保存。并帶回實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)。

3 菌種檢測(cè)

實(shí)驗(yàn)設(shè)備及材料：冰箱、溫箱、恒溫水浴、顯微鏡、均衡器或乳缽、天平、培養(yǎng)皿、試管、吸管、廣口瓶或三角瓶、載玻片、酒精燈、玻璃珠、試管架。

培養(yǎng)基和試劑：乳糖膽鹽發(fā)酵管G B 4 7 8 9.2 8、乳糖發(fā)酵管GB4789.28、EC肉湯GB4789.28、伊紅美藍(lán)瓊脂平板GB4789.28、生理鹽水、磷酸鹽緩沖稀釋液GB4789.28、革蘭氏染色液GB4789.28。

實(shí)驗(yàn)方法：

檢樣稀釋：無(wú)菌操作，將9份樣品分別放入225ml滅菌生理鹽水中，玻璃瓶?jī)?nèi)放入適量玻璃珠，經(jīng)充分振蕩后研磨成1：10的均勻稀釋液。固體檢樣選用均感器，以8000-10000r/min，做成1：10均勻稀釋液。用1ml無(wú)菌吸管吸取1：10稀釋液1ml，注入含有9ml滅菌生理鹽水中充分混勻，配成1：100稀釋液。另取1ml吸管重復(fù)以上操作。根據(jù)食品衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)［1］要求估計(jì)選擇3個(gè)稀釋度，每個(gè)接種度稀釋3管。

乳糖發(fā)酵實(shí)驗(yàn)： 將待檢樣品接種于乳糖膽鹽發(fā)酵管內(nèi)，每一個(gè)稀釋度接種3管于36+1℃溫箱中培養(yǎng)24+2h，若全部乳糖膽鹽發(fā)酵管都不產(chǎn)氣，則報(bào)告為大腸菌群陰性，如有產(chǎn)氣者按下列操作進(jìn)行。

分離培養(yǎng)：將產(chǎn)氣小管接種于伊紅美籃瓊脂平板上（糞便可接種于EC肉湯管內(nèi)，置入44.5+0.2℃水浴鍋中培養(yǎng)24+2h，如都不產(chǎn)氣則報(bào)告為陰性，如產(chǎn)氣則接種于伊紅美籃平板上），置入36+1℃溫箱中培養(yǎng)18-24h，取出，觀察菌落的形態(tài)，同時(shí)做革蘭氏染色及證實(shí)實(shí)驗(yàn)。

證實(shí)實(shí)驗(yàn)：在以上平板中挑取1-2個(gè)可疑菌落進(jìn)行革蘭氏染色，同時(shí)接種乳糖發(fā)酵管，置于36+1℃溫箱中培養(yǎng)18-24h，觀察產(chǎn)氣狀況，凡乳糖管產(chǎn)氣且革蘭氏染色為陰性的無(wú)芽孢桿菌，方可報(bào)告為大腸菌群陽(yáng)性［2］。

產(chǎn)氣原因：大腸菌群發(fā)酵乳糖產(chǎn)氣；腸球菌與其他革蘭氏陰性菌共同利用乳糖產(chǎn)氣（需要幾日才能進(jìn)行，如果樣品中原來(lái)就有乳糖，就不需要這么長(zhǎng)時(shí)間）；產(chǎn)芽孢菌發(fā)酵乳糖產(chǎn)氣；大腸菌群或非大腸菌群利用樣品中的葡萄糖或其他糖類物質(zhì)產(chǎn)氣。

4 討論

假設(shè)有30個(gè)大腸菌群在1000毫升樣品中。如果按9管法接種，分別接33。3毫升。這樣按照統(tǒng)計(jì)學(xué)的方法計(jì)算這9管中能有大腸菌群生長(zhǎng)的概率，大概只有一管有可能有大腸菌群。如此類推，按一定公式推算出mpn表。陽(yáng)性管數(shù)就是可能有大腸菌群的管。

大腸菌群陰性的致病菌也不是沒(méi)有，如有些氣單胞菌、類志賀鄰單胞菌，也能引起腹瀉。因此大腸菌群陽(yáng)性不代表樣品中一定有致病菌，但比大腸菌群陰性的樣品有致病菌的概率更高。

5 結(jié)論

這次細(xì)菌性中毒事件由于準(zhǔn)備不充分未能采集所有的樣品和患者癥狀。有些樣品餐館可能已經(jīng)做了消毒處理。從實(shí)驗(yàn)結(jié)果分析，本次食物中毒事件瘦肉中分離出的可疑菌落，經(jīng)過(guò)生化檢測(cè)和血清學(xué)檢測(cè)，根據(jù)微生物檢驗(yàn)國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)《GB 4789.4-2010 食品衛(wèi)生微生物學(xué)檢驗(yàn)大腸桿菌檢驗(yàn)》，可以明確本次食物中毒由大腸桿菌引起。大腸桿菌所引起的食物中毒大多數(shù)發(fā)生在夏秋季節(jié)。大腸桿菌所引起食物中毒主要是在肉奶類較多。預(yù)防大腸桿菌食物中毒首先應(yīng)應(yīng)禁止食用病畜、病禽，注意飲食、飲水衛(wèi)生，對(duì)肉、禽、奶、蛋類食品加工，儲(chǔ)存應(yīng)嚴(yán)防污染。食用時(shí)要煮熟、煮透、存放，加工時(shí)生熟食物要分開(kāi)。相關(guān)的職能部門也要做好監(jiān)督抽查檢查工作。

［1］中國(guó)人民共和國(guó)衛(wèi)生部.食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)食品微生物學(xué)檢驗(yàn)大腸桿菌檢驗(yàn)［Z］.2010

［2］.何金林.夏鐵英.國(guó)內(nèi)細(xì)菌性食物中毒檢驗(yàn)進(jìn)展［J］.中國(guó)衛(wèi)生檢驗(yàn)雜志，2015.12（8）：1015-1016.

R599

A

1674-2060（2016）02-0052-01

長(zhǎng)沙醫(yī)學(xué)院大學(xué)生創(chuàng)新性項(xiàng)目（醫(yī)教〔2014〕10號(hào)）