解偉濤，梁 躍，喬松林，郝慧芳，郭成留

(河南省農(nóng)業(yè)科學(xué)院 動物免疫學(xué)重點實驗室, 河南 鄭州 450002)

?

2014—2016年河南省豬偽狂犬野毒感染和免疫情況血清學(xué)調(diào)查

解偉濤，梁 躍，喬松林*，郝慧芳，郭成留

(河南省農(nóng)業(yè)科學(xué)院 動物免疫學(xué)重點實驗室, 河南 鄭州 450002)

調(diào)查河南省豬群偽狂犬野毒感染流行情況，為制訂合理的防控與凈化策略提供參考依據(jù)。于2014年1月—2016年5月，采集河南省不同地域780個豬場16 200份血清樣本，使用gE-ELISA鑒別診斷方法進行血清學(xué)調(diào)查，對10個陽性穩(wěn)定豬場和10個陽性發(fā)病豬場進行血清學(xué)分析，對2個后備母豬培育場(1個為陰性場，另1個為陽性場)進行生產(chǎn)成績分析，同時對豬場偽狂犬gE基因缺失疫苗使用情況進行調(diào)查，并跟蹤了40個豬場的疫苗免疫情況。結(jié)果顯示，河南省豬場偽狂犬gE抗體陽性率90.0%，血清樣本陽性率46.2%，成年種豬陽性率53.1%，后備種豬陽性率27.6%。豬群在陽性發(fā)病場的陽性率高于在陽性穩(wěn)定場的陽性率,育肥豬感染帶毒嚴(yán)重影響其生產(chǎn)成績,豬場偽狂犬疫苗免疫強度呈現(xiàn)增加趨勢。綜上可知，目前河南省豬群偽狂犬野毒感染情況比較嚴(yán)重。

豬； 偽狂犬； 野毒； gE-ELISA； 免疫

豬偽狂犬病(pseudorabies，PR)是由豬偽狂犬病毒(pseudorabies virus,PRV)引起的一種多種動物共患的傳染病。豬是該病毒唯一的自然貯存宿主，犬、貓、牛、羊等動物感染后表現(xiàn)為致死性[1-4]。不同階段和免疫背景的豬感染PRV后臨床癥狀差異較大，種豬群感染后可引起繁殖障礙(精子活力下降、流產(chǎn)、產(chǎn)死胎等)；哺乳階段和保育階段仔豬感染后可出現(xiàn)神經(jīng)癥狀、呼吸道癥狀和消化道癥狀，且感染日齡越小，死亡率越高；育肥豬和成年豬感染后，一般表現(xiàn)為一過性的發(fā)熱和呼吸道癥狀。臨床上多繼發(fā)副豬嗜血桿菌、鏈球菌、胸膜肺炎放線桿菌等細(xì)菌病?？祻?fù)豬生長速度較慢，且終生帶毒。

在美國、丹麥、荷蘭等養(yǎng)豬發(fā)達國家，依靠基因缺失苗和與之相配套的鑒別診斷方法，在家豬群中已經(jīng)完成PRV凈化，并禁止使用PRV活疫苗[5]。2005—2010年，隨著PRV基因缺失疫苗在國內(nèi)豬場的廣泛應(yīng)用，我國豬群PRV感染得到了較好地控制，豬群感染率呈下降趨勢。2010年國內(nèi)許多豬場已經(jīng)凈化了該病，達到免疫無感染狀態(tài)[6]。2011年后，PRV出現(xiàn)變異、毒力返強等新情況，許多豬場相繼出現(xiàn)PRV疫情，該病在國內(nèi)迅速大面積暴發(fā)流行。

河南省是養(yǎng)豬大省且位于國內(nèi)養(yǎng)豬的中心地帶，養(yǎng)豬業(yè)受PRV疫情影響尤其嚴(yán)重。筆者所在實驗室于2014年1月—2016年5月，采用gE-ELISA鑒別診斷方法對河南省不同地域的豬場進行野毒感染情況血清學(xué)調(diào)查，對部分陽性穩(wěn)定豬場和發(fā)病豬場進行血清學(xué)檢測對比分析，對育肥階段保持陰性和育肥階段感染轉(zhuǎn)陽的2個后備母豬培育場進行生產(chǎn)成績分析，同時對豬場使用PRVgE基因缺失疫苗情況進行了調(diào)查，并統(tǒng)計分析了40個豬場近3 a的疫苗免疫情況，以了解河南省豬群PRV感染情況，為制定合理的防控與凈化方案提供參考依據(jù)。

1 材料和方法

1.1 PRV血清樣本采集

2014年1月—2016年5月，在河南省不同地域

的780個豬場，采集16 200份血清樣品。采樣豬場均已排除使用含gE基因PRV疫苗情況。

1.2 PRV血清學(xué)檢測方法

血清學(xué)檢測在河南省農(nóng)業(yè)科學(xué)院動物免疫學(xué)實驗室進行，PRV gE抗體鑒別診斷ELISA試劑盒購自IDEXX公司。檢測程序和判斷標(biāo)準(zhǔn)嚴(yán)格按照試劑盒使用說明進行。

1.3 PRV陽性穩(wěn)定豬場和陽性發(fā)病豬場不同階段豬群gE抗體陽性率比較

從上述檢測豬場中分別選擇10個生產(chǎn)成績較好的PRV陽性穩(wěn)定豬場和10個生產(chǎn)成績較差的PRV陽性發(fā)病豬場，分別對種母豬、保育中后期(45～70日齡)、育肥前期(70～100日齡)和育肥中期(100～130日齡)血清樣本gE抗體進行統(tǒng)計分析。

1.4 PRV感染對育肥階段豬群生產(chǎn)成績影響調(diào)查

選擇河南省某種豬企業(yè)的2個后備母豬培育場進行生產(chǎn)性能測定，2個場豬的品種、飼料營養(yǎng)、硬件設(shè)施和飼養(yǎng)管理水平基本一致，分別為PRV陽性場和陰性場。對育肥階段(體質(zhì)量25～115 kg)的測定成績進行統(tǒng)計分析，比較PRV感染對育肥階段豬群生產(chǎn)成績的影響。

后備母豬培育場生產(chǎn)性能測定在企業(yè)內(nèi)部進行，種豬測定秤購自O(shè)SBORNE公司。測定程序嚴(yán)格按照農(nóng)業(yè)部種豬生產(chǎn)性能測定規(guī)程進行。

1.5 PRVgE基因缺失疫苗免疫情況調(diào)查

對采樣的780個豬場記錄并統(tǒng)計PRVgE基因缺失疫苗免疫使用情況，對其中40個豬場近3 a的免疫情況進行統(tǒng)計分析。

2 結(jié)果與分析

2.1 PRV gE抗體檢測情況

共檢測統(tǒng)計了780個豬場16 200份血清樣本，其中豬場陽性率為90.0%，血清陽性率為46.2%(表1)。可見，河南豬場普遍存在野毒感染情況，豬群感染帶毒率較高，且未見有下降趨勢。

表1 河南省豬PRV gE抗體檢測情況

2.2 種豬群gE抗體陽性率

共檢測統(tǒng)計了9 392份種豬血清樣本，成年種豬和后備種豬的感染帶毒率分別為53.1%和27.6%(表2)。種豬多為隱性長期帶毒，在應(yīng)激情況下容易激活病毒，不定期間歇性排毒，是該病在豬群中長期流行并且很難根除的重要原因[7]。一般情況下，豬場種豬群每年的更新率為35%左右，通過不斷補充陰性后備種豬，自然淘汰陽性種豬，理論上用3 a左右時間可以實現(xiàn)PRV凈化。種豬群感染帶毒率高，尤其是后備種豬也感染帶毒，增加了PRV凈化的難度。

表2 種豬群gE抗體檢測情況

2.3 PRV陽性穩(wěn)定豬場和陽性發(fā)病豬場不同階段豬群gE抗體陽性率

選擇10個生產(chǎn)成績較好的PRV陽性穩(wěn)定豬場，對檢測的486份血清進行統(tǒng)計分析(表3)。結(jié)果表明，通過采取強化免疫，不斷補充陰性后備種豬，加強飼養(yǎng)管理和生物安全等綜合防控措施，豬群整體gE抗體陽性率比較低，并且可以擴繁出大量陰性的育肥豬。

表3 PRV陽性穩(wěn)定豬場gE抗體檢測情況

選擇10個生產(chǎn)成績較差的PRV陽性發(fā)病豬場，對檢測的461份血清進行統(tǒng)計分析(表4)。結(jié)果表明，對于PRV防控不力的豬場，豬群整體gE抗體陽性率比較高，尤其是種豬群和育肥豬感染帶毒情況非常嚴(yán)重，種母豬高達88.3%，育肥中期高達91.1%。

表4 PRV陽性發(fā)病豬場gE抗體檢測情況

2.4 PRV感染對育肥階段豬群生產(chǎn)成績的影響

由表5可知，與育肥階段gE抗體轉(zhuǎn)陽場結(jié)果相比，育肥階段gE抗體陰性場豬群批次成活率提高3.9個百分點，校正100 kg日齡縮短13 d。可見，PRV感染對育肥階段豬群的生產(chǎn)指標(biāo)影響較大，在陽性豬場開展PRV凈化工作具有重要的經(jīng)濟意義。

表5 2個豬場育肥階段豬群測定成績

2.5 PRVgE基因缺失疫苗免疫情況調(diào)查

選擇40個年出欄3 000～50 000頭的規(guī)模豬場，進行PRV疫苗免疫情況跟蹤調(diào)查發(fā)現(xiàn)，種豬群每年免疫2～3次的豬場比例在逐漸減少，目前以每年免疫4次為主(表6)；在斷奶至育肥階段，只免疫1次的豬場越來越少，目前以免疫2～3次為主(表7)。

表6 種豬群PRV疫苗免疫情況 %

表7 斷奶至育肥階段豬群PRV疫苗免疫情況 %

PRV疫苗TCID50國家標(biāo)準(zhǔn)為5 000/頭份。統(tǒng)計數(shù)據(jù)表明，低效價的疫苗在豬場的使用率在減少，目前豬場使用的疫苗以每頭份大于105TCID50為主(表8)。

表8 豬場使用PRV疫苗效價(每頭份疫苗病毒含量TCID50)情況 %

調(diào)查結(jié)果表明，2014—2016年，豬群免疫強度呈逐漸增強趨勢，免疫次數(shù)增加，高效價疫苗使用增多。出現(xiàn)這種現(xiàn)象可能由于PRV出現(xiàn)變異和毒力返強[8-10]，疫苗交叉保護力下降，豬群感染壓力巨大等因素導(dǎo)致。

3 結(jié)論與討論

3.1 關(guān)于PRV抗體(gE/gB)檢測

由于PRVgE基因缺失疫苗在生產(chǎn)中廣泛使用，通過gE-ELISA抗體鑒別診斷試劑盒檢測血清中的gE抗體，可以區(qū)分疫苗毒和野毒感染，這也為PRV的凈化提供了技術(shù)保障。通過檢測gE抗體判斷野毒感染，還需要排除母源抗體和感染早期抗體尚未轉(zhuǎn)陽等影響因素，對于gE抗體檢測結(jié)果陽性樣品(仔豬)，除了機體感染外，也有可能是母源抗體(非感染)。對于gE抗體檢測結(jié)果陰性樣品，除了考慮機體未感染野毒外，還可能是野毒感染時間比較短，抗體尚未轉(zhuǎn)陽。

對于免疫抗體檢測，一般使用gB-ELISA抗體檢測試劑盒。由于gB抗體檢測不能區(qū)分疫苗毒和野毒產(chǎn)生的抗體，且gB抗體水平與免疫保護力相關(guān)性不強，目前對于大多數(shù)PRV野毒陽性豬場，檢測gB抗體意義有限。如果條件允許，檢測血清中和抗體更有意義[11-12]。同時也要重視細(xì)胞免疫在控制偽狂犬發(fā)病、減少排毒等方面發(fā)揮的重要作用[13]。3.2 PRV野毒感染和免疫情況分析本次檢測統(tǒng)計結(jié)果顯示，河南省豬場PRV陽性率高達90.0%，血清陽性率為46.2%。對比實驗室近年來檢測的歷史數(shù)據(jù)[14]和常洪濤等[15]發(fā)表的分析報告，發(fā)現(xiàn)當(dāng)前河南省豬群PR野毒感染情況仍然十分嚴(yán)重。

疫苗免疫仍是當(dāng)前防控PR疫情的主要手段。本次免疫情況調(diào)查結(jié)果表明，采取種豬群每年免疫2～3次，斷奶至育肥階段只接種1次，以及豬群使用普通效價疫苗的免疫策略，已經(jīng)不能滿足當(dāng)前豬場偽狂犬防控需要。鑒于PRV已經(jīng)出現(xiàn)變異和毒力返強情況，現(xiàn)有的疫苗對野毒的交叉保護力下降。豬群需要采取強化免疫[16]，提高中和抗體水平[17]，避免出現(xiàn)免疫空白期，從而減少感染風(fēng)險。

3.3 豬群PRV控制與凈化

當(dāng)前PR疫情已經(jīng)嚴(yán)重制約了我國養(yǎng)豬業(yè)健康發(fā)展，按照國家《動物疫病防控中長期規(guī)劃(2012—2020年)》要求，2020年我國所有種豬場必須達到PRV凈化標(biāo)準(zhǔn)。血清學(xué)調(diào)查是制訂凈化策略的基礎(chǔ)，通過本次調(diào)查發(fā)現(xiàn)，成年種豬gE抗體陽性率高達53.1%，如果采取“淘汰清群”的凈化方案，代價太大，且難以推廣落實。目前國內(nèi)的養(yǎng)殖模式，后備種豬一般都是從育肥階段選留的。在PRV野毒陽性發(fā)病的豬場，育肥豬感染帶毒率非常高，這增大了挑選出健康合格后備種豬的難度，不利于凈化工作開展。在一些陽性穩(wěn)定豬場，通過強化免疫、加強飼養(yǎng)管理和生物安全等綜合防控措施，完全可以擴繁出陰性的育肥豬。因此,對于目前大多數(shù)陽性豬場，可以通過強化免疫，先穩(wěn)定生產(chǎn)；堅持補充陰性后備種豬(自留或外購)，自然淘汰陽性種豬，逐步完成凈化。如果條件允許，可以實施“檢測—淘汰”方案，以便加快凈化進度。

本研究結(jié)果表明，目前河南省豬群偽狂犬野毒感染情況比較嚴(yán)重。通過準(zhǔn)確的血清學(xué)調(diào)查，并根據(jù)豬群感染狀況，制訂科學(xué)、合理的PRV凈化方案是凈化成功的關(guān)鍵。目前,國家生豬產(chǎn)業(yè)技術(shù)體系28個試驗站(河南省3個)及河南省生豬產(chǎn)業(yè)技術(shù)體系1個試驗站和5個示范場，已經(jīng)開展了PRV的凈化工作，并且取得了顯著的凈化效果。省內(nèi)的一些大型種豬場和商品豬場，也積極開展PRV凈化工作，取得了較好的凈化效果。通過全國一致行動，科學(xué)規(guī)劃，種豬場率先實現(xiàn)凈化，再擴大到商品豬場，最后進行區(qū)域內(nèi)聯(lián)合凈化，相信最終可以實現(xiàn)PRV凈化目標(biāo)。

[1] 陳靈芝,張國軍,楊珊珊,等.一起犬偽狂犬病例報告[J].中國動物保健,2014,16(10):92.

[2] 張建新,靳冬,仇澤凱,等.探秘豬場死狗[J].中國動物保健,2013,15(3):26-28.

[3] Kong H J,Zhang K S,Liu Y J,etal.Attenuated live vaccine (Bartha-k61) caused pseudorabies (Aujeszky’s disease) in sheep[J].Vet Res Commun,2013,37:329-332.

[4] 呂建軍,張?zhí)m清,英措.山羊感染偽狂犬病毒的診斷[J].畜牧與獸醫(yī),2014,46(8):92-94.

[5] Jeffrey J Z,Locke A K,Alejandro R,etal.豬病學(xué)[M].10版.趙德民,張仲秋,周向梅,等譯.北京:中國農(nóng)業(yè)大學(xué)出版社,2014:438-448.

[6] 李曉成.2010年豬群疫病流行動態(tài)分析報告及2011年豬群疫病流行動態(tài)預(yù)測[J].北方牧業(yè),2011(2):12.

[7] 陳溥言.獸醫(yī)傳染病學(xué)[M].5版.北京:中國農(nóng)業(yè)出版社,2006:218-220.

[8] Luo Y Z,Li N,Cong X,etal.Pathogenicity and genomic characterization of a pseudorabies virus variant isolated from Bartha-K61 vaccinated swine population in China[J].Vet Microbiol,2014,174(1/2):107-115.

[9] 童武,張青占,鄭浩,等.免疫后發(fā)病仔豬中偽狂犬病毒的分離和鑒定[J].中國動物傳染病學(xué)報,2013,21(3):1-7.

[10] An T Q,Peng J M,Tian Z J,etal.Pseudorabies virus variant in Bartha-K61-vaccinated pigs,China,2012[J].Emerging Infectious Diseases,2013,19(11):1749-1755.

[11] 楊文萍,顧真慶,孫海鳳,等.偽狂犬病毒流行毒株的抗原性和血清中和特性分析[J].畜牧與獸醫(yī),2014,46(10):11-14.

[12] 張明輝,庫旭鋼,凌云志,等.豬偽狂犬病病毒HNX株在免疫豬群中水平傳播能力研究[J].中國預(yù)防獸醫(yī)學(xué)報,2015,37(6):426-429.

[13] 何啟蓋,童光志,楊漢春,等.豬偽狂犬病流行病學(xué)特征、凈化技術(shù)及其應(yīng)用示范[J].中國畜牧雜志,2015,51(24):68-74.

[14] 解偉濤,喬松林,王寅彪,等.2013年河南省豬偽狂犬野毒感染血清學(xué)調(diào)查[J].中國動物傳染病學(xué)報,2014,10(6):66-70.

[15] 常洪濤,劉惠敏,郭占達,等.河南省及周邊省份豬群中大面積感染豬偽狂犬病毒的病因分析[J].病毒學(xué)報,2014,30(4):441-448.

[16] 楊漢春.豬偽狂犬病的防控[J].北方牧業(yè),2013(12):24.

[17] 何啟蓋.豬病流行特點與主要防控技術(shù)[J].今日養(yǎng)豬業(yè),2015(8):58-62.

Serological Survey of Porcine Pseudorabies Virus Infection and Vaccine Immunization from 2014 to 2016 in Henan Province

XIE Weitao,LIANG Yue,QIAO Songlin*,HAO Huifang,GUO Chengliu

(Key Laboratory of Animal Immunology,Henan Academy of Agricultural Sciences,Zhengzhou 450002,China)

The current infection status of pseudorabies virus in the pig population of Henan province was investigated to provide reference basis for developing effective control and purification strategies for the disease. The study was carried out from January 2014 to May 2016. A total of 16 200 serum samples were collected and analyzed from 780 pig farms in different regions of Henan province to perform a serological survey. Pseudorabies virus antibodies were detected using gE-ELISA kit. 10 stable pig farms and 10 unstable pig farms which were pseudorabies virus positive were compared by serology.The production performance in two gilts breeding pig farms which were pseudorabies virus positive and negative respectively was compared.The use ofgE-deleted vaccine for pseudorabies virus was investigated in pig farms at the same time,and 40 farms were tracked on vaccine immunization.The results showed that the positive rates of PRV infection were 90.0% for pig farms and 46.2% for serum samples in Henan province.The positive rates were 53.1% for the breeding herd and 27.6% for the exposed gilts.The positive rate in the unstable pig farms was higher than that in the positive stable pig farms.And the production performance was seriously impacted by the viral infection in the finishing pigs.The strength of vaccine immunization had increased.In summary,the current situation of pig herd infected with pseudorabies virus is more serious in Henan province.

pig; pseudorabies virus; wild virus; gE-ELISA; immunization

2016-07-20

國家生豬產(chǎn)業(yè)技術(shù)體系建設(shè)專項(CARS-36)；河南省生豬產(chǎn)業(yè)技術(shù)體系創(chuàng)新團隊項目(S2012-06)

解偉濤(1982-)，男，河南虞城人，獸醫(yī)師，碩士，主要從事豬病流行與防控研究。 E-mail：xwt513@126.com

*通訊作者：喬松林(1970-)，男，河南魯山人，研究員，博士，主要從事預(yù)防獸醫(yī)學(xué)研究。E-mail：cdj565@gmail.com

時間：2016-11-25 14∶24∶33

S855.3

A

1004-3268(2016)12-0153-05

網(wǎng)絡(luò)出版地址：http://www.cnki.net/kcms/detail/41.1092.S.20161125.1424.034.html