李曲文，陳愛平，謝芳欽，林震宇

(1、福建省疾病預防控制中心，福建350001；2、福建省人獸共患病研究重點實驗室，福建350001)

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·病例報告·

與腦膜炎奈瑟菌血清交叉的落菲不動桿菌的鑒定

李曲文，陳愛平，謝芳欽，林震宇

(1、福建省疾病預防控制中心，福建350001；2、福建省人獸共患病研究重點實驗室，福建350001)

關(guān)鍵詞：腦膜炎奈瑟菌；洛菲不動桿菌；血清交叉

不動桿菌屬（Acinetobacter）歸于奈瑟菌科，不動桿菌屬為一群不發(fā)酵糖類、氧化酶陰性、硝酸鹽還原陰性、不能運動的革蘭陰性桿菌。菌體多為球桿狀，常成雙排列，看似雙球菌[1]。有時臨床易于腦膜炎奈瑟菌混淆。本文對一株與腦膜炎奈瑟菌有血清交叉的洛菲不動桿菌的鑒定報告如下。

1　材料與方法

1.1菌株來源醫(yī)院從一個8個月幼兒腦脊液培養(yǎng)分離到一株疑似腦膜炎奈瑟菌。（上機VITEK 2奈瑟菌（NH）鑒定卡：鑒定編碼：3237400000，提示腦膜炎奈瑟菌，鑒定率93%）。

1.2實驗材料血平板、巧克力平板購自環(huán)凱有限公司；乳膠凝集試劑購自英國OXOID公司；流腦診斷血清購自天津生物芯片公司，PCR反應試劑、DL 2000 Marker、購自Takara公司；瓊脂糖、溴化乙錠(10mg/m1)等購自上海生工公司。Gel Doc XR+凝膠成像系統(tǒng)，Basic電泳儀，PCR擴增儀為G-Storm（英國GeneTech公司）。

1.3基因引物本研究所用的基因引物（參考文獻[2]），全長16S RNA基因（參考文獻[3])，寡核苷酸和測序均由上海生工生物工程技術(shù)服務有限公司合成。

1.4模板的制備分純的細菌菌落，直接刮取適量于300μl的純水制備成菌懸液，100℃煮沸裂解10min，10000r/min離心5min，取上清做為PCR檢測的DNA模板。

1.5PCR反應條件PCR反應均采用20μl的反應體系，各組成成分的終濃度分別為：rTaq DNA聚合酶0.5U，dNTP 200μmol/L，上游引物0.4μmol/L，下游引物0.4μmol/L，DNA模板3μl。

1.6測序按照按天根技術(shù)有限公司細菌基因組提取說明書進行，常規(guī)PCR后，由上海生工生物工

2　結(jié)果

⑴革蘭染色：革蘭陰性球桿菌。

⑵氧化酶：陰性。

⑶生化鑒定情況：①上機VITEK-2革蘭陰性（GN）鑒定卡：鑒定編碼：0040000100100003，提示洛菲不動桿菌，鑒定率98%。②API20 NE編碼為0000002提示洛菲不動桿菌，鑒定率98.9%。

⑷流腦乳膠凝集：A群（+++）、B群（+++）、C群（-）、W135群（-）。

⑸流腦血清凝集：A群（+++）、B群（-）、C群（-）、W135群（-）。

（6)實時熒光PCR：流行性腦膜炎雙球菌核酸測定為陰性。

⑺常規(guī)PCR檢測結(jié)果：CrgA-，Orf-2(A)-，SiaD (B)-，SiaD(C)-，SiaD(D)-，SiaD(W135)-，排除流腦。

⑻全長16S RNA基因測序結(jié)果：為不動桿菌屬，鑒定率99.9%

3　討論

不動桿菌屬為一類非發(fā)酵糖革蘭陰性桿菌，臨床主要以鮑曼不動桿菌和洛菲不動桿菌為主，其廣泛分布于自然界、醫(yī)院、人體體表以及人體的上呼吸道內(nèi)，是一種引起的機會性感染包括皮膚傷口感染，泌尿生殖道感染，肺炎，肺膿腫，還可引起敗血癥，心內(nèi)膜炎，腦膜炎，腦膿腫等[4-6]。洛菲不動桿菌，專性需氧菌，營養(yǎng)要求不高，普通培養(yǎng)基上生長良好。在血平板平板上經(jīng)35℃~37℃培養(yǎng)18h~24h后，可形成圓形、灰白色、光滑、濕潤、邊緣整齊、直徑2~3mm的菌落，無色素形成；菌落較小，直徑為1~1.5mm；菌體多為球桿狀，常成雙排列，看似雙球菌，有時不易脫色，可單個存在，無芽胞、無鞭毛，黏液型菌株有莢膜。

而腦膜炎奈瑟菌專性需氧，5% CO2條件下生長更佳。35℃培養(yǎng)18~24h后可見圓形、灰褐色、濕潤、光滑、邊緣整齊、直徑1~2mm的小菌落。鏡檢一般為腎形或豆形革蘭陰性雙球菌，兩菌接觸面平坦或略向內(nèi)陷，直徑0.6~0.8μm。該菌鑒定主要通過氧化酶、糖類發(fā)酵和血清學等試驗以及培養(yǎng)生長特點進行[7，8]。奈瑟菌為氧化酶陽性，葡萄糖、麥芽糖陽性。

兩者鑒別要點，培養(yǎng)物經(jīng)涂片、染色，如為革蘭陰性成雙排列的球桿菌，形態(tài)似奈瑟菌；KIA底層及斜面均不變色、無動力；氧化酶陰性，硝酸鹽還原試驗陰性，可初步確定為不動桿菌[9，10]。

本文中的洛菲不動桿菌，與流腦乳膠凝集：A群（+++）、B群（+++）和流腦A群（+++）血清凝集，但經(jīng)實時熒光PCR、常規(guī)PCR、全長16S RNA基因排除腦膜炎奈瑟菌，這提醒我們在今后的檢驗工作中應該注意不動桿菌屬與奈瑟菌屬的鑒別。

參考文獻

[1]Turton JF，Shah J，Ozongwu C，et al．Incidence of Acinetobacter species other than A. baumannii among clinical isolates of Acine-

中圖分類號：R446.5，R378.1+5

文獻標識碼：A

文章編號：1674-1129(2016)03-0402-02

DOI：10.3969/j.issn.1674-1129.2016.03.049

基金項目：福建省衛(wèi)生和計劃生育委員會青年科研課題（2014-1-26）程技術(shù)服務有限公司進行測序后在NCBI網(wǎng)站進行Blast。