王文龍，黃瀟慧，張金盈

(鄭州大學(xué)醫(yī)學(xué)院第一附屬醫(yī)院心血管內(nèi)科,河南鄭州450052)

急性心肌梗死患者血小板表面糖蛋內(nèi)Ⅱb/Ⅲa的表達(dá)及意義

王文龍，黃瀟慧，張金盈

(鄭州大學(xué)醫(yī)學(xué)院第一附屬醫(yī)院心血管內(nèi)科,河南鄭州450052)

目的探討急性心肌梗死患者血小板表面糖蛋白（GP)Ⅱb/Ⅲa的表達(dá)情況。方法健康對照組、急性心肌梗死組和急性心肌梗死組伴血小板減少組間血小板數(shù)值及CD41／CD61檢測。急性心肌梗死組伴血小板減少組數(shù)值分層分為三組。應(yīng)用流式細(xì)胞術(shù)檢測急性心肌梗死患者，急性心肌梗死伴血小板減少患者及健康對照血小板表面GPⅡb/Ⅲa的陽性表達(dá)率。應(yīng)用SPSS 15.0軟件，所獲數(shù)據(jù)采用方差分析和t檢驗(yàn)。結(jié)果各組血小板數(shù)比較：急性心肌梗死組明顯高于健康對照組。急性心肌梗死伴血小板減少組明顯少于健康對照組。各組間PLT、CD41+/CD61-、CD41-/CD61+、CD41+/CD61+比較，PLT P均＜0.0005；CD41+/CD61-，P均＜0.0005；CD41-/CD61+，P均＜0.0005，均有非常顯著性差異。CD41+/CD61+,急性心肌梗死組Y與急性心肌梗死伴血小板減少組比較，P＜0.05，有顯著性差異。AMI伴PLT減少組與對照組、急性心肌梗死與對照組比較，P均＜0.0005，均有非常顯著性差異。血小板數(shù)值分層后三組與健康對照組CD41／CD61值比較，CD41+/CD61-比較，血小板，（80～100）×109/L∶（50～80）×109/L、（80～100）×109/L∶（30～50）×109/L、（50～80）×109/L∶（30～50）× 109/L，，P均＜0.0005，有非常顯著性差異。CD41-/CD61+比較血小板，（80～100）×109/L∶（50～80）× 109/L，P＞0.05，無顯著性差異。其，P均＜0.0005，均有非常顯著性差異。CD41+/CD61+比較，血小板，（80～100）×109/L∶（50～80）×109/L，P＞0.05。其余P均＜0.0005，均有非常顯著性差異。結(jié)論流式細(xì)胞術(shù)檢測血小板GPⅡb／Ⅲa對采用抗血小板聚集治療急性心肌梗死具有重要指導(dǎo)意義。

急性心肌梗死/診斷；血小板糖蛋白(GP)ll b／Illa復(fù)合物；流式細(xì)胞術(shù)

急性心肌梗死是指冠狀動(dòng)脈分支嚴(yán)重狹窄或完全閉塞而致部分心肌缺血性壞死；斑塊血栓形成約占90％；冠脈痙攣約占10％；斑塊下出血形成血腫極少見。血小板在血栓形成過程中發(fā)揮著重要的作用。血小板膜糖蛋白I b-IX-V、I a-II a及Ⅱb-Ⅲa在血小板黏附、聚集乃至血栓形成過程中不可或缺的重要成分。血小板表面的膜糖蛋白是決定血小板粘附、釋放和聚集功能。糖蛋白主要有GP I b、GPⅡb、GPHIa、CD62p、CD63等[1]。約75％的抗原位于血小板膜GPⅡb/Ⅲa或GP I b／Ⅸ復(fù)合體上，另外25％可能位于其他血小板糖蛋白上[2]。為此，我們自2015年7月—2016年7月間應(yīng)用流式細(xì)胞術(shù)(FCM)對急性心肌梗死及急性心肌梗死伴血小板減少的患者進(jìn)行檢測，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 臨床資料

1.1 一般資料急性心肌梗死患者62例，其中急性心肌梗死患者52例。男性30例，女性22例，中位年齡45歲；急性心肌梗死伴血小板減少患者10例。男性5例，女性5例，中位年齡50歲。健康體檢者20名為對照組。所有受試者近1周均未使用影響血小板活性的藥物?；颊呓M與健康對照組年齡、性別、受教育程度等一般資料比較，P＞0.05，無顯著性差異，具有可比性。

1.2 方法采集空腹靜脈血2 ml乙二胺四乙酸(EDTA)抗凝。1000 r／min離心5 min，制備富血小板血漿，取富血小板血漿200 ml，加等量0.1％多聚甲醛固定30 min；用于流式細(xì)胞儀檢測血小板GPⅡb／Ⅲa。IgGl(mouse)一PE，IgGl(mouse)一異硫氰酸熒光素(FITC)，PE標(biāo)記的CD61(CD61一PE)及FITC標(biāo)記的CD41(CD41-FITC)單克隆抗體均購自Bekman Coulter公司。流式儀為美國Bek-manCoulter公司產(chǎn)品CytomicFC 500。離心機(jī)為美國Bekman Coulter公司產(chǎn)品。流式細(xì)胞術(shù)檢測血小板GPⅡb/Ⅲa：分別在對照管與實(shí)驗(yàn)管中加入5μ l已固定好的富血小板血漿，對照管中分別加5μ l IgG-PE和5ulIgG-FITC，實(shí)驗(yàn)管中分別加入5 μ lCD61-PE與5ulCD41-FITC；兩管中分別加入50 μ l生理鹽水混勻后暗室放置30 min，加生理鹽水500 μ l，2000 r／min離心10 min，棄去上清，再加入500 μ l生理鹽水上機(jī)檢測。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理應(yīng)用SPSS 15.0軟件，所獲數(shù)據(jù)采用方差分析和t檢驗(yàn)。

2 結(jié)果

2.1 各組血小板數(shù)比較急性心肌梗死組明顯高于健康對照組。急性心肌梗死伴血小板減少組明顯少于健康對照組。見表1。

2.2 流式細(xì)胞術(shù)檢測血小板GPⅡb／Ⅲa(CD41／CD61)急性心肌梗死患者中血小板GPⅡb／Ⅲa水平高于健康對照（見圖1），兩者之間在CD41+/CD61-，CD41-/CD61+，CD41+/CD61+中均有顯著性差異(均為P＜0.01)。急性心肌梗死伴血小板減少患者血小板GPⅡb／Ⅲa水平在CD41+/CD61-，CD41-/CD61+，CD41+/CD61+檢測中均高于健康對照。見表1。

表1 各組間血小板數(shù)值及CD41／CD61檢測結(jié)果（ˉx±s）

圖1 ：CD41／CD61的流式檢測結(jié)果

2.3 流式細(xì)胞術(shù)檢測血小板GPⅡb/Ⅲa(CD41／CD61)對心肌梗死伴血小板減少患者在血小板數(shù)值分層中（80～100）×109/L，（50～80）×109/L及（30～50）×109/L中，其中（80～100）×109/L及（50～80）× 109/L患者中血小板GPⅡb/Ⅲa水平較健康對照組升高，不論在CD41+/CD61-，CD41-/CD61+，CD41+/CD61+中均有顯著性差別。血小板數(shù)值（30～50）×109/L患者血小板GPⅡb/Ⅲa水平不論在CD41+/CD61-，CD41-/CD61+，CD41+/CD61+均較健康對照組低。見表2。

表2 AMI伴血小板減少組血小板數(shù)值分層后CD41／CD61檢測結(jié)果（ˉx±s,％）

3 討論

急性心肌梗死（AMI）后血漿中促血小板激活物質(zhì)被釋放，血小板活性及粘附性增高［3,4］，血小板α-顆粒膜蛋白（GMP-140）釋放增多［5,6］。血小板膜表面糖蛋白Ⅳ（GPIV）分布增多及血小板內(nèi)凝血敏感蛋白（TSP）是血小板激活敏感指標(biāo)［7,8］，比GMP-140增多更高［9］，兩者血小板膜表面形成結(jié)合體，參與血小板的不可逆聚集。血小板膜糖蛋白是發(fā)揮作用的功能部位，膜糖蛋白比例最高的物質(zhì)是GP II b／IIIa。血小板表面主要有糖萼蛋白和細(xì)胞膜組成。糖萼蛋白為細(xì)胞外衣，有糖蛋白和糖鏈部分組成。膜蛋白主要為糖蛋白，其中GpΙ b參與血小板的粘附，GpⅡb/Ⅲa與血小板聚集有關(guān)。GPⅡb／m a受體分布于血小板表面．血小板聚集和血栓形成的關(guān)鍵。每一細(xì)胞約有GPⅡb/Ⅲa受體50000個(gè)。每個(gè)受體是由a和β亞單位組成。相對分子質(zhì)量為92，由762個(gè)氨基酸的組成。電鏡下血小板內(nèi)有許多細(xì)胞器，其中重要的是α顆粒，致密δ顆粒，溶酶體γ顆粒。α顆粒主要含有β血小板球蛋白，β血小板球蛋白是血小板特異的蛋白質(zhì)，可抑制血管內(nèi)細(xì)胞產(chǎn)生PGΙ，促進(jìn)血小板聚集[9]。

急性心肌梗死患者中測得血小板數(shù)值高于健康人群，其中血小板GPⅡb/Ⅲa水平也較健康對照明顯升高，是急性心肌梗死患者應(yīng)用抗血小板聚集藥物的原因。疾病組間PLT、CD41+/CD61-、CD41-/CD61+、CD41+/CD61+比較，PLT各組與健康對照組比較，P＜0.0005；均有非常顯著性差異。CD41+/CD61-，P＜0.0005；CD41-/CD61+，P＜0.0005;均有非常顯著性差異。CD41+/CD61+,AMI組Y與AMI伴PLT減少組比較，P＜0.05，有顯著性差異。AMI伴PLT減少組與對照組、AMI與與對照組比較，P均＜0.0005，均有非常顯著性差異。結(jié)果表明AMI和AMI伴PLT減少者與健康對照組均有變化。

AMI伴PLT減少數(shù)值分層與健康對照組CD41/ CD61值比較，CD41+/CD61-比較，PLT（80～100）× 109/L∶（50～80）×109/L、（80～100）×109/L∶（30～50）×109/L、（50～80）×109/L:（30～50）×109/L，P＜0.0005，均有非常顯著性差異。CD41-/CD61+比較, PLT（80～100）×109/L∶（50～80(）×109/L，P＞0.05，無顯著性差異。其余P＜0.0005，均有非常顯著性差異。CD41+/CD61+比較，PLT（80～100）×109/L∶（50～80）×109/L，P＞0.05。其余P＜0.0005，均有非常顯著性差異。

血小板數(shù)值分層中（80～100）×109/L及（50～80）×109/L患者中血小板GPⅡb/Ⅲa水平較健康對照升高，（30～50）×109/L患者血小板GPⅡb/Ⅲa水平較健康對照低。

抗血小板聚集藥物只在血小板數(shù)值正常及偏高人群中應(yīng)用，確定其血小板GPⅡb/Ⅲa水平也明顯高于健康人群。雖然血小板數(shù)較正常人為低但只要血小板GPⅡb/Ⅲa水平較高，則應(yīng)用抗血小板聚集藥物。故大膽推薦一下血小板≥50×109/L且血小板GPⅡb/Ⅲa水平高于健康人群中，抗血小板聚集藥物可在嚴(yán)格觀察下使用。

急性心肌梗死血小板聚集的機(jī)制復(fù)雜，影響血小板活化的因素很多。如麻醉、手術(shù)、血小板功能缺陷。其治療的選擇也可根據(jù)病人血管解剖因素、血流動(dòng)力學(xué)、血小板數(shù)值及功能等多種因素全面考慮，采取針對性治療。急性心肌梗死患者血小板表面糖蛋白Ⅱb/Ⅲa的表達(dá)有助于指導(dǎo)急性心肌梗死疾病的抗血栓治療，尤其是GPⅡb/Ⅲa受體阻斷藥的適時(shí)應(yīng)用。不同實(shí)驗(yàn)室所測陽性表達(dá)率不同[10]，可能為血小板容易活化，處理時(shí)間或方法不同所致所致。

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Patients with Acute Myocardial Infarction,Platelet Surface Sugar inside the EggⅡb/Ⅲa Expression and Meaning

Wang Wenlong,Huang Xiaohui,Zhang Jinying
(The First Affiliated Hospital of Zhengzhou University,Zhengzhou 450052,Henan)

ObjectiveTo investigate the platelet surface glycoprotein(GP)in patients with acute myocardial infarc?tionⅡb/Ⅲa expression.MethodsHealthy controls,acute myocardial infarction group and acute myocardial infarction associated with thrombocytopenia group platelets between numerical and CD41/CD61 detection.Acute myocardial infarc?tion associated with thrombocytopenia group numerical layers are divided into three groups.Application of flow cytometry detection in patients with acute myocardial infarction,acute myocardial infarction with thrombocytopenia patients and healthy controls of platelet surface GPⅡb/Ⅲapositive expression rate.Application of SPSS 15.0 software,the data ob?tained using analysis of variance and t test.Results The groups of platelet count:acute myocardial infarction group is sig?nificantly higher than healthy control group.Acute myocardial infarction with thrombocytopenia group significantly lessthan healthy controls.Each group PLT,CD41+/CD61-and CD41-/CD61+,CD41+/CD61+comparison,PLT,P＜0.0005.CD41+/CD61-,P＜0.0005.CD41-/CD61+,P＜0.0005,all have very significant difference.CD41+/CD61+, acute myocardial infarction group compared with acute myocardial infarction with thrombocytopenia group Y,P＜0.05, there is significant difference.AMI with reduced PLTgroup and control group,acute myocardial infarction compared with control group,P＜0.0005,all have very significant difference.Platelet numerical layered after three groups com?pared with healthy control group CD41/CD61,CD41+/CD61-comparison of platelets,（80～100）×109/L:（50～80）× 109/L,（80～100）×109/L:（30～50）×109/L,（50～80）×109/L:（30～50）×109/L P＜0.0005,there is a very significant differ?ence.CD41-/CD61+more platelets,（80～100）×109/L:（50～80）×109/L,no significant difference.The rest of the P＜0.0005,all have very significant difference.CD41+/CD61+comparison,platelets,（80～100）×109/L:（50～80）×109/L, P＞0.05.The rest of the P＜0.0005,all have very significant difference.Conclusion Flow cytometry to detect antiplate?let GPⅡb/Ⅲa using platelet aggregation in treatment of acute myocardial infarction(mi)has important guiding signifi?cance.

Acute myocardial infarction(mi)/diagnosis;Platelet glycoproteinⅡb/Ⅲa compounds;Flow cytom?etry

R541.4

：A

：1008-4118（2016）04-0005-04

10.3969/j.issn.1008-4118.2016.04.002

2016-11-01

張金盈。E-mail:Vellonvon@foxmail.com。