黃　舒,熊海燕,洪煜婧

(1.南通市第一人民醫(yī)院檢驗(yàn)科，江蘇南通 226001；2.南通大學(xué)公共衛(wèi)生學(xué)院，江蘇南通 226001)

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·臨床研究·

不同檢測(cè)系統(tǒng)尿微量清蛋白測(cè)定結(jié)果的可比性及偏倚評(píng)估

黃舒1,熊海燕1,洪煜婧2

(1.南通市第一人民醫(yī)院檢驗(yàn)科，江蘇南通 226001；2.南通大學(xué)公共衛(wèi)生學(xué)院，江蘇南通 226001)

摘要:目的對(duì)兩種不同檢測(cè)系統(tǒng)尿微量清蛋白測(cè)定結(jié)果進(jìn)行方法比對(duì)和偏倚評(píng)估，探討其可比性。方法參照美國(guó)臨床和實(shí)驗(yàn)室標(biāo)準(zhǔn)化協(xié)會(huì)(CLSI)EP9-A2文件要求，以BeckmanIMMAGE800全自動(dòng)免疫分析儀作為比對(duì)方法(X)，日立7600全自動(dòng)生化分析儀為實(shí)驗(yàn)方法(Y)，用患者新鮮尿液分別用上述不同檢測(cè)系統(tǒng)同時(shí)檢測(cè)微量清蛋白，計(jì)算實(shí)驗(yàn)方法(Y)和比對(duì)方法(X)之間的相對(duì)偏差(SE%)，以衛(wèi)生部臨檢中心室間質(zhì)評(píng)允許誤差(Ea)范圍的1/2為判斷標(biāo)準(zhǔn)，評(píng)價(jià)各系統(tǒng)測(cè)定結(jié)果的可比性。結(jié)果實(shí)驗(yàn)系統(tǒng)與比較系統(tǒng)間具有良好的相關(guān)性(r=0.998)；比較方法檢測(cè)結(jié)果為(80.8±55.2)mg/L，實(shí)驗(yàn)方法為(84.9±57.7)mg/L，經(jīng)配對(duì)設(shè)計(jì)的t檢驗(yàn)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(t=9.504，P<0.01)，實(shí)驗(yàn)方法明顯高于比較方法；但以臨床可接受性能判斷標(biāo)準(zhǔn)(SE%<1/2 CLIA′88 TEa)，認(rèn)為實(shí)驗(yàn)系統(tǒng)的檢測(cè)結(jié)果可接受。結(jié)論上述不同檢測(cè)系統(tǒng)檢測(cè)結(jié)果具有較好的相關(guān)性，臨床可接受性能評(píng)價(jià)具有可比性。經(jīng)過(guò)方法對(duì)比及偏差評(píng)估確定在該實(shí)驗(yàn)室使用生化儀替代免疫儀檢測(cè)是可行的。

關(guān)鍵詞:微量清蛋白；方法比對(duì)；偏倚評(píng)估

由于不同檢測(cè)系統(tǒng)的性能，檢測(cè)原理、方法等不同，儀器間可能存在系統(tǒng)誤差，在申請(qǐng)臨床醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)室認(rèn)可時(shí)要進(jìn)行不同檢測(cè)系統(tǒng)測(cè)定結(jié)果的可比性檢驗(yàn)和偏倚評(píng)估；本科現(xiàn)有貝克曼庫(kù)爾特IMMAGE800全自動(dòng)免疫分析儀和日立7600全自動(dòng)生化分析儀兩臺(tái)儀器，均可檢測(cè)尿微量清蛋白，為評(píng)價(jià)兩者測(cè)定結(jié)果的可比性，需對(duì)儀器進(jìn)行比對(duì)，多項(xiàng)報(bào)道認(rèn)為IMMAGE800檢測(cè)微量蛋白時(shí)具有高濃度的自動(dòng)稀釋功能，精密度、準(zhǔn)確度高，線(xiàn)性范圍寬。把它作為目標(biāo)檢測(cè)系統(tǒng)，將日立7600全自動(dòng)生化分析儀測(cè)定結(jié)果與其進(jìn)行比較，本研究參考美國(guó)臨床和實(shí)驗(yàn)室標(biāo)準(zhǔn)化協(xié)會(huì)(CLSI)EP9-A2文件進(jìn)行方法比對(duì)和偏差評(píng)估。

1材料與方法

1.1檢測(cè)系統(tǒng)組成

1.1.1檢測(cè)系統(tǒng)X貝克曼庫(kù)爾特公司IMMAGE800全自動(dòng)免疫分析儀及配套試劑、校準(zhǔn)品、質(zhì)控品，采用散射速率法分析。儀器按尿微量清蛋白標(biāo)準(zhǔn)操作程序進(jìn)行定標(biāo)，并判斷定標(biāo)測(cè)試的有效性，存儲(chǔ)工作曲線(xiàn)，測(cè)試樣品根據(jù)有效定標(biāo)工作曲線(xiàn)計(jì)算測(cè)試結(jié)果。

1.1.2檢測(cè)系統(tǒng)Y日立7600全自動(dòng)生化分析儀，北京利德曼生產(chǎn)試劑盒。檢測(cè)類(lèi)型：雙波長(zhǎng)，兩點(diǎn)終點(diǎn)法；反應(yīng)方向：上升；定標(biāo)方式：Logit Log 5P；線(xiàn)性范圍:0～200 mg/L。

1.2方法

1.2.1樣本收集與檢測(cè)每天收集2份(病史相同)新鮮尿液標(biāo)本，1 500×g離心10 min，分別取上清液，混合，制成8份不同尿微量清蛋白濃度的“微混合樣本”。同時(shí)在兩臺(tái)儀器上進(jìn)行平行雙份檢測(cè),連續(xù)測(cè)定5 d。

1.2.2評(píng)估方案前準(zhǔn)備包括儀器的常規(guī)保養(yǎng)，校準(zhǔn)，質(zhì)控，樣本準(zhǔn)備等，嚴(yán)格執(zhí)行標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程，室內(nèi)質(zhì)控在控后進(jìn)行標(biāo)本檢測(cè)，分別在兩臺(tái)儀器進(jìn)行檢測(cè)，先1→8順序進(jìn)行測(cè)定，再8→1順序重復(fù)測(cè)定，每日測(cè)定均在2 h內(nèi)完成。

1.2.3檢測(cè)方法按照CLSI批準(zhǔn)的EP9-A2文件《用患者樣本進(jìn)行方法比對(duì)及偏倚評(píng)估》[1]，對(duì)兩種方法檢測(cè)尿微量清蛋白結(jié)果進(jìn)行比對(duì)，以貝克曼庫(kù)爾特IMMAGE800全自動(dòng)免疫分析儀作為比對(duì)方法(X)，日立7600全自動(dòng)生化分析儀為實(shí)驗(yàn)方法(Y)，分別用兩種不同檢測(cè)系統(tǒng)同時(shí)檢測(cè)尿微量清蛋白，作圖，計(jì)算回歸方程，判斷兩組結(jié)果有無(wú)差異，依據(jù)已建立的回歸方程，以醫(yī)學(xué)決定水平作為自變量(Xc)，計(jì)算因變量Yc，再依據(jù)Xc和Yc算出預(yù)期偏倚(Bc)(系統(tǒng)誤差，SE)和相對(duì)偏倚(SE%):Bc=|Yc-Xc|=|(b-1)Xc+a|，SE(%)=(Bc/Xc)×100%。臨床可接受性判斷：以衛(wèi)生部臨檢中心室間質(zhì)評(píng)允許誤差(Ea)范圍的1/2為判斷標(biāo)準(zhǔn)：當(dāng)SE(%)小于或等于1/2 Ea時(shí)，則認(rèn)為偏倚可接受；當(dāng)SE(%)大于1/2時(shí)，則認(rèn)為偏倚不可接受。

1.3統(tǒng)計(jì)學(xué)處理剔除存在明確人為操作誤差的結(jié)果。以4倍的平均差值為判斷限刪除離群點(diǎn)，方法內(nèi)及方法間不應(yīng)超出限值，超過(guò)限值的即為離群點(diǎn)，所有差值都應(yīng)刪除并補(bǔ)足數(shù)據(jù)。明顯人為誤差的結(jié)果予以剔除。兩個(gè)檢測(cè)系統(tǒng)尿微量清蛋白測(cè)定結(jié)果的統(tǒng)計(jì)分析按照EP9-A2文件的要求在SPSS13.0上進(jìn)行分析，以P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2結(jié)果

2.2相關(guān)性

圖1　　重復(fù)測(cè)定均值的散點(diǎn)圖

圖2　　各次測(cè)定結(jié)果的散點(diǎn)圖

圖3　兩種方法測(cè)定均值之差對(duì)兩種方法測(cè)定

圖4　　偏倚圖

2.3實(shí)驗(yàn)方法檢測(cè)系統(tǒng)可接受性能評(píng)價(jià)按CLIA′88(2003)要求，尿微量清蛋白分析允許最大總誤差(TEa)為±20%，醫(yī)學(xué)決定水平Level1=25 mg/L和Level2=100 mg/L。將尿微量清蛋白的Xc代入回歸方程，計(jì)算SE、SE%,得SE%分別為6.4%，5.0%，參考臨床可接受性能的判斷標(biāo)準(zhǔn)(SE%<1/2 CLIA′88 TEa)，均可接受。

2.4兩方法均值比較結(jié)果比對(duì)方法檢測(cè)結(jié)果為(80.8±55.2)mg/L，實(shí)驗(yàn)方法為(84.9± 57.7)mg/L，經(jīng)配對(duì)設(shè)計(jì)的t檢驗(yàn)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(t=9.504，P<0.01)，實(shí)驗(yàn)方法明顯高于比較方法。

3討論

尿微量清蛋白曾被認(rèn)為是高血壓、糖尿病等疾病所致腎功能損害的表現(xiàn)[2-3]。而目前的學(xué)說(shuō)認(rèn)為，尿微量清蛋白是由于全身血管的滲漏而非特定的腎臟損害所致[4]。在檢測(cè)方面隨機(jī)尿較為常用，但影響因素較多，若同時(shí)檢測(cè)尿肌酐，因每日肌酐排除量相對(duì)恒定，用尿微量清蛋白與肌酐比值可避免尿量等變化對(duì)結(jié)果的影響。其比值對(duì)腎病的早期診斷有重要價(jià)值[5-6]。尿微量清蛋白/肌酐比值的升高與全身血管內(nèi)皮細(xì)胞的病變是同步的，是全身或局部炎性反應(yīng)的指標(biāo)，是血管內(nèi)皮細(xì)胞改變的早期征象，與血管病變的發(fā)生密切相關(guān)[7-8]。已有國(guó)外研究表明尿微量清蛋白與肌酐比值與心血管疾病的嚴(yán)重程度密切相關(guān)，是心血管疾病的獨(dú)立危險(xiǎn)因素及預(yù)測(cè)因子之一，并且與心血管疾病意外病死率密切相關(guān)[9-10]。2001年美國(guó)糖尿病協(xié)會(huì)尿討論認(rèn)為微量清蛋白/尿肌酐比值可代替24 h尿檢測(cè)，后逐漸被臨床廣泛應(yīng)用[11]。放射免疫分析最早用于測(cè)定尿微量清蛋白，其精確度、靈敏度均高，存在放射性污染及特殊儀器需要等缺陷，開(kāi)展受到限制。隨后商品給的尿微量清蛋白檢測(cè)試劑品種繁多。以速率散射濁度為代表的IMMARE免疫濁度分析儀，其精密度、準(zhǔn)確度高，還具有快速、方便等優(yōu)點(diǎn)，是目前應(yīng)用最為廣泛的一種方法?；谌詣?dòng)生化分析儀使用的透射免疫比濁法試劑的研發(fā)，為尿微量清蛋白的檢測(cè)開(kāi)辟了另一途徑。而肌酐的檢測(cè)目前臨床實(shí)驗(yàn)室的常用方法為生化儀的苦味酸速率法和肌氨酸氧化酶法。隨著臨床醫(yī)生對(duì)尿微量清蛋白臨床意義的認(rèn)識(shí)逐漸加深，尿微量清蛋白/尿肌酐比值增高從監(jiān)測(cè)腎損害，逐漸被臨床廣泛應(yīng)用于協(xié)助早期發(fā)現(xiàn)心血管疾病的風(fēng)險(xiǎn)。隨之而來(lái)的是尿微量清蛋白檢測(cè)標(biāo)本的不斷增加，尿微量清蛋白測(cè)定目前主要采用貝克曼庫(kù)爾特IMMAGE800特定蛋白分析系統(tǒng)。而肌酐的檢測(cè)多用全自動(dòng)生化分析儀。這樣就出現(xiàn)一個(gè)指標(biāo)要運(yùn)用兩種儀器檢測(cè)的情況?；谌詣?dòng)生化分析儀可使用透射免疫比濁法檢測(cè)尿微量清蛋白，可避免上述麻煩，但尿微量清蛋白檢測(cè)結(jié)果的準(zhǔn)確性和一致性越來(lái)越多地引起大家的關(guān)注。由于方法學(xué)的差異，以及采用的參考測(cè)量程序和校準(zhǔn)品溯源性的不同，將會(huì)導(dǎo)致檢測(cè)結(jié)果存在一定的差異。不同檢測(cè)系統(tǒng)測(cè)定同一份尿液中的微量清蛋白濃度往往不具有可比性。因此，應(yīng)對(duì)不同檢測(cè)系統(tǒng)尿微量清蛋白測(cè)定結(jié)果進(jìn)行方法比對(duì)和偏倚評(píng)估。

本研究根據(jù)CLSI EP9-A2文件的流程，對(duì)兩檢測(cè)系統(tǒng)測(cè)定結(jié)果進(jìn)行比對(duì)，結(jié)果顯示：方法內(nèi)、方法間沒(méi)有離群值，重復(fù)性好，相關(guān)性好(r=0.998)，偏差估計(jì)顯示，兩種檢測(cè)系統(tǒng)測(cè)定結(jié)果間的差異較為顯著，如圖所知：兩種方法結(jié)果存在差異，直接比較兩種方法所得的檢測(cè)結(jié)果并不一致，透射免疫比濁法的檢測(cè)結(jié)果要高于散射速率法結(jié)果，濃度越高，差異越大。根據(jù)前述圖形分析及相關(guān)回歸分析可知，在分析范圍內(nèi)檢測(cè)醫(yī)學(xué)決定水平濃度的尿微量清蛋白的相對(duì)偏差較小，可滿(mǎn)足臨床要求，高值標(biāo)本可稀釋或減量檢測(cè)，也可根據(jù)回歸方程對(duì)檢測(cè)結(jié)果進(jìn)行系數(shù)調(diào)整，確保兩方法間的一致性與可比性。

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(收稿日期：2015-09-25)

DOI:10.3969/j.issn.1673-4130.2016.04.053

文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：A

文章編號(hào)：1673-4130(2016)04-0548-03