劉曉穎 肖雪

哈藥集團(tuán)制藥六廠 150000

HPLC法測定小兒氨酚黃那敏顆粒的有關(guān)物質(zhì)

劉曉穎 肖雪

哈藥集團(tuán)制藥六廠 150000

目的：對小兒氨酚黃那敏顆粒中的有關(guān)物質(zhì)利用HPLC方法進(jìn)行測定。方法：利用色譜圖上的數(shù)據(jù)進(jìn)行分析，方法上可以采用醋酸氨溶液甲醇作為數(shù)據(jù)研究的流動相，并在實(shí)驗(yàn)過程中對進(jìn)樣量、柱溫、流速、波長等進(jìn)行檢測。結(jié)果：實(shí)驗(yàn)終止后發(fā)現(xiàn)對氨基酚參與實(shí)驗(yàn)過程中，在基礎(chǔ)范圍內(nèi)與峰面積上的線性關(guān)系呈現(xiàn)良好的狀態(tài)，平均回收率上的數(shù)值達(dá)到了99%，檢測限的結(jié)果為2ng。結(jié)論：該實(shí)驗(yàn)方法真實(shí)有效，操作簡便?？梢宰鳛樾喊狈狱S那敏顆粒中有關(guān)物質(zhì)的測定方法進(jìn)行推廣。

高效液相色譜法；小兒氨酚黃那敏；對氨基酚

小兒氨酚黃那敏顆粒在兒科藥品使用過程中屬于常見的抗感冒制劑藥品，這種藥品由于含有馬來酸氯苯那敏與人工牛黃等藥物成分，所以在功效上具有清熱解毒的作用，可以對感冒引起的頭痛發(fā)熱等癥狀進(jìn)行相應(yīng)的緩解，在實(shí)際的臨床使用中得到較好的效果。小兒氨酚黃那敏顆粒主要的藥品成分為對乙酰氨基酚，其它雜質(zhì)組成成分為對氨基酚。

1 儀器與試藥

LC-20AB高效液相色譜儀，SPD-20A高效液相色譜儀(日本島津公司)，XS205DU型電子天平(梅特勒有限公司)。對氨基酚對照品(中國食品藥品檢定研究院，批號:100802-201203，含量:100%)，對乙酰氨基酚對照品(中國食品藥品檢定研究院提供，批號:100018-201409，含量:100%)，小兒氨酚黃那敏顆粒［批號:150713,161101，161127,161203哈藥集團(tuán)制藥六廠，規(guī)格:每袋含對乙酰氨基酚125mg，馬來酸氯苯那敏0.5mg，人工牛黃5mg］;甲醇為色譜純，水為重蒸餾水，其余試劑均為分析純。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件

色譜柱為CAPCELLPAKMGⅡC18色譜柱(150mm×4.6mm，5μm);流動相為 0.05%醋酸銨溶液-甲醇(85∶15)，檢測波長為232nm，流速為1ml?min－1，進(jìn)樣量為10μl，柱溫:30℃，理論板數(shù)為2000，對氨基酚和對乙酰氨基酚的分離度應(yīng)符合要求。

2.2 溶液的制備

2.2.1 對照品溶液 精密稱取對氨基酚對照品10.10mg，置100ml量瓶中，加20%甲醇溶解并稀釋至刻度，作為對照品貯備液;取對照品貯備液0.5ml，置10ml量瓶中，加20%甲醇稀釋至刻度，作為對照品溶液;精密稱取對乙酰氨基酚對照品24.21mg，置5ml量瓶中，加20%甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，作為對乙酰氨基酚對照品溶液;取對照品貯備液0.4ml，置10ml量瓶中，加供試品溶液稀釋至刻度，作為系統(tǒng)適用性溶液。

2.2.2 供試品溶液

取供試品10袋，精密稱定研細(xì)，稱取適量(約相當(dāng)于對乙?；?25mg)，置25ml量瓶中，加20%甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，濾過，取續(xù)濾液即得。

2.2.3 陰性樣品溶液

按處方配比，取除對乙?；油獾钠渌M分，按“2.2.2”項供試品溶液中各組分濃度制得陰性樣品溶液。

2.3 專屬性試驗(yàn)

取對氨基酚、對乙酰氨基酚對照品溶液、供試品溶液及陰性樣品溶液，在上述色譜條件下進(jìn)行分析，結(jié)果表明，對氨基酚與對乙酰氨基酚的分離度符合要求.

2.4 線性關(guān)系考察

分別精密吸取對氨基酚對照品貯備液0.1，0.2，0.4，0.6，1.0，2.0ml，置10ml量瓶中，用20%甲醇稀釋至刻度，作為系列對照溶液。分別精密吸取 10μl，注入色譜儀，照上述高效液相色譜法測定對氨基酚峰面積，記錄色譜圖，以進(jìn)樣濃度為橫坐標(biāo)，峰面積為縱坐標(biāo)，進(jìn)行線性回歸，得回歸方程Y=1.99× 103X+8.83×103，r=0.9991，結(jié)果表明對氨基酚在9.8784～197.5680ng范圍內(nèi)呈良好線性關(guān)系。

2.5 穩(wěn)定性試驗(yàn)

像《摩西五經(jīng)》所規(guī)定的這種儀式的制度太嚴(yán)格了，他要求食品完全一致。其實(shí)摩西是把以色列的飲食神圣化、規(guī)格化了，使其完全同一。而中國的春節(jié)或其他節(jié)日，只有一樣相同，其他可以不同，如春節(jié)包餃子，元宵節(jié)吃元宵，端午節(jié)吃粽子，中秋節(jié)吃月餅，但是其他的菜肴則根據(jù)各地區(qū)、各家的喜好，自行安排。

取“2.2.2”項下的系統(tǒng)適用性溶液，分別于0，1，2，4h進(jìn)行測定，經(jīng)計算在4h內(nèi)對氨基酚峰面積的RSD為0.7%(n=4)，表明4h內(nèi)對氨基酚穩(wěn)定，且對乙酰氨基酚不影響對氨基酚的含量。

2.6 精密度試驗(yàn)

取“2.2.1”項下的對照品溶液，連續(xù)進(jìn)樣6次，計算對氨基酚峰面積的RSD為0.2%(n=6)，表明精密度良好。

2.7 檢測限和定量限測定

配制一定濃度的對氨基酚對照品溶液，分別進(jìn)樣，分別計算檢測限和定量限，測得對氨基酚檢測限為2ng，定量限為7ng。

2.8 重復(fù)性試驗(yàn)

取同一批號供試品溶液，按“2.2.2”項下方法制備供試品溶液5份，在上述色譜條件下測定，結(jié)果對氨基酚平均含量為0.6%，RSD為0.5%(n=5)，表明該方法重復(fù)性較好。

2.9 回收率試驗(yàn)

按處方配比，取陰性樣品溶液置10ml量瓶中，共9份。精密量取不同濃度對氨基酚對照品溶液加入上述9個量瓶中，制備高、中、低3個不同濃度的溶液，加20%甲醇稀釋至刻度，搖勻，濾過，分別測定對氨基酚的含量，計算加樣回收率，結(jié)果平均回收率為99.7%，RSD=0.8%(n=9)。

取4批樣品，分別測定，按外標(biāo)法以對乙酰氨基酚的標(biāo)示量計算，結(jié)果對氨基酚含量分別為0.07%、0.03%、0.06%、0.05%。

3 討論

3.1 流動相的選擇

在流動相的選擇上，分別為 0.5%冰醋酸-甲醇（20:80）與0.5%的醋酸氨溶液：甲醇（85:15），原有標(biāo)準(zhǔn)檢測方法主要采用冰醋酸溶液的測定，但是為了實(shí)驗(yàn)過程中可以進(jìn)行方便性的操作，本次實(shí)驗(yàn)采用此流動相作為實(shí)驗(yàn)結(jié)果依據(jù)時發(fā)現(xiàn)該流動相對氨基酚和相鄰雜質(zhì)的分離效果不是很理想，但是在醋酸氨溶液的使用上卻得到了很好的參考效果，所以實(shí)驗(yàn)研究人員決定使用醋酸氨溶液作為分離制劑進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。

3.2 檢測波長選擇

操作過程中可以采用對氨基酚作為對照品進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，此時應(yīng)使用濃度為5ug?min－1

的溶液作為本次實(shí)驗(yàn)的對照液。此時把制成的溶液放在紫外線吸收波長的設(shè)備下進(jìn)行掃描，在掃描過程中發(fā)現(xiàn)對氨基酚溶液在232nm波長下可以達(dá)到最大吸收，所以本次實(shí)驗(yàn)應(yīng)采用232nm波長作為實(shí)際的參考數(shù)據(jù)。

3.3 溶劑的選擇

在藥品含量實(shí)際檢測的過程中,涉及到對制劑中的乙酰氨基酚含量檢測步驟時,可以采用三種溶解上的方法進(jìn)行實(shí)驗(yàn)研究，因?yàn)橐阴０被釉乜梢栽谒嵝詶l件下分解，為了讓對乙酰氨基酚在檢驗(yàn)過程中的分解情況可以達(dá)到實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)上的參考要求，實(shí)驗(yàn)過程中分別選擇了流動相、水與20%的甲醇溶液三種試劑的組合進(jìn)行實(shí)驗(yàn)步驟上的開展。實(shí)驗(yàn)步驟分別進(jìn)行完成后，結(jié)果發(fā)現(xiàn)在20%的甲醇溶液中樣品的分離度與性質(zhì)都達(dá)到了較為穩(wěn)定的狀態(tài)。所以，根據(jù)試劑上的穩(wěn)定性影響，應(yīng)選擇20%的甲醇溶液作為本次實(shí)驗(yàn)的溶劑。

小兒氨酚黃那敏顆粒在實(shí)際應(yīng)用中，被作為兒科常用的感冒藥來進(jìn)行使用。在治療效果上比較穩(wěn)定，但在對乙酰氨基酚生產(chǎn)時乙酰化不完全情況下及儲存過程中容易發(fā)生水解，產(chǎn)生有毒的降解產(chǎn)物對氨基酚，所以針對于這種情況，中國藥典在藥品制作過程中對于乙酰氨基酚的品種與含量上的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行了嚴(yán)格的規(guī)范，所以藥品制劑上的元素毒性對于兒童用藥安全具有非常大的影響作用，為了保障兒童用藥上的安全，國家應(yīng)加大對藥品制劑含量上的監(jiān)控與規(guī)定。

[1]HPLC法測定氨咖黃敏膠囊中的對氨基酚[J].凌真,李倚云,聞琍毓,丁蘇蘇,王威.中國藥品標(biāo)準(zhǔn).2013(02)

[2]小兒氨酚黃那敏顆粒中對乙酰氨基酚及馬來酸氯苯那敏含量及含量均勻度考察[J].郝晶晶,李偉,李海亮,梁卓,李金梅.中國藥師.2013(01)

[3]HPLC法測定復(fù)方氨酚烷胺片中對氨基酚的限量[J].田洪根,王洪明.中國藥事.2007(11)

R927.11

A

1672-5018（2016）11-240-01