王彩先 劉華棟 詹麗娥 陸冰洋 唐娟 李婷婷 丁樹榮

摘要：本研究目的是通過乳酸諾氟沙星治療雞大腸桿菌病，總結(jié)出其對雞大腸桿菌病的效果以及藥物使用的劑量。從太原地區(qū)某雞場分離到一株大腸桿菌，使用乳酸諾氟沙星、氯霉素、卡那霉素、慶大霉素、紅霉素等藥物對其做藥敏實(shí)驗(yàn)，檢測出乳酸諾氟沙星對雞源大腸桿菌具有高敏感性。使用試管法測定其對雞大腸桿菌的最低抑菌濃度，結(jié)果表明乳酸諾氟沙星對雞大腸桿菌的最低抑菌濃度為0.24？g/mL。最后通過治療實(shí)驗(yàn)對180只無大腸桿菌病的雞做攻毒和治療實(shí)驗(yàn)，表明不同劑量的藥物治療組雞的死亡率明顯低于感染不給藥組。通過本實(shí)驗(yàn)證明乳酸諾氟沙星用于治療雞大腸桿菌病具備高效低毒特點(diǎn)，為雞大腸桿菌病的臨床用藥提供參考。

關(guān)鍵詞：乳酸諾氟沙星；大腸桿菌；藥敏實(shí)驗(yàn)；抑菌濃度

諾氟沙星屬于喹諾酮類第三代產(chǎn)品，在第二代的毗呢酸的基礎(chǔ)上，引入F原子，使抗菌范圍擴(kuò)大，抗菌活性顯著增強(qiáng)，所以第三代稱為氟咬諾酮類，是于1978年日本杏林制藥公司首次報(bào)道（AM-715，MK-366）。由于其不僅具有抗菌譜廣、殺菌活性強(qiáng)、生物利用度高等優(yōu)點(diǎn)，尤其是對革蘭氏陰性菌的抑菌作用明顯優(yōu)于第一、二代喹諾酮。而且該藥既能口服飲水，又能靜脈注射和肌肉注射給藥。所以自該藥產(chǎn)生以來，在我國乃至世界臨床醫(yī)學(xué)上已廣泛應(yīng)用，療效滿意，無明顯的不良反應(yīng)。在獸醫(yī)臨床上也得到廣泛的應(yīng)用。

乳酸諾氟沙星是乳酸與諾氟沙星結(jié)合生成的水溶性諾氟沙星乳酸鹽。在水中的溶解度比諾氟沙星提高1200倍，對機(jī)體組織刺激性小，使體內(nèi)生物活性物質(zhì)提高2-3倍，因而易吸收，作用快。它能直接作用于細(xì)菌的核，抑制細(xì)菌DNA旋轉(zhuǎn)酶，從而阻斷DNA復(fù)制，從細(xì)菌核的深處破壞細(xì)菌的代謝和增殖，因而能迅速把細(xì)菌殺死。乳酸諾氟沙星具有廣譜、高效、低毒、價(jià)廉等優(yōu)點(diǎn)。對革蘭氏陰性菌和革蘭氏陽性菌均有較強(qiáng)的殺滅作用。對鏈球菌的作用是吡哌酸的60倍，對禽多殺性巴氏桿菌的作用與環(huán)丙沙星相當(dāng)，對大腸桿菌和痢疾桿菌的作用超過氧氟沙星，是腸道感染的首選藥。安全范圍廣，毒副作用極小，雞的口服半致死量為3175mg/（kg·bw），是治療量的300余倍。價(jià)格與同類產(chǎn)品相比，以注射劑為例，價(jià)格僅為乳酸氧氟沙星的1/8，為乳酸環(huán)丙沙星的1/12。

本實(shí)驗(yàn)選取乳酸諾氟沙星也是試圖通過實(shí)驗(yàn)分析其對雞大腸桿菌病的治療效果。

1 材料和方法

1.1 藥物

乳酸諾氟沙星注射液和乳酸諾氟沙星預(yù)混劑是由鄭州瑞達(dá)制藥有限公司生產(chǎn)，含量5mg/mL，包裝5mL/瓶。藥敏紙片購于北京天壇藥物生物技術(shù)開發(fā)公司，共6種常見藥物，分別是：乳酸諾氟沙星、氯霉素、卡那霉素、慶大霉素、紅霉素、青霉素。諾氟沙星。大腸桿菌為太原地區(qū)某雞場分離。麥康凱瓊脂培養(yǎng)基購于中國廣東環(huán)凱微生物科技公司。營養(yǎng)瓊脂購于北京雙旋微生物培養(yǎng)基制品廠。三糖鐵瓊脂購于杭州天和微生物試劑有限公司，營養(yǎng)肉湯購于杭州天和微生物試劑有限公司，血瓊脂購于鄭州安圖綠科生物工程有限公司。

1.2 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物

20日齡的SPF雞200只，購于北京梅里亞微通實(shí)驗(yàn)動(dòng)物技術(shù)有限公司。

1.3 方法

1.3.1 藥敏實(shí)驗(yàn)采用K-B試紙擴(kuò)散法，挑取大腸桿菌單個(gè)菌落均勻涂布于營養(yǎng)瓊脂平板，將含有抗生素的藥敏紙片用燒灼滅菌的鑷子分別貼于平板表面，紙片之間間隔24mm以上，37℃培養(yǎng)24h后觀察結(jié)果，測量藥敏紙片抑菌圈的直徑，參照CLSI手冊中的標(biāo)準(zhǔn)作出判斷。

1.3.2 乳酸諾氟沙星最低抑菌濃度測定采用試管法，取無菌試管15支，第一試管中加入肉湯培養(yǎng)基0.9mL，其余14支試管各加入0.5mL。吸取5mg/mL乳酸諾氟沙星注射液0.1mL加入第1管中，充分混勻后吸出0.5mL移人第2管中，混勻后再由第2管移出0.5mL到第3管中，依次到第14管，棄去0.5mL。第15管作為對照。然后向各管中加入菌液0.05mL，置37℃恒溫培養(yǎng)24h觀察結(jié)果。兀細(xì)菌生長的藥物最高稀釋管即為該菌對藥物的最低抑菌濃度。

1.3.3 乳酸諾氟沙星對雞大腸桿菌病的治療實(shí)驗(yàn)將購買的SPF雞隨機(jī)分成6組，每組30只，分組情況如表1。試驗(yàn)開始將雞氣囊接種本次分離到的大腸桿菌，每只雞0.5mL，72h后給各治療組的雞在飲水中分別飲用含有相應(yīng)劑量的乳酸諾氟沙星和諾氟沙星，1次ld，連用Sd。記錄試驗(yàn)雞的臨床癥狀和死亡情況，死亡雞進(jìn)行剖檢，觀察其變化。

2 結(jié)果

2.1 藥敏試驗(yàn)結(jié)果

乳酸諾氟沙星31.3mm、氯霉素28.2mm、卡那霉素26.2mm、慶大霉素17.4mm、紅霉素11.1mm、青霉素8.0mm。結(jié)果表明大腸桿菌分離株對乳酸諾氟沙星最敏感。

2.2 乳酸諾氟沙星最低抑菌濃度測定結(jié)果

經(jīng)實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，第12支試管兀細(xì)菌生長，表明乳酸諾氟沙星對大腸桿菌對最低抑菌濃度為0.24μg/mL。

2.3 乳酸諾氟沙星對雞人腸桿菌治療結(jié)果治療結(jié)果如表2。

由表的結(jié)果可以看出，治療組雞的死亡率明顯低于感染后不給藥組。高、中劑量組的治療效果明顯優(yōu)于低劑量的乳酸諾氟沙星和對照藥物諾氟沙星。

3 討論

目前喹諾酮類藥物常用于治療革蘭氏陰性菌感染的疾病，特別是第三代喹諾酮類如諾氟沙星、氧氟沙星等藥物使用更為常見，尤其是在對大腸桿菌病的治療上，使用諾氟沙星更為常見，但其成品藥物多為其酸性鹽，如鹽酸諾氟沙星、乳酸諾氟沙星等。

本試驗(yàn)通過使用乳酸諾氟沙星對大腸桿菌病雞進(jìn)行治療，可以看出在高劑量治療組[1.2g/（kg·bw）]時(shí)其對人工致病的大腸桿菌病雞的治愈率可以達(dá)到100%，中劑量治療組[0.8g/（kg·bw）]也可以達(dá)到95%的治愈率，這明顯優(yōu)于使用諾氟沙星治療的84.2%的治愈率。表明乳酸諾氟沙星對本試驗(yàn)分離到的雞大腸桿菌對抗菌活性要優(yōu)于諾氟沙星。姜中其等的研究認(rèn)為3種諾氟沙星鹽（鹽酸諾氟沙星、煙酸諾氟沙星、乳酸諾氟沙星）對大腸桿菌、沙門氏菌的抗菌活性差異不大，和諾氟沙星差異也不大。陳志寶等也通過試驗(yàn)得出相同的結(jié)論。這與本試驗(yàn)結(jié)果不一致，有可能是本次的分離株存在變異的原因。

由于大腸桿菌很容易產(chǎn)生耐藥株，因此在養(yǎng)殖過程中應(yīng)該注意藥物的輪換和交替使用。