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        公豬精液的冷凍保存及解凍

        2016-03-10 16:48:34吳玉玉
        黑龍江動(dòng)物繁殖 2016年3期
        關(guān)鍵詞:干冰細(xì)管凍精

        吳玉玉

        (河南省延津縣畜牧局 453200)

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        公豬精液的冷凍保存及解凍

        吳玉玉

        (河南省延津縣畜牧局 453200)

        一般利用液氮(-196℃)作冷源(過(guò)去有用干冰作冷源的),將新鮮公畜精液經(jīng)過(guò)處理,分裝,冷凍保存,即為凍精制作。本文就豬精液冷凍保存稀釋液的制作、精液稀釋、降溫和平衡、精液的分裝和凍結(jié)及凍精的解凍進(jìn)行技術(shù)性闡述。

        1精液冷凍保存稀釋液

        精液冷凍保存的稀釋液一般以葡萄糖、乳糖、甘油為主要成分,其中甘油濃度以1%~3%為宜。據(jù)報(bào)道,一些配方中建議加入EDTA(乙二胺四乙酸),可起到良好作用。精液品質(zhì)與冷凍效果密切相關(guān),最好用濃精液制作凍精。

        2精液稀釋

        一般多采用一次稀釋法或二次稀釋法,三次稀釋法很少用。①一次稀釋法:常用于顆粒精液。把含甘油的稀釋液按要求比例一次加入精液之中,在8℃下平衡3.5~6 h,保證甘油能夠完全浸入精子內(nèi),產(chǎn)生抗凍保護(hù)作用。②二次稀釋法:常用于袋裝精液。為減少甘油對(duì)精子的有害作用,采用本法效果好。將采出的精液先以不含甘油的第一稀釋液稀釋至最后倍數(shù)的一半,經(jīng)1 h緩慢降溫至15℃,維持4 h,再?gòu)?5℃經(jīng)1 h降溫至5℃,然后用含甘油的第二稀釋液在同溫度下作等量第2次稀釋。在5℃下平衡2 h。③三次稀釋法:首先用脫脂奶將濃份精液在30℃下按1∶0.5倍作第1次稀釋,至1 h降溫至15℃;其次用蔗糖-卵黃液(11%蔗糖液80 mL加入卵黃20 mL),按原精液量1∶1作第2次稀釋,經(jīng)2~3 h降溫至5℃;進(jìn)一步在5℃下用含甘油的蔗糖-卵黃液(11%蔗糖78 mL加入卵黃20 mL、甘油2 mL),按原精液1:1作第3次稀釋。稀釋后的精液在38~40℃進(jìn)行鏡檢,要求精子活力不低于原精液。如果精液密度沒(méi)有測(cè)定,稀釋倍數(shù)一般以2~4倍為宜[1]。

        3降溫和平衡

        降溫指精液稀釋后在30℃以上,經(jīng)1 h由30℃降至15℃,維持4 h,再經(jīng)1 h降至5℃,或用原精在室溫靜置2 h后,離心增加濃度,經(jīng)2 h降至5℃[2]。平衡指加入含甘油的稀釋液對(duì)精液作用的時(shí)間,以防低溫打擊。

        4精液的分裝和凍結(jié)

        凍精采用顆粒、細(xì)管、安瓿瓶和袋裝四種分裝方法。細(xì)管凍精是當(dāng)今流行的凍精分裝方法:應(yīng)用材料為0.25 mL或0.5 mL塑料細(xì)管,在5℃下分裝精液,用聚乙烯粉末封口,充分平衡后凍結(jié)。顆粒法:將平衡的精液滴在一定溫度下凍結(jié)成0.1~0.2 mL的顆粒。安瓿法目前很少應(yīng)用。由于輸精量大,豬的精液也可用塑料袋裝,但效果不太好。

        根據(jù)劑量和冷源不同,凍結(jié)方法有干冰埋藏法和液氮熏蒸法。

        干冰埋藏法:A.顆粒冷凍法:將干冰置于木盒中,用滴管將5℃經(jīng)平衡的精液(0.1 mL或0.2 mL)滴入孔內(nèi),用干冰封埋2~4 min,收集凍精放入液氮或干冰內(nèi)貯存。B.細(xì)管、袋裝冷凍法:將分裝的精液平鋪在壓實(shí)的干冰面上,覆蓋干冰,2~4 min后將凍精移入液氮或干冰內(nèi)貯存。

        液氮熏蒸法:A.顆粒冷凍法:將裝有液氮的廣口保溫瓶上置一銅紗網(wǎng),距液氮面1~3 cm,預(yù)冷數(shù)分鐘,使其溫度維持在-80℃~-100℃(豬的滴凍溫度是-75℃~-80℃),將平衡的精液按規(guī)定量均勻而整齊地滴在上面,停留2~4 min,精液變白時(shí),收集凍精入瓶,移入液氮貯存。B.細(xì)管、袋裝冷凍法:與顆粒冷凍相同,將細(xì)管和袋裝精液放在距液氮面一定距離的銅紗網(wǎng)上,停留5 min,待精液凍結(jié)后收集貯于液氮中。

        凍精的保存:凍結(jié)的細(xì)管、顆粒、安瓿瓶或袋裝精液,經(jīng)解凍檢查合格后,即按標(biāo)識(shí)(品種、編號(hào)、采精日期、型號(hào))分別包裝,轉(zhuǎn)入液氮罐中貯備使用。

        4凍精的解凍

        解凍溫度、解凍液成分和解凍方法直接影響精子解凍后的活力。解凍方法分為低溫水解凍(0~5℃)法、溫水解凍(30~40℃)法和高溫解凍(50~70℃)法等,其中以30~40℃解凍方法實(shí)用、效果較好。解凍液的種類:除各自的稀釋液和精清外,較好的有葡萄糖3 g、檸檬酸鈉1.5 g,溶解在100 mL蒸餾水中,加安鈉咖注射液2 mL使用效果較好。解凍方法:細(xì)管、安瓿瓶和袋裝精液可直接投入35~40℃溫水中,待精液融化一半時(shí),立即取出備用。顆粒精液可干解凍,即將滅菌容器置于50~60℃水中恒溫后,投入一次輸精劑量的精液顆粒,讓其均勻散開(kāi),搖至融化,同時(shí)加入20~30℃解凍液1 mL;濕解凍是將1 mL解凍液裝入滅菌解凍容器,置于50~60℃溫水中預(yù)熱,然后投入一次輸精劑量的若干顆粒凍精,均勻散開(kāi),搖至融化,取出使用。解凍后精液應(yīng)立即用于輸精,不宜保存。

        5參考文獻(xiàn)

        [1]孫智.公豬精液的稀釋和保存[J].養(yǎng)殖技術(shù)顧問(wèn),2014(7):58.

        [2]趙書廣.中國(guó)養(yǎng)豬大成[M](第2版).北京:中國(guó)農(nóng)業(yè)出版社,2013.

        中圖分類號(hào):S828.3

        文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼:B

        文章編號(hào):1005-2739(2016)03-0029-02

        作者簡(jiǎn)介:吳玉玉(1988-),女,河南省延津縣人,大專,助理畜牧師。

        收稿日期:2015-12-28

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