莊運芳

紅細胞保存液混懸洗滌紅細胞的制備及質(zhì)量控制

莊運芳

目的探討紅細胞保存液(MAP)混懸洗滌紅細胞的制備及其質(zhì)量控制。方法選取已制備的MAP混懸洗滌的紅細胞，將其置入4℃冰箱中保存，分別儲存14、21、35 d后取樣，檢測其溶血率。于儲存35 d測定上清液蛋白含量、血紅蛋白含量，并進行無菌試驗。結果21 d溶血率與14 d比較差異有統(tǒng)計學意義(P＜0.05);35 d溶血率與21 d比較差異有統(tǒng)計學意義(P＜0.05);MAP洗滌紅細胞在制備、洗滌中各項指標均符合國家質(zhì)量標準。結論MAP混懸洗滌紅細胞35 d后其質(zhì)量控制符合《全血及成分血質(zhì)量要求(GB18469-2012)》，但隨著儲存時間的延長，其溶血率會逐漸升高，建議臨床使用在保存期21 d內(nèi)的洗滌紅細胞效果更佳。

紅細胞保存液;洗滌紅細胞;制備;質(zhì)量控制

洗滌紅細胞是由全血、懸浮紅細胞、濃縮紅細胞等血液制品經(jīng)加工而成的血液成分，主要應用于臨床自身免疫性溶血性貧血、高鉀血癥、血漿蛋白過敏以及陣發(fā)性睡眠性血紅蛋白尿的患者。近年，隨著輸血技術的不斷提高，洗滌紅細胞的應用，已受到臨床醫(yī)師的高度認可與關注。由于洗滌紅細胞的制備工藝較復雜，主要是經(jīng)洗滌加入生理鹽水混懸而成，保存期僅為24 h，臨床應用較局限。而MAP混懸洗滌紅細胞的保存期為35 d，通過保持一定的庫存量，可滿足其臨床需求。本研究就對MAP混懸洗滌的紅細胞的制備及質(zhì)量控制項目進行分析，旨在制定科學、合理的庫存量。

1 材料與方法

1.1 儀器及材料

采集400mL全血制備的紅細胞20袋，選擇邁瑞B(yǎng)S-420全自動生化分析儀(測定氰化高鐵血紅蛋白吸光度值)、邁瑞B(yǎng)C-300全自動血細胞分析儀、日立CR7低溫離心機、費森尤斯卡比COMPODCK無菌接合機、SYSMEXKX-21N血細胞計數(shù)儀以及四聯(lián)洗滌袋250mL;選擇上海光譜儀器有限公司提供的752型可見分光光度計、瑞爾達生物科技有限公司提供的血漿游離血紅蛋白試劑盒，選擇便診生物技術有限公司提供的培養(yǎng)基。

1.2 洗滌紅細胞制備方法

采集第2天后，將檢驗合格的紅細胞懸液用作制備洗滌紅細胞懸液的起始血液，無破損滲漏，血液外觀正常，在有效期內(nèi)。待用洗滌溶液聯(lián)袋提前放置冷藏保存，無破損滲漏，溶液外觀正常，在有效期內(nèi)。

取待洗滌的懸浮紅細胞血袋，通過無菌接合機將其與洗滌溶液聯(lián)合袋進行連接，檢查該袋紅細胞懸液確定無滲漏情況后，將洗滌溶液移至紅細胞袋內(nèi)，每單位紅細胞(1個單位紅細胞指200mL全血制備的紅細胞)中加入的液體量約為100mL，夾緊導管，混勻。按制備洗滌紅細胞的操作程序，在4℃條件下，以速度3900 r/min離心10min，離心后將血袋取出，避免震蕩，垂直放入分漿夾中，把上清液轉移至空袋內(nèi)，夾緊導管。重復上述步驟3次，向洗滌結束的紅細胞中加入適量溶液(50mL/u)，充分混勻。

本研究共制備20袋MAP混懸洗滌紅細胞，通過無菌鏈接方式，將原洗滌紅細胞袋中分裝到3個轉移袋中，并置于4℃冰箱保存，分別于存儲14、21、35 d取樣檢測，采取自然沉降的方法，取的血漿，測定其溶血率，并于儲存35 d測定上清蛋白含量、血紅蛋白含量，嚴格按試劑盒操作說明書進行。

1.3 質(zhì)量檢測

血液外觀檢查:肉眼觀察色澤是否出現(xiàn)異常、溶血、凝塊、氣泡等情況。

上清液蛋白含量測定:利用自然沉降的原理，經(jīng)離心后，取上清液1mL，并加入磺基水楊酸3mL中充分混勻，應用可見分光光度計測定其吸光度，并與標準液吸光度進行比較，計算出上清液蛋白含量。

血紅蛋白的測定:取樣2～3mL，通過 SYSMEXKX-21N血細胞計數(shù)儀進行血常規(guī)檢測，根據(jù)血紅蛋白濃度，計算出血紅蛋白含量。而無菌試驗則應用全自動血液培養(yǎng)系統(tǒng)進行厭氧培養(yǎng)［1］。

溶血率的計算工式:測定管氰化高鐵血紅蛋白吸光度值×(1-紅細胞比積)×100%/(全溶血對照管氰化高鐵血紅蛋白吸光度值×4)，無菌實驗:無細菌生長。

1.4 國家質(zhì)量標準

按《全血及成分血質(zhì)量要求(GB18469-2012)》中關于洗滌紅細胞質(zhì)量標準:溶血率 ＜0.8%，血紅蛋白含量≥18.0 g，上清液蛋白含量＜0.5 g［2］。

1.5 統(tǒng)計學處理

選取版本為SPSS19.0的統(tǒng)計學軟件對本組計算機統(tǒng)計的數(shù)據(jù)結果進行分析處理，經(jīng)檢驗，完成組間計數(shù)資料的分析比較，采取t檢驗，完成組間相關臨床指標的比較，以±s表示，設P＜0.05時為組間比較差異明顯，確定為組間存在統(tǒng)計學意義。

2 結果

2.1 不同儲存時間溶血率分析

經(jīng)統(tǒng)計分析，21 d溶血率與14 d比較差異有統(tǒng)計學意義(P＜0.05);35 d溶血率與21 d比較差異有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)，見表1。

2.2 MAP洗滌紅細胞質(zhì)量檢測分析

經(jīng)分析，MAP洗滌紅細胞在制備、洗滌中各項指標均符合國家質(zhì)量標準。

表1 不同儲存時間溶血率分析 (%)

表1 MAP洗滌紅細胞質(zhì)量檢測分析 (n=20)

3 討論

洗滌紅細胞的制備，去除了大部分血漿、白細胞、血小板、抗凝劑、乳酸、微小凝塊等，可明顯降低輸血反應，易被患者接受?，F(xiàn)階段，洗滌紅細胞主要應用于:①肝腎功能障礙、高鉀血癥等需要輸血的患者;②輸入全血后發(fā)生血管神經(jīng)性水腫、蕁麻疹及過敏性休克等疾病患者;③因反復輸血產(chǎn)生血小板抗體，引起輸血發(fā)熱反應的患者;④自身免疫性溶血性貧血患者。近年，隨著輸血醫(yī)療技術的不斷發(fā)展，生理鹽水懸浮洗滌紅細胞的制備方法，已難以滿足臨床需求。按《全血及成分血質(zhì)量要求(GB18469-2012)》中關于洗滌紅細胞保存期的制定，增加了使用MAP混懸洗滌紅細胞，保存期為35 d。洗滌紅細胞保存期的延長，血站可根據(jù)臨床對洗滌紅細胞的需求，建立洗滌紅細胞儲備庫，可為臨床及時提供所需產(chǎn)品。同時，在質(zhì)量控制方面，蛋白清回收率的檢測使用上清蛋白質(zhì)含量取代，紅細胞回收率的檢測使用血紅蛋白含量取代，取消白細胞清除率檢測，同時增加無菌試驗檢測以及保存期溶血率檢測。在檢測方法上，應用四聯(lián)洗滌血袋，可減少接管次數(shù);應用無菌接合機進行接管，保證洗滌紅細胞的制備過程在全密閉環(huán)境進行，可保證其安全性。

本研究顯示，儲存末期洗滌紅細胞中溶血率、上清蛋白含量、血紅蛋白含量及無菌試驗檢測結果均及外觀檢測均符合質(zhì)量標準，同時隨著保存時間的延長，其溶血率逐漸提高，這與文獻報道結果相似［3］。因此，我站向臨床建議使用洗滌紅細胞的庫存上限為21 d的血液效果更佳。本研究選用的洗滌紅細胞，均為采集第2天以后血液。近年，國內(nèi)外文獻報道，采集第2天全血制備的洗滌紅細胞合格率較當日血制備的洗滌紅細胞合格率提高45%［4］。主要原因在于:血液保存期間，各成分含量有所不同，各成分含量會自然沉降，上層為淡黃色血漿，中間層為血小板和白細胞，下層為紅細胞。全血保存1～2后，血液中含有的血小板、白細胞功能喪失，細胞裂解，經(jīng)離心后，更容易將其洗去。同時，庫存的全血由于黏稠度較高，紅細胞難以懸浮，可提高血小板、白細胞的清除率，同時可提高紅細胞回收率。故庫存全血的洗滌效果較好。但在洗滌紅細胞制備過程中，因機械操作，紅細胞易遭到破壞，易發(fā)生溶血。因此，洗滌紅細胞制備過程中，所選標本盡可能不采取離心的方法進行血漿分離，可采取自然沉降的方法。有試驗研究表明，溫度對紅細胞滲透脆性有較大影響，在低溫環(huán)境下，紅細胞脆性較高，溶血率也較高［5-7］。而所選標本在低溫環(huán)境下保存時間越短，可減少紅細胞的損失?？偟膩碚f，MAP混懸洗滌紅細胞的制備，可有效彌補生理鹽水混懸洗滌紅細胞制備存在的不足，既能滿足臨床需求，同時也可減少工作量，減少人力、資源的浪費，具有良好的臨床效果。由于本研究所選標本均來源于400mL全血，缺乏200mL全血相關數(shù)據(jù)的分析，還需作進一步研究和完善。

綜上所述，隨著近年輸血醫(yī)療技術的不斷提高，為更好地滿足臨床用血需求，減少輸血不良反應以及減少資源費用，開展MAP混懸洗滌紅細胞的制備工藝具有重要的臨床意義，按《全血及成分血質(zhì)量要求(2012版)》中規(guī)定，在封閉無菌環(huán)境中制備且以MAP混懸洗滌紅細胞，其保存期與洗滌前的紅細胞懸液相同。由于MAP混懸洗滌紅細胞的保存期較長，因此血站可常規(guī)制備或按批量制備，既滿足了國家質(zhì)量標準，同時也提高了工作效率，為臨床需緊急輸血的患者贏得了寶貴的時間，值得臨床應用。

［1］葉漢泉，劉志泉，梁麗雯，等.紅細胞保存液混懸洗滌紅細胞質(zhì)量控制動態(tài)觀察［J］.長江大學學報(自科版)醫(yī)學下旬刊，2013，10(8):85-86.

［2］高春芳，劉亞欣，金 花，等.紅細胞保存液(MAP)混懸洗滌紅細胞的制備及其質(zhì)量控制［J］.中國民康醫(yī)學，2015，27(4):3-4，7.

［3］張玉春，周克禮，關曉梅，等.MAP紅細胞保存液對洗滌紅細胞血漿蛋白清除率的影響［J］.臨床輸血與檢驗，2012，14(1):82.

［4］冀 慧.紅細胞保存液梯度添加法在不足量血制備去白懸浮紅細胞中的應用［J］.臨床輸血與檢驗，2014，16(3):253-256.

［5］鐘 銳，劉 華，王 紅，等.添加不同比例的MAP保存液對拉薩地區(qū)懸浮紅細胞保存質(zhì)量的影響［J］.中國輸血雜志，2015，28(7):780-783.

［6］何銳洪，袁文聲，易 峰.以MAP為洗液的洗滌紅細胞可行性研究［J］.現(xiàn)代醫(yī)院，2011，11(1):23-24.

［7］沈愛文.自動血液洗滌儀制備冰凍保存紅細胞的方法評價［J］.現(xiàn)代醫(yī)院，2010，10(6):90-91.

R457.1+2

:Adoi:10.3969/j.issn.1671-332X.2016.08.032

莊運芳:河源市中心血站 廣東河源 517001