邵錦歡,肖　翔,張達秀,鐘陽青

(東莞市塘廈醫(yī)院檢驗科，廣東東莞 523721)

?

·論著·

東莞地區(qū)珠蛋白生成障礙性貧血篩查及基因譜分析

邵錦歡,肖翔,張達秀,鐘陽青

(東莞市塘廈醫(yī)院檢驗科，廣東東莞 523721)

摘要:目的了解東莞地區(qū)珠蛋白生成障礙性貧血(簡稱地貧)的發(fā)生率及基因譜特征。方法收集2014年6月至2015年5月來該院就診的門診/住院患者的血液，根據血常規(guī)、電泳結果篩查疑似病例，再進行Gap-PCR和反向斑點雜交法(RBD)確診地貧類型。結果7 845 例樣本中疑似病例1 132例，疑似病例中檢出α和β地貧共662例，地貧基因總攜帶率為8.44%(662/7 845)。其中α-地貧412例，占5.25%，最常見的為αα/--SEA、-α3.7/αα兩型分別占α-地貧的61.17%和17.48%，還檢測出1例HKαα/--SEA混合型；β-地貧250例占3.19%，最常見的為βCD41-42/βN、βIVS-Ⅱ-654/βN、βCD17/βN這3型分別占β-地貧基因型的37.6%、23.2%和16.0%；α-地貧復合β-地貧12例占0.18%。結論廣東省東莞市為地貧高發(fā)地區(qū)，應該加強婚前檢查、遺傳咨詢，減少地貧患兒的出生率，提高人口素質。

關鍵詞:珠蛋白生成障礙性貧血；基因譜；流行病學調查

珠蛋白生成障礙性貧血(簡稱地貧),它是一種單基因遺傳病，可導致遺傳性溶血性貧血，分為α-珠蛋白生成障礙和β-珠蛋白生成障礙兩種類型[1-2]。本病高發(fā)于地中海沿岸及東南亞各國，我國以南方地區(qū)多見，尤以廣東、廣西和海南為甚[3]，據報道廣東省地貧基因的攜帶率達 11.07%左右[4]。地貧特別是重型地貧已給患兒的家庭和社會帶來了巨大的損失和負擔[5]，是導致出生缺陷高發(fā)，以及圍產兒和嬰兒死亡的一個主要原因[6]。國際國內的研究均表明，通過婚前、孕前檢查及產前篩查等防控措施可有效減少地貧患兒的出生[7]。本文通過調查和分析本地區(qū)的地貧基因攜帶率為遺傳質詢和產前檢查提供依據。

1資料與方法

1.1一般資料2014年6月至2015年5月來本院就診的門診/住院患者總7 845例，其中男性2 806例，女性4 039例,年齡1月至83歲。

1.2儀器與試劑血常規(guī)分析儀使用日本SYSMEX XE-5000血液分析儀；血紅蛋白電泳分析使用法國Sebia全自動電泳分析儀做瓊脂糖凝膠電泳；基因檢測使用深圳亞能公司的診斷試劑盒。所有儀器均使用配套試劑。

1.3方法

1.3.1標本收集每一個實驗對象使用EDIA抗凝管采集血液2～3 mL；初篩陽性的患者采集枸櫞酸鈉抗凝血3 mL進行PCR檢測。

1.3.2初篩每一份標本都使用SYSME XE-5000血液分析儀進行血常規(guī)檢測，觀察紅細胞平均體積(MCV)和平均血紅蛋白水平(MCH)兩項指標，MCV<80 fL、MCH<27 pg則使用瓊脂糖凝膠電泳進行血紅蛋白電泳檢測。血紅蛋白電泳異常的標本判斷為初篩陽性。

1.3.3地貧基因分析初篩陽性的標本使用亞能生物技術(深圳)有限公司的試劑盒分別檢測α-地貧基因和β-地貧基因；其中α-地貧基因檢測3種常見缺失型，分別為-SEA、-α3.7、-α4.2和3種我國常見的非缺失型，分別為αQSα、αWSα、αCSα；β-地貧基因17種突變，分別為41-42M、654M、-28M、71-72M、17M、13EM、IVS-Ⅰ-IM、27/28M、43M、-29M、31M、-32M、-30M、14-15M、CAPM、IntM、IVS-I．5M。檢測操作嚴格按照試劑說明書的要求進行。

2結果

2.1地貧基因攜帶情況7 845例樣本中地貧初篩陽性例數為1 132例。初篩陽性的樣本檢測出地貧基因總數為662例，其中α-地貧412例占62.36%，β-地貧250例占37.64%，其中α-地貧復合β-地貧有12例占0.18%。

2.2α-地貧基因檢測本次調查共檢測出α-地貧基因412例，試劑盒聲明的3種缺失型和3種非缺失型都有檢出，其中最常見的為αα/--SEA、-α3.7/αα兩型分別占α-地貧的61.17%和17.48%，其次為ααCS/αα、-α3.7/--SEA、αWSα/aa這3種基因類型，分別占α-地貧的5.83%、4.85%、2.91%。本次還檢測出1例HKαα/--SEA混合型。

2.3β-地貧基因檢測共檢出β-地貧250例，其中最常見的為βCD41-42/βN、βIVS-Ⅱ-654/βN、βCD17/βN這3型分別占β-地貧基因型的37.6%，23.2%和16.0%，其次為β-28/βN、βE雜合子、βCD71-72/βN這3種基因型，分別占8.80%、4.80%、4.00%。此外本研究還檢測出基因型βIVS-1-1，βCD27/28，β-29/βN 和βCD43/βN 等少見基因型。

2.4α-地貧復合β-地貧基因檢測本次共檢出12例復合型，其中-α3.7/αα復合βCD41-42/βN基因型3例，αWSα/aa復合β-28/βN基因型2例，-α3.7/αα復合βE雜合子、-α3.7/αα復合βCD17/βN αWSα/aa，αWSα/aa復合βIVS-Ⅰ-1，αα/--SEA復合βCD17/βN，αα/--SEA復合βCD71-72/βN，ααCS/αα復合βIVS-Ⅰ-16種基因型各1例。

3討論

地貧是一種血紅蛋白病，是由于調控珠蛋白合成的基因缺失或突變引起的一種單基因隱性遺傳病。最常見的為α-地貧和β-地貧兩種類型。

α-地貧基因位于16號染色體短臂13區(qū)3帶(16 P13.3)。其缺陷主要為缺失型和非缺失型，缺失型主要包括左側缺失(-α4.2)、右側缺失(-α3.7)和缺失兩個α珠蛋白基因的東南亞型(-SEA)。非缺失型主要為基因突變(αTα)。在中國人中最常見的突變類型主要有3種，分別為αQSα、αWSα、αCSα。本研究中共發(fā)現了412例α-地貧基因缺陷者，其中東南亞型(-SEA)占61.17%，右側缺失(-α3.7)占17.48%，點突變ααCS 占5.83，-a3.7/--SEA占4.85%，這4種基因型占了α-地貧基因基因總數的89.33%。α-地貧基因總缺陷率為5.25%，這與相關研究報道結果相符。

β-地貧基因位于11號染色體短臂1區(qū)2帶(11P1.2)，其主要為點突變。我國常見的突變類型有17種，分別為41-42M、654M、-28M、71-72M、17M、13EM、IVS-I-IM、27/28M、43M、-29M、31M、-32M、-30M、14-15M、CAPM、IntM、IVS-I-5M。在本次調查中一共檢出β-地貧基因缺陷250例，其中βCD41-42/βN、βIVS-Ⅱ-654/βN、βCD17/βN這3種分別占37.6%、23.20%、16.0%。β-地貧基因總缺陷率為3.19%。

本研究還檢測出了12例α-地貧復合β-地貧和1例HKαα/-SEA復合地貧。HKaa是種極少見的非平衡交叉連接，表現為在同一條染色體上同時含有-a3.7缺失的交叉連接片段[8-9]?；蛐蜑镠Kaa/aa的患者易被診斷為-a3.7/αα，與健康者比較，HKαα/αα患者的球蛋白mRNA 水平無明顯不同。

地貧為染色體隱性遺傳病，如果夫婦雙方均為攜帶者，則他們的后代中有1/2的概率為地貧基因攜帶者，有1/4的概率為地貧患者。目前對于輕型地貧還沒有有效的治療方法，重癥α-地貧常出現死胎和出生后水腫隨后死亡，重癥β-地貧在出生后3～6月出現貧血癥狀，只能通過造血干細胞移植能是患者得到長期的血液學療效，否則需要長期輸血來維持生命。無論是造血干細胞移植還是輸血治療對于一個家庭來說都是一個沉重的負擔。因此加強婚前檢查和遺傳質詢，提高地貧檢出率，優(yōu)生優(yōu)育減少地貧患兒的出生率對于家庭和社會都有重要意義。

參考文獻

[1]杜傳書．地中海貧血研究的現在與未來[J]．中華醫(yī)學遺傳雜志，1996，13(5)：257．

[2]Schwartz PE,Taylork J.Is early detecti on of ovari an can cer possible[J].Ann Med,1995,27(5):519-528.

[3]梁華銘，黎金美．1 826例育齡期婦女地中海貧血篩查結果分析[J]．中國實用醫(yī)藥，2010，5(17)：52-53．

[4]杜麗，尹愛華，張彥，等．2 171例地中海貧血產前基因診斷回顧性分析[J]．國際婦產科學雜志，2012，39(2)：208-210．

[5]Kojima M,Hosoda H,Date Y,et al.Ghrelin is a growth-hormone-releasing acylated peptide from stomach[J].Nature,1999,402(6762):656-660.

[6]朱慧明．24 743例婚檢人群地中海貧血篩查情況分析[J]．中國婦幼保健，2011，26(23)：3598-3599．

[7]楊文姬，麥杰，樊銳全．出生缺陷干預及優(yōu)生篩查體系的效果分析[J]．中國優(yōu)生與遺傳雜志，2010，18(4)：123-124．

[8]Wang W,Chan AY,Chan LC,et al.Unusual rearrangement of the alpha-globin gene cluster containing both thealpha 3.7 and alpha alphaalphaanti-4.2 crossover junctions:clinical diagnostic implications and possible mechanisms[J].Clin Chem,2005,51(11):2167-2170.

[9]Shang X,Li Q,Cai R,et al.Molecular characterization and clinical presentation of HKαα and anti-HKαα alleles in southern Chinese subjects[J].Clin Genet,2013,83(5):472-476.

Thalassemia gene detection and investigate in Dongguan

ShaoJinhuan,XiaoXiang,ZhangDaxiu,ZhongYangqing

(DepartmentofClinicalLaboratory，TangxiaHospitalofDongguan,Dongguan,Guangdong523721，China)

Abstract:ObjectiveTo investigate the type of gene mutation and its distribution in patients with thalassemia in Dongguan．Methods7 845 specimens collected from the patients and individuals with physical examination in our hospital from June 2014 to May 2015 were performed according to the results of routine blood and electrophoresis screening with suspected cases．The specimens with phenotype positive were definitely verified the thalassemia type by using Gap-PCR and reverse dotblot(RDB).ResultsAmong 7 845 specimens，suspected cases of 1 132 cases,662 specimens were finally diagnosed as α-thalassemia and β-thalassemia,with the thalassemia carrying rate of 8.44%(662/7 845),including 412 cases(5.25%) of a-thalassemia.The most common type of αα/--SEA,-α3.7/αα accounted for 61.17% and 17.48% in α-thalassemia,also detected HKαα/--SEA mixed type in 1 case and 250 cases(3.19%) of β-thalassemia cases．The most common type of βCD41-42/βN，βIVS-Ⅱ-654/βN，βCD17/βN accounted for 37.6%，23.2%,16.0% in β-thalassemia.The α-thalassemia composite β-thalassemia for 12 cases(0.18%).ConclusionDongguan city of Guangdong province is a high incidence area of thalassemia.Premarital examination,genetic counseling should be strengthened,and reduce the birth rate of the thalassemia children to improve the quality of the population.

Key words:thalassemia；genotypes；epidemiological investigation

(收稿日期：2015-12-22)

DOI:10.3969/j.issn.1673-4130.2016.09.031

文獻標識碼：A

文章編號：1673-4130(2016)09-1230-02

作者簡介：邵錦歡，女，主管技師，主要從事分子診斷工作研究。