吳世卿 溫志欣 陳國(guó)棟

血糖波動(dòng)對(duì)糖尿病大鼠脛骨種植體骨結(jié)合的影響及機(jī)制研究

吳世卿 溫志欣 陳國(guó)棟

目的探討血糖波動(dòng)對(duì)糖尿病大鼠脛骨種植體骨結(jié)合率的影響及其作用機(jī)制。方法選取48只雄性大鼠作為研究對(duì)象，將其隨機(jī)分為正常對(duì)照組、血糖波動(dòng)組以及持續(xù)高血糖組。對(duì)三組大鼠進(jìn)行糖耐量試驗(yàn)，并對(duì)三組大鼠脛骨種植體骨結(jié)合率以及種植體周?chē)墙M織TGF-β1表達(dá)水平進(jìn)行對(duì)比分析。結(jié)果血糖波動(dòng)組以及持續(xù)高血糖組耐量試驗(yàn)均出現(xiàn)了異常。且血糖波動(dòng)組大鼠各時(shí)間點(diǎn)血糖水平均明顯高于持續(xù)高血糖組大鼠，差異顯著具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。術(shù)后4 w，血糖波動(dòng)組以及持續(xù)高血糖組大鼠脛骨種植體骨結(jié)合率均明顯低于正常對(duì)照組，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。術(shù)后8 w及12 w血糖波動(dòng)組大鼠脛骨種植體骨結(jié)合率明顯低于持續(xù)高血糖組，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。術(shù)后12 w正常對(duì)照組TGF-β1表達(dá)水平明顯高于血糖波動(dòng)組以及持續(xù)高血糖組，而持續(xù)高血糖組TGF-β1表達(dá)水平高于血糖波動(dòng)組，差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。結(jié)論血糖波動(dòng)對(duì)種植體骨結(jié)合率有抑制作用，且該作用對(duì)種植體周?chē)墙Y(jié)合的影響大于持續(xù)性高血糖。

糖尿病;種植體;骨結(jié)合;血糖;轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子β1

【Author's address】 The First People's Hospital of Shunde，Shunde，528300，China

隨著人們生活水平的提高，我國(guó)糖尿病發(fā)病率日具年輕化趨勢(shì)，糖尿病和糖尿病前期患病率分別為9.7%和15.5%［1］。糖尿病是一種高血糖癥引起的代謝紊亂性疾病，包括骨代謝、鈣代謝的紊亂，引起繼發(fā)性骨量減少及骨質(zhì)疏松等糖尿病性骨病，在口腔臨床中主要表現(xiàn)為牙槽骨的喪失及頜骨的骨質(zhì)疏松，繼而影響種植體骨結(jié)合。因此，如何提高糖尿病患者的種植牙成功率已成為目前研究的熱點(diǎn)。血糖波動(dòng)是糖尿病代謝紊亂的重要表現(xiàn)形式，已被國(guó)際糖尿病聯(lián)盟證實(shí)相對(duì)于持續(xù)高血糖來(lái)說(shuō)對(duì)糖尿病患者的危害更大［2］，但是其對(duì)種植體骨結(jié)合是否也有相同的影響尚未明確。本研究設(shè)想從血糖波動(dòng)入手，探討血糖波動(dòng)對(duì)糖尿病大鼠脛骨種植體周骨結(jié)合的影響及其作用機(jī)制。

1 材料與方法

1.1 一般材料

在本次研究中所涉及的藥物以及試劑主要包括枸櫞酸鈉、檸檬酸(康普匯維科技有限公司)、鏈脲佐菌素(艾研生物科技有限公司)、戊巴比妥鈉(普博斯生物科技有限公司)。在研究中所使用的高脂高糖飼料由江蘇省協(xié)同醫(yī)藥生物工程有限公司生產(chǎn)，主要成分包括豬油10%、蛋黃粉3%、蔗糖20%、膽鹽1%、膽固醇2.5%以及63.5%的基礎(chǔ)飼料。

1.2 建立動(dòng)物模型及分組

選取48只8周齡清潔級(jí)雄性SD大鼠，將其安置于濕度和溫度適宜的環(huán)境中飼養(yǎng)。對(duì)所有SD大鼠使用普通級(jí)飼料適應(yīng)性喂養(yǎng)1周，隨后從中隨機(jī)選取16只作為正常對(duì)照組，對(duì)該組SD大鼠繼續(xù)喂養(yǎng)普通級(jí)飼料。對(duì)剩余的32只大鼠使用高脂高糖飼料持續(xù)喂養(yǎng)4周后，經(jīng)腹腔注射鏈脲佐菌素建造2型糖尿病大鼠模型［3］。將這32只大鼠隨機(jī)分為血糖波動(dòng)組和持續(xù)高血糖組，每組各16只。其中血糖波動(dòng)組加強(qiáng)飲食控制，每天禁食半日后自由攝食高脂高糖飼料，引發(fā)大幅度血糖波動(dòng)。持續(xù)高血糖組自由攝食高脂高糖飼料。對(duì)血糖波動(dòng)組和持續(xù)高血糖組大鼠持續(xù)監(jiān)測(cè)血糖變化情況，避免由于血糖波動(dòng)過(guò)大、血糖過(guò)高而到大鼠死亡。

1.3 種植體表面處理與植入

將所有大鼠采用戊巴比妥鈉進(jìn)行全麻處理。在大鼠的右側(cè)脛骨骺端分別植入一枚經(jīng)微弧氧化處理的純鈦種植體，將切口縫合。以上各步驟嚴(yán)格執(zhí)行無(wú)菌操作，術(shù)后注射抗生素預(yù)防感染。

1.4 觀察方法及指標(biāo)

①糖耐量實(shí)驗(yàn):在術(shù)后4周時(shí)，從各組研究對(duì)象中各選取4只大鼠，空腹16 h后測(cè)其空腹血糖。隨后分別靜脈注射40%的葡萄糖溶液(2 g/kg)，注射后1 h以及2 h時(shí)測(cè)量血糖值。②組織形態(tài)學(xué)觀察:在種植體植入后第4周以及第8周分別在各組中隨機(jī)選取4只SD大鼠處死，將處死大鼠的右側(cè)脛骨分離，獲取帶有種植體的骨組織標(biāo)本。將標(biāo)本置于10%甲醛溶液中1周。采用梯度濃度乙醇溶液進(jìn)行脫水處理，使用聚甲基丙烯酸甲酯包埋。經(jīng)切片、染色后，使用熒光顯微鏡對(duì)切片進(jìn)行圖像采集，觀察各組種植體接觸率(Percentage of Bone-Implant Contact，BIC)，即圖像中骨與種植體表面直接接觸的長(zhǎng)度與種植體切面周長(zhǎng)比值的百分率。③種植體周?chē)墙M織TGF-β1的表達(dá)水平檢測(cè):在種植體植入后第12周，從各組隨機(jī)選取8只SD大鼠處死，其中4只用于繼續(xù)觀察種植體接觸率情況，另外4只用免疫組織SP檢測(cè)法檢測(cè)轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子TGF-B1的表達(dá)水平，用BI-2000醫(yī)學(xué)圖像分析系統(tǒng)對(duì)免疫組化結(jié)果進(jìn)行灰度值分析。

1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

2 結(jié)果

2.1 3組大鼠糖耐量試驗(yàn)血糖值比較

血糖波動(dòng)組以及持續(xù)高血糖組糖空腹血糖及餐后1 h、餐后2 h的血糖值均明顯高于對(duì)照組，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。而血糖波動(dòng)組空腹血糖及餐后1 h、餐后2 h的血糖值均明顯高于持續(xù)高血糖組，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。具體見(jiàn)表1。

表1 3組大鼠糖耐量試驗(yàn)血糖值比較 (mmol/L)

2.2 3組大鼠脛骨種植體植入術(shù)后種植體骨結(jié)合效果

術(shù)后4周，血糖波動(dòng)組以及持續(xù)高血糖組種植體周?chē)鹿切纬擅黠@少于正常對(duì)照組，差異顯著具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。而血糖波動(dòng)組和持續(xù)高血糖組脛骨種植體骨結(jié)合效果差異不大，不具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)。術(shù)后8周血糖波動(dòng)組仍未見(jiàn)明顯新骨形成，持續(xù)高血糖組種植體周?chē)鹿切纬擅黠@增多;術(shù)后12周，正常對(duì)照組及持續(xù)高血糖組種植體周?chē)鹿切纬蛇M(jìn)一步增多，而血糖波動(dòng)組與8周時(shí)變化不大，差異顯著具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)，具體見(jiàn)圖1。

圖1 3組大鼠術(shù)后脛骨種植體骨結(jié)合效果

2.3 3組種植體周?chē)墙M織TGF-β1表達(dá)水平比較

術(shù)后12周正常對(duì)照組TGF-β1表達(dá)水平明顯高于血糖波動(dòng)組以及持續(xù)高血糖組，而持續(xù)高血糖組TGF-β1表達(dá)水平高于血糖波動(dòng)組，差異顯著均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。具體見(jiàn)表3。

表3 各組TGF-β1表達(dá)水平比較

3 討論

隨著醫(yī)學(xué)水平的逐漸提高，口腔種植技術(shù)已經(jīng)逐漸成為了牙列缺損或缺失修復(fù)的重要手段。糖尿病是口腔種植的相對(duì)禁忌癥之一，其中血糖波動(dòng)是糖尿病的另一個(gè)表現(xiàn)形式。較多研究表明血糖波動(dòng)與糖尿病并發(fā)癥密切相關(guān)［4］，血糖波動(dòng)會(huì)促進(jìn)胰島細(xì)胞凋亡［5］，而胰島素能夠直接刺激成骨細(xì)胞形成。那么，血糖波動(dòng)是否是導(dǎo)致口腔種植體失敗的直接原因呢?O Erdoga［6］在13名血糖控制良好的糖尿病患者及7名無(wú)系統(tǒng)性疾病患者中植入種植體，分別在植入術(shù)后1個(gè)月、4個(gè)月檢查種植體穩(wěn)定性，并在植入后4個(gè)月、7個(gè)月檢測(cè)GCF及PICF表達(dá)水平，發(fā)現(xiàn)2組無(wú)差異。Amri［7］追蹤植入種植體的血糖控制良好的2型糖尿病患者2年，其臨床及影像學(xué)檢測(cè)與植入初期無(wú)明顯變化，與對(duì)照組亦無(wú)差異。大部分學(xué)者［8，9］也認(rèn)為血糖控制良好的糖尿病患者采用牙種植技術(shù)是可行的。本研究中正常對(duì)照組術(shù)后4周脛骨種植體骨結(jié)合率明顯高于持續(xù)高血糖組及血糖波動(dòng)組，而血糖波動(dòng)組和持續(xù)高血糖組脛骨種植體骨結(jié)合效果差異不大，這說(shuō)明了持續(xù)性高血糖對(duì)種植體植入初期的骨結(jié)合有干擾作用，這可能與胰島素抵抗延緩種植體周?chē)歉慕ㄓ嘘P(guān);在術(shù)后8周、12周，在血糖控制良好的持續(xù)高血糖組大鼠脛骨種植體周?chē)墙M織中仍可得到良好的骨結(jié)合，而血糖波動(dòng)組大鼠脛骨種植體周?chē)鷧s未見(jiàn)明顯骨生長(zhǎng)。提示了血糖波動(dòng)對(duì)種植體骨結(jié)合有抑制作用，且該作用對(duì)種植體周?chē)墙Y(jié)合的影響大于持續(xù)性高血糖。這提示我們血糖波動(dòng)在抑制種植體骨結(jié)合中起著更為重要的作用，在血糖控制良好的糖尿病患者中完全可以接受牙種植。

種植體骨結(jié)合的生理過(guò)程分為種植體植入新骨形成初期、骨-種植體界面改建期和種植體周?chē)鹿浅墒炱凇＾D(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子(transformng growth factor-B1，TGF-β1)對(duì)骨組織的形成和改建有重要的生理意義［10］。研究表明，在種植體周?chē)尤胪庠葱訲GF-β1，可加快骨結(jié)合速度［11］。本研究中也檢測(cè)到術(shù)后12周的正常對(duì)照組TGF-β1表達(dá)水平及BIC明顯高于血糖波動(dòng)組以及持續(xù)高血糖組，且TGF-B1的表達(dá)水平越高，BIC越高;而在持續(xù)高血糖組與血糖波動(dòng)組中，持續(xù)高血糖組TGF-β1表達(dá)水平及BIC也高于血糖波動(dòng)組。這提示了糖尿病抑制種植體周骨結(jié)合的機(jī)制可能與TGF-B1傳導(dǎo)通路異常有關(guān)，而當(dāng)糖尿病血糖波動(dòng)時(shí)這種影響可能更為密切。至于血糖波動(dòng)與TGF-B1的相關(guān)程度有望更進(jìn)一步的研究。這將為臨床上糖尿病患者牙種植技術(shù)中如何控制血糖以及改善種植體骨結(jié)合提供臨床決策性的依據(jù)。

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Discussion of the Effect and Mechanism on Blood Glucose Fluctuations Diabetic Rats Tibial Implant Bone

WU Shiqing，WEN Zhixin，CHEN Guodong

ObjectiveTo discuss the effect and mechanism of blood glucose fluctuation on osseointegration around implant in type2 diabetic rats.MethodsForty-eight male Sprague Dawley rats had been divided into normal control group three groups randomly.One of them was normal control group，the anther one of them was consistent high blood glucose group，and another group was glucose fluctuation.Glucose tolerance test and the bone-implant contact of the rat tibia bone implant were carried out on the three groups of rats.The TGF-beta1 expression level also be analyzed.ResultsGlucose tolerance test of the consistent high blood glucose group and the were exception.And that glucose level of the glucose fluctuation group at every point in time was significantly higher than that of the consistent high blood glucose group(P＜0.05).A titanium implant treated by micro-arcoxidation surface was planted into the right tibia bone of every rat.Killed the rats and harvested the tibia containing implants respectively at4，8 and12 weeks，and analyzed the osseointegration by the undecalcified tissue slices.At4 weeks，the percentage of bone-implant contact(BIC)in both experimental groups was less than in normal control group(P＜0.05).At8 weeks，the BIC in glucose fluctuation group was less than in consistent high blood glucose group(P＜0.05).At12 weeks，the TGF-beta1 expression level in normal control group was more than that in both experimental groups，and the TGF-beta1 expression level in consistent high blood glucose group was more than that in glucose fluctuation group.ConclusionBlood glucose fluctuation could restrain the osseointegration around implant in type2 diabetic rats，and the effect may be obvious than consistent high blood glucose.

Diabetes;Implant;Osseointegration;Glucose;TGF-β1

R-332

:Adoi:10.3969/j.issn.1671-332X.2016.08.007

佛山市衛(wèi)生局醫(yī)學(xué)科研基金(編號(hào):2015234);佛山市科技計(jì)劃項(xiàng)目(編號(hào):2015AB002063)

吳世卿 溫志欣 陳國(guó)棟:佛山市順德區(qū)第一人民醫(yī)院 廣東佛山528300