王蘭會?。ㄉ綎|省臨沂市河?xùn)|區(qū)畜牧獸醫(yī)局　276034）

組織切片技術(shù)在獸醫(yī)診斷中的應(yīng)用和常見問題的分析

王蘭會（山東省臨沂市河?xùn)|區(qū)畜牧獸醫(yī)局276034）

利用組織切片技術(shù)進行病理診斷是獸醫(yī)學(xué)中最具權(quán)威性的診斷方法之一。所謂組織切片，即取動物某一實體器官上的組織塊用石蠟包埋，然后進行切片及染色的制片過程。在整個制片過程中，包括有取材與固定，脫水與透明，浸蠟與包埋，切片與粘片，染色與封固五大步驟。制作時，對每一步都必須認真對待，否則將達不到預(yù)期效果，甚至導(dǎo)致制片工作的徹底失敗。病理診斷的準確性，一方面取決于獸醫(yī)師的技術(shù)水平，另一方面取決于組織病理片處理和染色效果。然而，在現(xiàn)實中，組織切片技術(shù)往往得不到應(yīng)有的重視，在目前臨床獸醫(yī)工作中普遍地存在著一些問題，由于標本固定時間不足，組織脫水不徹底，某些環(huán)境因素造成試劑濃度改變等，都直接影響到制片質(zhì)量，給臨床病理和流行病學(xué)診斷帶來一定的困難。筆者在多年的獸醫(yī)工作實踐中體會到∶組織切片技術(shù)必須把好以下幾點：

1　重視取材固定操作

取材要盡可能新鮮，為了防止器官組織的壞死，速度要很快。取材一般采用鋒利的刀片或剪刀，為了避免組織器官的破裂變形，不可以采用鑷子壓迫組織。所選取組織塊的厚薄、大小都要適度，如果組織塊過厚或過大，則固定液不易滲透，固定效果則比較差而組織塊過薄或過小，則在固定脫水時，容易發(fā)生扭曲變形等狀況。取材還應(yīng)該有代表性，能夠反映出組織的基本結(jié)構(gòu)此外，還要采集健康部位及病變部位交叉部分的組織，這樣才能夠通過兩者的對照，從而清晰的看到各種病理變化情況。通常情況下，配置好的固定液最好要及時使用，配好后應(yīng)貯存于陰涼處，避光保存，以免發(fā)生化學(xué)變化而失去其固定作用。固定要及時，這樣才能保證細胞與正常生存狀態(tài)時相似固定液要充分，一般情況下約為材料塊的倍左右，對于水分含量較多的材料，要更換一次新液，避免腐敗的發(fā)生材料固定好，應(yīng)該保存密封容器內(nèi)，并且在容器外貼上標簽，及時注明材料來源、固定液以及日期等主要信息。材料固定之后，除了乙醇之外，其他固定液必須沖洗干凈，否則殘留在組織材料內(nèi)的固定液可能會產(chǎn)生結(jié)晶或沉淀，而不利于染色的完成。

2　包埋要認真，切片要完整

病理組織切片多采用浸蠟包埋的方法，透蠟溫度應(yīng)保持恒定。包埋操作要迅速，盡量在最短的時間內(nèi)完成石蠟的透人過程，避免引起組織變脆、收縮或變硬等。通常情況下，包埋操作可以在恒溫箱內(nèi)完成，為了避免由于溫度的變化導(dǎo)致組織材料與石蠟的分離，組織材料切面應(yīng)該朝下放置，并采用同溫的鑷子輕輕撥動材料，使其平整，待石蠟?zāi)掏耆珪r方可取出備用。切片時，一定要保證所采取的切片刀鋒利，否則可能會造成切片斷裂和不完整切片時，注意刀片的放置的傾角要適當，傾角過小容易引起皺起，過大可能會使切片上卷一般選擇口川厚度的切片，如果切片過厚可能會導(dǎo)致雙層細胞現(xiàn)象，不利于觀察和病理診斷。在貼片操作時，要先采用小鑷子夾取已經(jīng)割開的石蠟帶，置于恒溫水浴鍋水面之上展片之后，將載玻片做好標記，置于恒溫烘箱內(nèi)生右，防止染片過程中發(fā)生脫片。

3　脫蠟石蠟切片

脫蠟前切片要經(jīng)烘烤，這種使組織和玻片粘貼牢固。組織切片脫蠟應(yīng)徹底，脫蠟好壞主要取決于二甲苯的溫度和時間，所有的時間都是指新的二甲苯在室溫25℃以下時，如果二甲苯是用過一段時間，切片又比較厚，室溫低應(yīng)增加脫蠟時間，脫蠟不凈是影響染色不良的重要原因之一。

4　染色石蠟切片

經(jīng)水洗后放入蘇木素染色液中，一般情況下新配的蘇木素染液中只需染1～3min左右，應(yīng)根據(jù)染片的多少，逐步把染色時間延長。蘇木素染色后，不易在分化液中停留時間過長，切片分化應(yīng)在鏡下觀察，分化過度，應(yīng)水洗后重新在蘇木素染液中染色，在水洗分化和使切片在自來水或稀的氨水中充分變藍（藍化）。新配的伊紅染色塊，切片染色不易過長，應(yīng)根據(jù)染切片的多少逐步延長染色時間，切片使伊紅染后，分化時間要短。

5　脫水切片染色

通過各級酒精脫水，首先從低濃度到高濃度。低濃度酒精對伊紅有分化作用，切片經(jīng)過低濃度時要短，向高濃度逐漸延長脫水時間，脫水不徹底，使切片發(fā)霧，在顯微鏡下組織結(jié)構(gòu)模糊不清。

6　透明與封片

石蠟組織切片染色經(jīng)過脫水后必須經(jīng)二甲苯處理，使切片透明，才能用樹膠封片。應(yīng)引起注意的是，二甲苯純度不純使切片透明不夠，會影響切片質(zhì)量（工作中曾發(fā)現(xiàn)新進貨的二甲苯試劑中散發(fā)出濃厚的汽油味，嚴重影響切片質(zhì)量）。

總之，組織切片技術(shù)在基礎(chǔ)獸醫(yī)學(xué)研究和臨床獸醫(yī)應(yīng)用中都是不可缺少的。通過大量的理論研究及工作實踐，筆者認為在病理組織切片染色操作過程中，每一個步驟都應(yīng)該認真對待科學(xué)處理，否則將會對制片的質(zhì)量造成一定的影響。如取材大小要合適，標本應(yīng)及時固定，脫水應(yīng)徹底，包埋要放置平整，切片要完整。一個比較完美的切片從表面觀察應(yīng)該平整、無破裂、沒有皺褶，厚薄適中、分化也比較好蘇木素一伊紅染色的對比度好標簽清晰明了。要想提高切片的質(zhì)量水平，除了規(guī)范化的操作之外，還要求操作人員高度的責任心，在實際工作中總結(jié)經(jīng)驗，認真分析影響切片質(zhì)量的每一個小因素，才能制作出質(zhì)量高、比較完美的病理組織切片，從而為臨床獸醫(yī)診斷和基礎(chǔ)獸醫(yī)研究提供依據(jù)

S854.4+3文獻標識碼：B

1007-1733（2016）08-0080-02

2016-04-06）