朱葉芬　胡婷霞　石玲玲

摘 要：目的：建立高效液相色譜法測定卡培他濱原料中雜質(zhì)ABC含量。方法：色譜柱：Agilent ZORBAX SB-Aq柱（4.6×250mm，5mm）；流動(dòng)相：A相0.1%醋酸：甲醇：乙腈65：30：5，B相0.1%醋酸：甲醇：乙腈15：80：5，梯度洗脫；檢測波長： 250nm；流速：1.0ml/min；柱溫：40℃。結(jié)果：卡培他濱雜質(zhì)A的含量按外標(biāo)法、自身對(duì)照法和加校正因子的自身對(duì)照法計(jì)算分別為 0.073%，0.078%，0.077%；雜質(zhì)B的含量分別為0.034%、0.026%、0.033%；雜質(zhì)C的含量分別為0.030%、0.029%、0.031%。結(jié)論：卡培他濱雜質(zhì)A跟C的含量選擇自身對(duì)照法，雜質(zhì)B的含量選擇加校正因子的自身對(duì)照法。

關(guān)鍵詞：高效液相色譜方法；卡培他濱；雜質(zhì)

市面上的卡培他濱是由羅氏生產(chǎn)的希羅達(dá)，用于聯(lián)合化療治療晚期或轉(zhuǎn)移性結(jié)直腸癌、晚期或轉(zhuǎn)移性胃癌，也適用于紫杉醇和化療方案治療無效的晚期原發(fā)性或轉(zhuǎn)移性乳腺癌的進(jìn)一步治療。本文在美國藥典的基礎(chǔ)上[1]優(yōu)化色譜條件，建立了更合適的色譜條件對(duì)卡培他濱的雜質(zhì)進(jìn)行更好的控制。該方法簡便，精確，對(duì)卡培他濱制劑的質(zhì)量研究具有積極意義。

1 儀器、試劑與對(duì)照品

Agilent 1100高效液相色譜儀，紫外檢測器；METTLER TOLEDO XS105 DualRange 電子天平

甲醇和乙腈，色譜純；冰醋酸為分析純；水為純水

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件

色譜柱：Agilent ZORBAX SB-Aq （4.6×150mm，5μm）；流動(dòng)相A：0.1%冰醋酸：甲醇：乙腈65：30：5，B相0.1%冰醋酸：甲醇：乙腈15：80：5，梯度洗脫。0～5min，A相100%；5～20min，A相100%～60%；20～30min，A相60%～50%；50min，A相50%；流速1ml/min，柱溫40℃，波長250nm

2.2 對(duì)照品儲(chǔ)備液的制備

分別取雜質(zhì)ABC約11.25mg精密稱定，至同一250ml容量瓶中，加水：甲醇：乙腈（65：30：5）的混合溶液振搖至完全溶解，再加水：甲醇：乙腈（65：30：5）的混合溶液稀釋定容至刻度，作為對(duì)照品儲(chǔ)備液。

2.3 線性范圍考察

精密吸取上述對(duì)照品儲(chǔ)備液0.2ml、0.5ml、0.8ml、1.0ml、1.2ml、1.5ml，分別加水：甲醇：乙腈（65：30：5）的混合溶液稀釋至25ml，作為20%、50%、80%、100%、120%、150%對(duì)照品溶液，各進(jìn)樣10μl，按“2.1色譜條件”分析。以濃度（μg/ml）為橫坐標(biāo)（X），峰面積為縱坐標(biāo)（Y）進(jìn)行線性回歸，結(jié)果見表1。試驗(yàn)結(jié)果表明在各自的線性范圍內(nèi)，三種雜質(zhì)均有良好的相關(guān)性。

2.4 供試品溶液的制備

取卡培他濱原料適量，精密稱定至25ml容量瓶中，加水：甲醇：乙腈（65：30：5）的混合溶液適量使溶解，再加水：甲醇：乙腈（65：30：5）的混合溶液稀釋定容至刻度，制成約0.6mg/ml的溶液作為供試品溶液。

2.5 重復(fù)性試驗(yàn)

分別精密稱取批號(hào)為110701的卡培他濱原料按“2.4”項(xiàng)下的方法制得6份供試品溶液，各進(jìn)樣10μl，按“2.1色譜條件”分析。按自身對(duì)照法、外標(biāo)法、加校正因子的自身對(duì)照法以峰面積計(jì)算，比較三種方法，結(jié)果見表2

2.6 加樣回收率實(shí)驗(yàn)

取“2.5”項(xiàng)下的卡培他濱原料（批號(hào)110701）約15mg量，分別精密稱定，置25ml容量瓶中，分別加入“2.2”項(xiàng)下對(duì)照品儲(chǔ)備液0.2ml、0.8ml、1.0ml、1.2ml各3份，按“2.4”項(xiàng)下制得12份供試品溶液，各進(jìn)樣10μl；同時(shí)取“2.3”項(xiàng)下100%對(duì)照品溶液進(jìn)樣10μl，以“2.5 重復(fù)性試驗(yàn)”項(xiàng)下的測定結(jié)果（自身對(duì)照法、外標(biāo)法、加校正因子的自身對(duì)照法）為批號(hào)110701的含量，按外標(biāo)法以峰面積計(jì)算，結(jié)果見表3。

2.7 溶液穩(wěn)定性試驗(yàn)

取“2.3”項(xiàng)下100%對(duì)照品溶液分別于0、2、4、6、8、10、12小時(shí)進(jìn)樣10μl。試驗(yàn)結(jié)果表明，溶液在12小時(shí)內(nèi)穩(wěn)定。

2.8 樣品含量測定

取卡培他濱原料3批（110701、110702、110703）各兩份，按“2.4”項(xiàng)制得供試品溶液，各進(jìn)樣10μl；同時(shí)取“2.3”項(xiàng)下100%對(duì)照品溶液進(jìn)樣10μl，按外標(biāo)法、自身對(duì)照法、加校正因子的自身對(duì)照法以峰面積計(jì)算，結(jié)果見表4。

3 討論

本文用外標(biāo)法、自身對(duì)照法、加校正因子的自身對(duì)照法三種方法對(duì)卡培他濱中三種雜質(zhì)含量的測定方法進(jìn)行了選擇，雜質(zhì)A跟C的含量用三種方法測得的結(jié)果一致，自身對(duì)照法最簡便，故雜質(zhì)A跟C的含量選擇自身對(duì)照法；雜質(zhì)B相對(duì)于卡培他濱的校正因子為0.78，故不能直接用自身對(duì)照法來計(jì)算，實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明外標(biāo)法及加校正因子的自身對(duì)照法計(jì)算結(jié)果一致，故雜質(zhì)B的含量選擇加校正因子的自身對(duì)照法。

參考文獻(xiàn)

[1] 卡培他濱《美國藥典》標(biāo)準(zhǔn)