劉業(yè)萍（鄂爾多斯市藥品醫(yī)療器械檢驗(yàn)研究中心　鄂爾多斯　017000）

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福林酚法測(cè)定注射用肌氨肽苷中多肽的含量

劉業(yè)萍（鄂爾多斯市藥品醫(yī)療器械檢驗(yàn)研究中心鄂爾多斯017000）

摘要：目的：建立福林酚法測(cè)定注射用肌氨肽苷中多肽的含量。方法：用國家藥品標(biāo)準(zhǔn)肌氨肽苷注射液規(guī)定的福林酚法測(cè)定注射用肌氨肽苷中多肽的含量。結(jié)果：牛血清蛋白在0.030mg～0.270mg（r=0.99964）范圍內(nèi)與吸光度值呈現(xiàn)良好的線性關(guān)系，平均加樣回收率為99.28%，三批樣品多肽含量均在85.0%～115.0%之間。結(jié)論：該方法結(jié)果可靠、專屬性強(qiáng)，可用于注射用肌氨肽苷的質(zhì)量研究。關(guān)鍵詞：福林酚法注射用肌氨肽苷多肽含量測(cè)定

注射用肌氨肽苷是以健康家兔肌肉和心肌為原料，提取含有多種血管活性物質(zhì)，利用現(xiàn)代生物技術(shù)手段，加適量賦形劑經(jīng)冷凍干燥制成的凍干粉針劑。它含有生物活性多肽具有強(qiáng)大的擴(kuò)張血管作用，擴(kuò)張冠脈的能力是硝酸甘油的240倍[1]，用于治療腦功能紊亂、腦卒中、腦供血不足所致的腦功能減退、周圍神經(jīng)病。本研究依據(jù)國家藥品標(biāo)準(zhǔn)肌氨肽苷注射液[2]，對(duì)三批樣品中多肽的含量測(cè)定方法進(jìn)行研究，為成品質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的制定提供依據(jù)。

1　儀器與試藥

1.1儀器：島津UV-2450型紫外可見分光光度計(jì)，普利賽斯92SM-202A型電子分析天平。

1.2試藥：牛血清蛋白對(duì)照品（中國食品藥品檢定研究院，批號(hào)140619-201421）；福林酚試液；水為超純水，其余試劑為分析純；試驗(yàn)用樣品：注射用肌氨肽苷（1號(hào)樣品：遼寧玉皇藥業(yè)有限公司，批號(hào)14071801、2號(hào)樣品：遼寧玉皇藥業(yè)有限公司，批號(hào)14101201；3號(hào)樣品：湖南五洲通藥業(yè)有限責(zé)任公司，批號(hào)140507）。

2　方法與結(jié)果

2.1溶液的制備

2.1.1堿性銅試液的制備：取氫氧化鈉10g，碳酸鈉50g，加水400mL使溶解，作為甲液；取酒石酸鉀0.5g，加水50mL使溶解，另取硫酸銅0.25g，加水30mL使溶解，將兩液混合作為乙液。臨用前，合并兩液，并加水至500mL。

2.1.2對(duì)照品溶液的制備：取牛血清蛋白對(duì)照品，加水制成每1mL中含0.3mg的溶液。

2.1.3供試品溶液的制備：取本品3支，分別加水制成每1mL中含多肽0.14mg的溶液，作為供試品溶液。

2.2實(shí)驗(yàn)方法

2.2.1標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備：精密量取對(duì)照品溶液0.0mL、0.1mL、0.3mL、0.5mL、0.7mL、0.9mL，分別置具塞試管中，各加水至1.0mL，分別加入堿性酮試液1.0mL，搖勻，各加入福林酚試液4.0mL，立即混勻，置55℃水浴中準(zhǔn)確反應(yīng)5min，置冷水浴中10min，在650nm波長處測(cè)定吸光度；同時(shí)以0號(hào)管作為空白。以吸光度為縱坐標(biāo)，對(duì)照品濃度（mg）為橫坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。牛血清蛋白對(duì)照品濃度在0.030～0.270mg范圍內(nèi)與吸光度值呈現(xiàn)良好的線性關(guān)系。回歸方程為：y=2.38576x+0.00539，r=0.99964。

2.2.2測(cè)定法：精密量取供試品溶液1.0mL，照標(biāo)準(zhǔn)曲線制備項(xiàng)下方法，自“再加入堿性酮試液”起，依法測(cè)定，自標(biāo)準(zhǔn)曲線上查得供試品溶液的濃度，并乘以稀釋倍數(shù)。

2.2.3穩(wěn)定性考察：取批號(hào)為14071801的1號(hào)樣品中的1支進(jìn)行溶液穩(wěn)定性考察，前1h，15min檢測(cè)1次吸光度，1h后，30min檢測(cè)1次吸光度，考察至3h，檢測(cè)結(jié)果見表1。結(jié)果表明樣品在1h之內(nèi)基本穩(wěn)定，通常樣品吸光度檢測(cè)在15min內(nèi)完成。

表1　溶液穩(wěn)定性考察結(jié)果

2.2.4準(zhǔn)確度試驗(yàn)：取1號(hào)樣品6支，分別加水至25mL量瓶中，分別精密量取該溶液0.3mL，各精密加入牛血清蛋白對(duì)照品（0.3mg/mL）0.4mL，加水至1.0mL，按“2.2.2”項(xiàng)下方法，依法測(cè)定，并計(jì)算回收率，回收率結(jié)果見表2。結(jié)果表明，多肽含量測(cè)定平均回收率為99.28%，RSD=1.10%。

表2　溶液準(zhǔn)確度試驗(yàn)結(jié)果

2.2.5供試品中多肽含量測(cè)定：取3批樣品，每批分別按“2.2.2”項(xiàng)下方法測(cè)定，測(cè)定結(jié)果見表3。測(cè)定結(jié)果表明，3批供試品中多肽的含量以標(biāo)示量計(jì)均在85.0%~115.0%之間。

表3　樣品含量測(cè)定結(jié)果

3　討論

福林酚試劑對(duì)反應(yīng)的酸堿度要求比較嚴(yán)格，通常情況下，該試劑僅在酸性條件下穩(wěn)定，但此反應(yīng)是在pH=10的情況下發(fā)生的，因此，當(dāng)福林酚試劑加到堿性銅溶液中時(shí)，必須立即混勻才能發(fā)生反應(yīng)；實(shí)驗(yàn)過程中，對(duì)照液和樣品使用的移液管需潔凈、干燥，防止加入溶液量不準(zhǔn)確；當(dāng)置水浴中保溫時(shí)，各管所處的反應(yīng)區(qū)溫度應(yīng)均勻，否則對(duì)照液將不呈線性關(guān)系。

綜上所述，用國家藥品標(biāo)準(zhǔn)肌氨肽苷注射液規(guī)定的福林酚法測(cè)定多肽的含量，可用于注射用肌氨肽苷質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的研究。

參考文獻(xiàn)

[1]吳限，劉慶發(fā)，王喜莉.肌氨肽苷注射液臨床療效綜述[J].黑龍江醫(yī)藥，2006，19（3）：215-216.

[2]國家食品藥品監(jiān)督管理局.國家藥品標(biāo)準(zhǔn).化學(xué)藥品地標(biāo)升國標(biāo)第16冊(cè)，2003：119-120.

中圖分類號(hào)：R927.2

文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：A

文章編號(hào)：1672-8351（2016）01-0002-02