梁英杰，周德鵬，李　錚，徐　華，宋玉印

(遼河油田總醫(yī)院檢驗(yàn)科，遼寧盤錦 124010)

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·臨床研究·

根據(jù)NCCLS-EP9-A2方案對(duì)不同生化檢測(cè)系統(tǒng)血清鈣可比性分析

梁英杰，周德鵬，李錚，徐華，宋玉印

(遼河油田總醫(yī)院檢驗(yàn)科，遼寧盤錦 124010)

摘要:目的通過(guò)對(duì)血清鈣不同檢測(cè)系統(tǒng)的測(cè)定進(jìn)行方法比對(duì)和偏倚評(píng)估，探討血清鈣在不同檢測(cè)系統(tǒng)間測(cè)定結(jié)果的可比性，為不同實(shí)驗(yàn)室檢驗(yàn)結(jié)果的互認(rèn)和醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)室正確度認(rèn)可提供數(shù)據(jù)。方法參考美國(guó)臨床實(shí)驗(yàn)室標(biāo)準(zhǔn)化委員會(huì)(NCCLS)的EP9-A2文件，以寧波美康生物科技股份有限公司MS-880生化分析儀、寧波美康生物科技股份有限公司試劑、寧波美康生物科技股份有限公司校準(zhǔn)品和質(zhì)控品組成的檢測(cè)系統(tǒng)1(參加室間質(zhì)評(píng)成績(jī)優(yōu)秀，定期校準(zhǔn))為比較方法(X),檢測(cè)系統(tǒng)2是以另一臺(tái)日立7600-020生化分析儀為實(shí)驗(yàn)方法(Y),用患者新鮮血清測(cè)定鈣離子，計(jì)算(X)和(Y)之間的相對(duì)偏差(SE%)和預(yù)期偏差的可信區(qū)間，以CLLA′88規(guī)定的室間質(zhì)評(píng)為標(biāo)準(zhǔn),允許誤差范圍定為1/2，以不同檢測(cè)系統(tǒng)的測(cè)定結(jié)果判斷在不同醫(yī)學(xué)決定水平的可比性。結(jié)果該實(shí)驗(yàn)中鈣在兩種生化分析系統(tǒng)不同醫(yī)學(xué)決定水平處檢測(cè)結(jié)果的預(yù)期偏倚在允許誤差范圍內(nèi)，線性回歸方程及相關(guān)性良好(r2>0.95),結(jié)果具有可比性。結(jié)論在嚴(yán)格按照操作規(guī)程進(jìn)行校準(zhǔn)和質(zhì)控在控的前提下，使用同一檢測(cè)方法及兩種分析系統(tǒng)測(cè)定血清鈣的結(jié)果基本一致，在同一實(shí)驗(yàn)室可以同時(shí)使用這2種系統(tǒng)檢測(cè)相同的項(xiàng)目。

關(guān)鍵詞:檢測(cè)系統(tǒng)；偏倚評(píng)估；血清鈣；正確度

檢測(cè)系統(tǒng)作為一個(gè)體系，主要是指包含完成一個(gè)檢驗(yàn)項(xiàng)目所涉及的儀器、試劑、校準(zhǔn)物、保養(yǎng)計(jì)劃、檢驗(yàn)程序等的組合。其中，保證實(shí)現(xiàn)同一檢驗(yàn)項(xiàng)目不同檢驗(yàn)系統(tǒng)結(jié)果的可比性是質(zhì)量管理的目標(biāo)和重點(diǎn)。目前ISO/IEC17025《檢測(cè)和校準(zhǔn)實(shí)驗(yàn)室能力的同用要求》和ISO/15189《醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)室-質(zhì)量和能力的專用要求》是參考實(shí)驗(yàn)室認(rèn)可的兩個(gè)國(guó)際標(biāo)準(zhǔn)均對(duì)檢驗(yàn)結(jié)果的可比性和溯源性提出了明確的要求，上述標(biāo)準(zhǔn)強(qiáng)調(diào)主要是比對(duì)實(shí)驗(yàn)，是檢驗(yàn)工作者實(shí)現(xiàn)準(zhǔn)確度溯源和患者標(biāo)本檢驗(yàn)結(jié)果可比性的重要手段。目前在中國(guó)，檢驗(yàn)界關(guān)注和討論的熱點(diǎn)是各個(gè)地區(qū)、各個(gè)實(shí)驗(yàn)室均大量使用自建檢測(cè)系統(tǒng)[1](A+B+C即實(shí)驗(yàn)儀器、校準(zhǔn)品、試劑均來(lái)自不同廠家)，在這樣的情況下，檢驗(yàn)結(jié)果如何進(jìn)行比對(duì)實(shí)驗(yàn)。怎樣評(píng)估不同檢測(cè)系統(tǒng)檢驗(yàn)結(jié)果的偏差[2]，如何判斷不同檢測(cè)系統(tǒng)間結(jié)果的可比性[3]，就更加需要一定的數(shù)據(jù)進(jìn)行評(píng)估。本研究參考NCCLS-EP9-A2文件[4]，對(duì)不同檢測(cè)系統(tǒng)血清鈣測(cè)定進(jìn)行方法比對(duì)和偏倚評(píng)估，為實(shí)現(xiàn)血清鈣測(cè)定的溯源性和可比性提供實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)。

1材料與方法

1.1樣品來(lái)源每日收集患者新鮮血液(抽選出無(wú)黃疸、溶血、脂血的患者)按照盡量覆蓋醫(yī)學(xué)決定水平高、中、低的標(biāo)準(zhǔn)制成相應(yīng)濃度的檢測(cè)項(xiàng)目樣本，共計(jì)8份，采取以40個(gè)以上標(biāo)本為測(cè)試。要求盡量從一個(gè)患者采取有足夠量以備兩種方法做雙份測(cè)定的標(biāo)本。如果無(wú)法做到，可以將兩個(gè)病史相同、被測(cè)物濃度也大致相近的患者標(biāo)本混合使用，但不超過(guò)兩個(gè)。

1.2儀器與試劑檢測(cè)系統(tǒng)1(參加室間質(zhì)評(píng)成績(jī)優(yōu)秀，定期校準(zhǔn))寧波美康生物科技股份有限公司MS-880生化分析儀、寧波美康生物科技股份有限公司試劑、寧波美康生物科技股份有限公司校準(zhǔn)品和質(zhì)控品，檢測(cè)系統(tǒng)2：另一臺(tái)Hitachi 7600-020生化分析儀。Ca2+為偶氮胂III終點(diǎn)法。

1.3方法

1.3.1熟悉階段此階段，操作者應(yīng)按照要求掌握生化儀的操作程序和保養(yǎng)程序、并對(duì)樣本準(zhǔn)備方法、校準(zhǔn)以及檢測(cè)程序等進(jìn)行熟悉。比對(duì)實(shí)驗(yàn)中要嚴(yán)格按照廠商試劑盒的說(shuō)明書進(jìn)行校準(zhǔn)，然后測(cè)定質(zhì)控品、樣品，質(zhì)控品穿插于樣品間進(jìn)行測(cè)定。

1.3.2正式實(shí)驗(yàn)階段按NCCLS EP9-A2標(biāo)準(zhǔn)文件準(zhǔn)備標(biāo)本，每天按照標(biāo)準(zhǔn)收集患者不同濃度的血清標(biāo)本至少收集8份，持續(xù)收集5 d，濃度范圍盡可能處于該項(xiàng)目的分析測(cè)量范圍之內(nèi)，其中需要使至少50%的實(shí)驗(yàn)標(biāo)本分析物的含量不在參考區(qū)間內(nèi)，每個(gè)標(biāo)本分析物含量越寬越好。每個(gè)標(biāo)本重復(fù)測(cè)定兩次，指定第一次測(cè)定順序，第二次反序測(cè)定。(可減少交叉污染及漂移對(duì)重復(fù)測(cè)定標(biāo)本平均值的影響)順序中的濃度應(yīng)盡可能隨機(jī)排列。每天的樣本應(yīng)在2 h內(nèi)測(cè)定完畢，以確保分析物穩(wěn)定。實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)分布情況見(jiàn)表1(見(jiàn)《國(guó)際檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)雜志》網(wǎng)站主頁(yè)“論文附件”)。

1.4質(zhì)量控制在正式實(shí)驗(yàn)前應(yīng)建立常規(guī)質(zhì)量控制程序。如果出現(xiàn)失控時(shí)應(yīng)重新測(cè)定，直到達(dá)到要求的樣本數(shù)為止。

1.5數(shù)據(jù)收集和整理

1.5.3比較方法(X)測(cè)定范圍檢驗(yàn)X的分布范圍是否合適，可用相關(guān)系數(shù)(r)作粗略估計(jì)。計(jì)算公式如下：

如r≥0.975或r2≥0.95，則認(rèn)為X范圍合適，直線回歸方程的斜率和截距可靠；可以用簡(jiǎn)單的直線回歸來(lái)估計(jì)斜率和截距。如r<0.975，則必須分析更多的樣品以擴(kuò)大數(shù)據(jù)濃度范圍，然后再重新分析全部數(shù)據(jù)。如果X的取值范圍無(wú)法擴(kuò)大，則需采用分部偏倚代替回歸方法來(lái)評(píng)價(jià)平均偏倚。

1.5.4計(jì)算線性回歸方程Y=bX+a，b和a分別表示兩種方法間的比例誤差和恒定誤差。

1.5.5計(jì)算預(yù)期偏倚和可信區(qū)間在Y軸方向上數(shù)據(jù)點(diǎn)與回歸線之差稱為此點(diǎn)的殘差，這些殘差的標(biāo)準(zhǔn)差稱標(biāo)準(zhǔn)誤(Sy,x)，是測(cè)量圍繞回歸線的數(shù)據(jù)點(diǎn)的“離散度”。根據(jù)公式計(jì)算某一點(diǎn)的殘差、預(yù)期值的標(biāo)準(zhǔn)誤、在給定的醫(yī)學(xué)決定水平Xc處的預(yù)期偏倚(Bc)及其95%的可信區(qū)間。根據(jù)臨床使用要求，可在各個(gè)臨床決定水平濃度Xc處，了解Y方法引入后相對(duì)于X方法的預(yù)期偏倚Bc。Bc=a+(b-1)Xc為Bc的95%的可信區(qū)間:

以CLIA′88規(guī)定的室間質(zhì)量評(píng)價(jià)允許誤差范圍的1/2作為該項(xiàng)在給定水平濃度處的允許誤差，將預(yù)期偏倚的可信區(qū)間與給定水平濃度處的允許誤差相比較，允許誤差大于預(yù)期偏倚的可信區(qū)間上限，檢測(cè)方法可接受；預(yù)期偏倚的可信區(qū)間上限大于允許誤差大于預(yù)期偏倚的可信區(qū)間下限，檢測(cè)方法與比較方法相當(dāng)；允許誤差小于預(yù)期偏倚的可信區(qū)間下限，檢測(cè)方法不可接受。

1.6統(tǒng)計(jì)學(xué)處理所有數(shù)據(jù)均在Excel2007統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件進(jìn)行分析處理。

2結(jié)果

2.12個(gè)檢測(cè)系統(tǒng)實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)見(jiàn)表2。

2.3數(shù)據(jù)作圖見(jiàn)圖1(見(jiàn)《國(guó)際檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)雜志》網(wǎng)站主頁(yè)“論文附件”)。

2.4X值合適范圍的檢驗(yàn)r≥0.975為X值取值范圍合適。

2.6估算Ca在給定水平處的預(yù)期偏倚及可信區(qū)間計(jì)算該項(xiàng)目的醫(yī)學(xué)決定水平分別為Xc1=1.75、Xc2=2.69、Xc3=3.24。CLIA′88允許總誤差為10%，按照1/2允許誤差的標(biāo)準(zhǔn)，其允許偏倚分別為0.087 5、0.013 45、0.162。預(yù)期偏倚見(jiàn)表3(見(jiàn)《國(guó)際檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)雜志》網(wǎng)站主頁(yè)“論文附件”)。

表2　　檢測(cè)系統(tǒng)1、2的原始數(shù)據(jù)

3討論

EP9-A2方案主要用于評(píng)價(jià)同一檢驗(yàn)項(xiàng)目?jī)煞N測(cè)量方法之間的偏倚，并確定其偏倚是否在可接受的范圍內(nèi)。通常新方法為實(shí)驗(yàn)方法，與之比較的方法稱為比較方法。比較方法可以是參考方法，也可以是廠家聲明的方法或者檢驗(yàn)科目前使用的常規(guī)方法(準(zhǔn)確度已得到確認(rèn))。其過(guò)程相對(duì)簡(jiǎn)單，主要在于統(tǒng)計(jì)學(xué)處理。

本實(shí)驗(yàn)根據(jù)EP9-A2的方案對(duì)2種檢測(cè)系統(tǒng)進(jìn)行了比較，檢測(cè)系統(tǒng)1的試劑、校準(zhǔn)品、質(zhì)控品均可溯源，具有較好的量值傳遞性能，參加室間質(zhì)評(píng)成績(jī)優(yōu)秀，定期校準(zhǔn)，測(cè)定結(jié)果可靠，故為比較方法(X)；系統(tǒng)2為實(shí)驗(yàn)方法(Y)。

兩個(gè)檢測(cè)系統(tǒng)的方法重復(fù)性都良好，方法內(nèi)和方法間都沒(méi)有離散點(diǎn)，兩個(gè)檢測(cè)系統(tǒng)的測(cè)定結(jié)果相關(guān)線性較好，對(duì)截距和斜率的評(píng)估可靠r=0.995 588 453>0.975。截距系數(shù)a為0.034 045，說(shuō)明恒定系統(tǒng)誤差??；斜率系數(shù)b接近1，說(shuō)明比例系統(tǒng)誤差小。

以CLIA′88規(guī)定的室間質(zhì)量評(píng)價(jià)允許誤差范圍的1/2作為該項(xiàng)在給定水平濃度處的允許誤差，預(yù)期偏倚可信區(qū)間的上限大于EA大于預(yù)期偏倚可信區(qū)間的下限，證明該實(shí)驗(yàn)方法與比較方法結(jié)果相當(dāng)；可以被接受。

兩種方法測(cè)定血清鈣水平可以得到基本一致的結(jié)果，2006年衛(wèi)生部發(fā)布《醫(yī)療機(jī)構(gòu)臨床實(shí)驗(yàn)室管理辦法》,以及CNAS CL02:2007[4](ISO15189:2003),醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)室質(zhì)量和能力認(rèn)可的不斷深入，臨床實(shí)驗(yàn)室應(yīng)該做好各儀器的室內(nèi)質(zhì)控外，還需要可溯源的目標(biāo)檢測(cè)系統(tǒng)，做好自建檢測(cè)系統(tǒng)的測(cè)定結(jié)果與目標(biāo)檢測(cè)系統(tǒng)的結(jié)果比較，使其具有可比性。

本次血清鈣的測(cè)定中均是利用一臺(tái)美康MS-880和一臺(tái)日立7600-020的P2模塊，日立7600-020封掉P1模塊，這么做的目的是盡量保證外因相同，減少儀器本身對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果的干擾。如不封模塊P1，儀器對(duì)放入其中的血樣是隨機(jī)分配的，可能會(huì)在P1模塊狀態(tài)下測(cè)定，也可能會(huì)在P2模塊狀態(tài)下測(cè)定，不能正確的判斷出其是哪個(gè)模塊狀態(tài)下完成的測(cè)試。其次，可能會(huì)因?yàn)檠獦颖旧淼臓顟B(tài)對(duì)結(jié)果造成一定的干擾，如溶血、脂血、黃疸等，在日常工作中，儀器不可能永遠(yuǎn)處于最佳狀態(tài)，雖然是隨機(jī)分配通道，但是吸樣針和清洗機(jī)可能因受到標(biāo)本的輕微堵塞而造成檢測(cè)系統(tǒng)性能受到影響，可能會(huì)因?yàn)橐陨显蛟斐勺⑸溽橆^堵塞或污染進(jìn)而導(dǎo)致實(shí)驗(yàn)被干擾，從而測(cè)定結(jié)果出現(xiàn)偏倚。檢驗(yàn)科內(nèi)不同儀器間，即使每臺(tái)儀器工作性能穩(wěn)定、室內(nèi)質(zhì)控正常，檢測(cè)結(jié)果都有可能存在較大系統(tǒng)誤差，需要定期開(kāi)展比對(duì)實(shí)驗(yàn)和對(duì)儀器進(jìn)行校準(zhǔn)，探索造成變異的原因，使不同儀器間的相對(duì)偏差在可接受范圍，同樣也是對(duì)室內(nèi)、室間質(zhì)控的良好補(bǔ)充。

兩種測(cè)量方法的差異還可能由于不同的檢測(cè)系統(tǒng)因方法學(xué)、靈敏度、準(zhǔn)確性及線性等差異甚至與試劑質(zhì)量、質(zhì)控品質(zhì)量、儀器狀態(tài)，質(zhì)控標(biāo)準(zhǔn)和工作人員技術(shù)水平有關(guān)。

由于是各檢驗(yàn)科自建系統(tǒng)，各科室應(yīng)用的試劑也不盡相同，可能與試劑的更換周期不同或在使用試劑過(guò)程中試劑受到污染或者在存放過(guò)程中變質(zhì)甚至錯(cuò)加試劑等因素導(dǎo)致了造成檢測(cè)性能受到影響。另外要特別注意確保定標(biāo)、質(zhì)控及標(biāo)準(zhǔn)化操作各步驟的標(biāo)準(zhǔn)化，使檢驗(yàn)結(jié)果為臨床提供可靠的實(shí)驗(yàn)室數(shù)據(jù)。

校準(zhǔn)檢測(cè)系統(tǒng)的最佳校準(zhǔn)品是新鮮混合血清，它可以規(guī)避人源基質(zhì)質(zhì)控品的基質(zhì)效應(yīng)。而生化危急值項(xiàng)目是臨床上最關(guān)注的檢驗(yàn)項(xiàng)目，在之前的相關(guān)文獻(xiàn)報(bào)道中，關(guān)于血清鈣測(cè)定結(jié)果的比對(duì)很少，可能是因?yàn)殁}離子測(cè)定重復(fù)性不好，變異系數(shù)大，所以關(guān)于鈣的適宜比對(duì)方法尚在探討中。該比對(duì)方案目前標(biāo)本量大、檢測(cè)濃度水平分布廣、可允許的偏差小，更能及時(shí)發(fā)現(xiàn)檢測(cè)系統(tǒng)性能變化，從而更好地保證了檢驗(yàn)質(zhì)量。

儀器的日常維護(hù)與保養(yǎng)對(duì)實(shí)驗(yàn)的結(jié)果也有一定的影響，每次測(cè)定除了存在誤差外，與樣品中的水分風(fēng)干、蒸發(fā)也有一定的關(guān)系。溫濕度等一些看似微不足道的因素同樣也要引起關(guān)注，對(duì)于工作人員要開(kāi)展定期培訓(xùn)和考核，加強(qiáng)儀器的規(guī)范操作，檢測(cè)結(jié)果真實(shí)地體現(xiàn)了實(shí)驗(yàn)室的真實(shí)水平，所以提高上述問(wèn)題的改善有助于提高實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)結(jié)果的準(zhǔn)確。

綜上所述，在檢測(cè)系統(tǒng)性能驗(yàn)證的大前提下，在保證了檢測(cè)系統(tǒng)正確度及準(zhǔn)確性的前提下，定期參照EP9-A2文件進(jìn)行規(guī)范化的比對(duì)是保證檢驗(yàn)結(jié)果的基礎(chǔ)，在嚴(yán)格是室內(nèi)質(zhì)控下，可以通過(guò)增加常規(guī)比對(duì)來(lái)擴(kuò)大監(jiān)控的范圍，及時(shí)發(fā)現(xiàn)結(jié)果的不穩(wěn)定因素，所以建立不同檢測(cè)系統(tǒng)測(cè)定結(jié)果間的比對(duì)機(jī)制，能保證實(shí)驗(yàn)室內(nèi)結(jié)果的一致性，為臨床檢測(cè)結(jié)果的互認(rèn)提供可靠數(shù)據(jù)。

參考文獻(xiàn)

[1]何翠琴．國(guó)產(chǎn)全自動(dòng)生化分析儀自建檢測(cè)系統(tǒng)的臨床應(yīng)用評(píng)價(jià)[J]．安徽醫(yī)學(xué)，2010，32(1):67-69.

[2]陳建鴻，李煒軒，李啟欣，等．不同生化檢測(cè)系統(tǒng)間檢測(cè)系統(tǒng)間檢測(cè)結(jié)果的可比性及偏倚評(píng)估[J]．國(guó)際檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)雜志,2010，31(10)：2300-2301.

[3]郭炫，馬列婷，李穎，等．Olymous AU5431全自動(dòng)生化分析儀與Beckman CX3檢測(cè)系統(tǒng)部分測(cè)定結(jié)果的偏倚評(píng)估與可比性研究[J]．現(xiàn)代檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)雜志，2009，24(9)：1367-1368．

[4]陳捷，王蘭蘭，李立新，等．根據(jù)NCCLS-EP9-A2評(píng)價(jià)2種發(fā)光免疫分析法的一致性[J]．臨床檢驗(yàn)雜志，2006，24(3)：169-171．

(收稿日期：2015-10-24)

DOI:10.3969/j.issn.1673-4130.2016.04.059

文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：A

文章編號(hào)：1673-4130(2016)04-0558-04