□駱月霞 惠州市質(zhì)量計量監(jiān)督檢測所

同位素稀釋-固相萃取-超高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜技術(shù)同時測定畜禽肉中四類獸藥殘留

□駱月霞 惠州市質(zhì)量計量監(jiān)督檢測所

本次研究，主要利用同位素稀釋-固相萃取-超高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜檢測方法對畜禽肉中4類獸藥殘留進行檢測。4類獸藥主要指青霉素類、喹諾酮類、磺胺類和硝基咪唑類，把此技術(shù)有效應(yīng)用到實際的樣品檢測中，經(jīng)多級質(zhì)譜準確質(zhì)量數(shù)值的測定，可對目標化合物進行準確分析。

同位素稀釋；固相萃??；超高效液相色譜；串聯(lián)質(zhì)譜；殘留

在一些牲畜感染性疾病的防治工作中，獸藥起到較好的作用，且在畜牧業(yè)的生產(chǎn)、漁業(yè)養(yǎng)殖、獸類飼養(yǎng)中的應(yīng)用較為廣泛。硝基咪唑類、磺胺類、喹諾酮類和青霉素類獸藥屬于常用的抗病菌藥物，但濫用、不合理應(yīng)用獸藥、不按照休藥期給藥，均會造成動物性食品內(nèi)獸藥殘留情況越來越嚴重。因此，采用安全方法測定畜禽肉中4類獸藥殘留具有重要意義。

1 材料和方法

1.1 材料

色譜純甲醇主要購自德國；色譜純甲酸主要購自美國；乙二胺四乙酸二鈉鹽、純磷酸氫二鈉購自國藥集團化學試劑有限公司；水為源自Milli-Q系統(tǒng)的純凈水。各種標準物質(zhì)的純度見表1。

1.2 溶液配制

1.2.1 標準溶液的配制

稱取以上標準品10 mg放于10 mL的容量瓶內(nèi)，用甲醇進行定容，將其配制為1 g/L的儲備液，將其完全密封并儲存至-18 ℃的冰箱中，然后再吸取已配制好的標準溶液50 μL，置于10 mL容量瓶中，用甲醇定容，配制成5 mg/L的混合標準溶液，將其完全稀釋，作為標準溶液，準備測量。

1.2.2 試劑配制

將1 000 mL 0.1 mol/L檸檬酸溶液和620 mL 0.2 mol/L磷酸氫二鈉溶液完全混合，pH值調(diào)整到4.0，配制成Na2EDTA-Mcllvaine溶液。

1.3 方法

1.3.1 提取

稱取1.8 g勻漿的試樣置于50 mL的離心管內(nèi)，并加入10 μL的內(nèi)標混合液，放于避光處2 min左右，之后加10 mL Na2EDTA-Mcllvaine溶液與乙腈（7∶3）的混合提取液，將其渦旋40～60 s，超聲提取10 min，經(jīng)12 000 r/min離心10 min后，提取上清液。然后加10 mL Na2EDTA-Mcllvaine溶液與乙腈（7∶3）的混合提取液，重復(fù)以上步驟，合并提取液，且在40 ℃下做氮吹縮減約6 mL，以備凈化[1]。

1.3.2 凈化

主要使用3 mL甲醇、水、Na2EDTA-Mcllvaine的緩沖液活化柱，用3 mL水沖洗以上提取液的上樣，抽干后使用甲醇3 mL與5% 氨水甲醇溶液洗脫，在45 ℃下進行氮吹到干，之后加入1 mL乙腈∶水為1∶9的溶液進行溶解，并渦旋混合1 min。

2 結(jié)果

2.1 色譜條件

本次研究中，選擇Waters Acquity UPLC BEH C18(100 mm×2 mm×1.7 μm)的色譜柱分離4類獸藥，對化合物保留較強，且色譜峰峰形好，能進行較好分離，以去除干擾雜質(zhì)；選用甲醇、乙腈作為強洗脫的流動相。該試驗過程中，分別設(shè)置0.1%、0.05%、0.2%甲酸水溶液作為研究的流動相，研究結(jié)果表明，0.1%甲酸水溶液體系能夠提供一個很好的離子化的條件，且峰面積的信號非常強。

2.2 萃取溶劑

因4類藥物酸堿性存在差異，且易溶在乙腈和甲醇當中，比較整個Na2EDTA-Mcllvaine-乙腈甲醇、乙腈以及Na2EDTA-Mcllvaine-甲醇復(fù)合的提取液的提取效果。

2.3 凈化條件

本次研究中，主要選用德國生產(chǎn)的5種（MCX、WAX、MAX、HLB和WCX）固相的萃取小柱，重點監(jiān)測其凈化的效果以及保留行為。由于MCX的固相萃取柱的pKa值所適合使用的范圍在3～10，而且藥物的pKa值范圍非常寬。因此，MCX的固相進行的萃取小柱對于不同類型藥物起到的吸附作用較明顯。

2.4 陽性定性確證于樣品監(jiān)測

結(jié)果顯示，陽性樣品4例，其中，豬肉的樣品中有磺胺二甲嘧啶2例，含量為98.5、250.1 μg/kg；而豬肉的樣品中含有磺胺鄰二甲氧嘧啶1例，含量為97.1 μg/kg。檢測4例陽性的豬肉樣品，其中磺胺二甲嘧啶80.2、250 μg/kg、磺胺鄰二甲氧嘧啶96.1 μg/ kg，表明兩種方法用于檢測過程中，其結(jié)果大體相似，證實此種方法的處理技術(shù)在整個畜禽肉內(nèi)4類獸藥殘留檢測中適用。

3 結(jié)語

本文主要分析在畜禽肉中檢測過程中，使用固相萃取-同位素稀釋-超高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜技術(shù)來檢測4類獸藥殘留，針對不同方法了解其應(yīng)用效果。

[1]其其格,郭根成.餐飲業(yè)蔬菜水果和畜禽肉中農(nóng)獸藥殘留的調(diào)查分析[J].農(nóng)村牧區(qū)機械化,2014,21(4):45.

[2]王玉玨,魏萍,劉光磊,等.動物性食品藥物殘留的監(jiān)管[J].畜牧獸醫(yī)科技信息,2015,10(5):23-24.