高許雷，鄭 輝，鄒 敏，劉 爽，劉 蕾，范根成，吳發(fā)興

（1.青島市退役軍人服務(wù)中心，青島 266000；2.青島易邦生物工程有限公司，青島 266114；3.中國(guó)動(dòng)物與衛(wèi)生流行病學(xué)中心，青島266032）

豬偽狂犬?。╬seudorabis，PR），是由偽狂犬病病毒（Pseudorabies virus，PRV）感染所引起豬的高度接觸性傳染病。PRV可導(dǎo)致母豬流產(chǎn)、死胎和木乃伊胎等繁殖性障礙，仔豬呼吸道綜合征、生長(zhǎng)發(fā)育受阻、腹瀉、抽搐、高死亡率，育肥豬食欲不振、嘔吐、發(fā)熱等癥狀[1]。PRV屬于皰疹病毒科，是一種高度潛伏感染病毒，動(dòng)物一旦感染此病毒就很難從機(jī)體內(nèi)完全清除，呈現(xiàn)一種長(zhǎng)期潛伏感染的狀態(tài)[2-4]。我國(guó)自1947年首次報(bào)道以來(lái)，已有30多個(gè)省市出現(xiàn)豬偽狂犬病的流行[5]。2005～2010年我國(guó)普遍使用偽狂犬基因工程缺失疫苗對(duì)豬群進(jìn)行免疫，使得該病得到了很好的控制，流行趨勢(shì)有所緩和[6]。但2011年后，PRV出現(xiàn)變異、毒力返強(qiáng)等新情況、許多豬場(chǎng)又出現(xiàn)PRV疫情。目前該病潛伏感染情況在全國(guó)范圍內(nèi)普遍存在，給養(yǎng)豬業(yè)造成嚴(yán)重的經(jīng)濟(jì)損失[7]。

近年來(lái)，研究人員應(yīng)用偽狂犬gE抗體檢測(cè)試劑盒進(jìn)行血清流行病學(xué)調(diào)查，結(jié)果顯示我國(guó)豬群PRV野毒感染陽(yáng)性率仍然很高[8-9]。為掌握現(xiàn)有防控體系下，我國(guó)規(guī)模豬場(chǎng)PRV野毒的感染狀況，本研究依據(jù)采樣地區(qū)生豬養(yǎng)殖分布情況，選取2012～2017年部分規(guī)?；i場(chǎng)進(jìn)行豬PRV野毒血清流行病學(xué)調(diào)查。使用偽狂犬gE抗體ELISA檢測(cè)試劑盒對(duì)采集的豬血清進(jìn)行抗體檢測(cè)，評(píng)價(jià)豬群野毒PRV感染情況。根據(jù)此前研究人員對(duì)PRV母源抗體衰減規(guī)律的研究，采集樣品為7周齡以上的豬血清[10]。

1 材料和方法

1.1 血清樣品2012年2月～2017年7月共采自我國(guó)東北、華北、華東、華中、華南及西南地區(qū)共11個(gè)省份、925個(gè)規(guī)?；i場(chǎng)的豬血清樣品44 809份，免疫背景清晰。樣品詳細(xì)情況見(jiàn)表1。

表1 2012～2017 年我國(guó)部分規(guī)模化豬場(chǎng)血清樣品采集情況Table1 The numbers of samples taken from 2012 to 2017 in the large scale pig farms of china

1.2 血清PRV抗體檢測(cè)方法血清樣品中PRV gE抗體ELISA檢測(cè)操作完全按照瑞典SVANOVIR公司生產(chǎn)的PRV gE 抗體ELISA檢測(cè)試劑盒規(guī)定的程序進(jìn)行，該方法可以區(qū)分PRV gE基因缺失疫苗免疫抗體和PRV野毒（gE基因不缺失）感染產(chǎn)生的抗體。

1.3 結(jié)果判定及數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)本研究所檢測(cè)的血清均來(lái)自gE基因缺失疫苗免疫豬場(chǎng)，所以gE抗體陽(yáng)性豬可以判斷其為PRV野毒感染所致。gE抗體檢測(cè)結(jié)果判定參照說(shuō)明書(shū)進(jìn)行，即待檢血清樣品的OD450值≤50為gE抗體陽(yáng)性；待檢血清樣品OD450值 ＞60判為gE抗體陰性；待檢血清樣品OD450值介于51～60判為可疑，需要重新檢測(cè)。在進(jìn)行檢測(cè)結(jié)果判定和統(tǒng)計(jì)時(shí)，只要豬場(chǎng)有一個(gè)樣品判定為陽(yáng)性，則該場(chǎng)判定為PRV野毒陽(yáng)性場(chǎng)。不同時(shí)間或不同分組間PRV gE抗體陽(yáng)性率的比較采用Pearson χ2檢驗(yàn)，P＜0.05表示差異顯著，P＜0.01表示差異極顯著，統(tǒng)計(jì)分析使用SPSS 10.0軟件。

2 結(jié)果與討論

2.1 不同時(shí)間PRV gE抗體檢測(cè)結(jié)果應(yīng)用阻斷ELISA方法對(duì)采集的44 809份豬血清樣品進(jìn)行檢測(cè)。結(jié)果表明2012～2017年P(guān)RV gE抗體樣品平均陽(yáng)性率分別為13.24%（910/6874）、18.65%（1478/7927）、11.42%（690/6043）、12.63%（855/6767）、29.88%（3014/10 088）和31.03%（2206/7110）。2012年豬群PRV野毒感染陽(yáng)性率為7.93%～15.21%，平均陽(yáng)性率為13.24%；2013年豬群PRV野毒感染陽(yáng)性率為11.04%～24.29%，平均陽(yáng)性率為18.65%；2014年豬群PRV野毒感染陽(yáng)性率為4.07%～47.67%，平均陽(yáng)性率為11.42%；2015年豬群PRV野毒感染陽(yáng)性率為6.10%～64.29%，平均陽(yáng)性率為12.63%；2016年豬群PRV野毒感染陽(yáng)性率為9.67%～45.71%，平均陽(yáng)性率為29.88%；2017年豬群PRV野毒感染陽(yáng)性率為12.93%～49.66%，平均陽(yáng)性率為31.03%。通過(guò)對(duì)不同年份豬群PRV野毒感染情況分析可知，隨著時(shí)間的變化，豬群PRV野毒感染情況起伏不定，2012～2013年呈上升趨勢(shì)，2013～2014年呈下降趨勢(shì)，2014～2017年又呈逐年持續(xù)上升的趨勢(shì)，但整體呈上升趨勢(shì)，雖沒(méi)有爆發(fā)流行但預(yù)示著偽狂犬病的爆發(fā)隨時(shí)可能發(fā)生，預(yù)防和凈化工作刻不容緩。

2.2 不同區(qū)域豬PRV gE抗體陽(yáng)性率結(jié)果應(yīng)用阻斷ELISA方法對(duì)采集的44 809份豬血清樣品進(jìn)行PRV野毒感染抗體檢測(cè)，東北地區(qū)2012～2017年豬群PRV野毒感染陽(yáng)性率為7.41%～17.22%，平均陽(yáng)性率為9.88%；華北地區(qū)2012～2017年豬群PRV野毒感染陽(yáng)性率為9.91%～64.29%，平均陽(yáng)性率為38.32%；華東地區(qū)2012～2017年豬群PRV野毒感染陽(yáng)性率為7.86%～39.73%，平均陽(yáng)性率為23.97%；華中地區(qū)2012～2017年豬群PRV野毒感染陽(yáng)性率為9.67%～24.29%，平均陽(yáng)性率為16.67%；華南地區(qū)2012～2017年豬群PRV野毒感染陽(yáng)性率為4.07%～29.11%，平均陽(yáng)性率為16.55%；西南地區(qū)2012～2017年豬群PRV野毒感染陽(yáng)性率為6.10%～38.75%，平均陽(yáng)性率為18.75%（圖1）。通過(guò)對(duì)不同區(qū)域豬群PRV野毒感染情況分析可知，東北、華北、華東、華中等6個(gè)地區(qū)豬群PRV野毒陽(yáng)性率參差不齊，華北地區(qū)2015年偽狂犬病野毒陽(yáng)性率高達(dá)64.29%，而華南地區(qū)2014年感染率最低，為4.07%，兩者相差60.22%。不同區(qū)域不同豬場(chǎng)的PRV野毒感染相差很大，可能與各個(gè)地區(qū)不同豬場(chǎng)生產(chǎn)水平、飼養(yǎng)管理模式和防疫措施等因素不同有關(guān)，結(jié)果提示我們防制和凈化豬偽狂犬病的形勢(shì)依然嚴(yán)峻。

圖1 2012～2017 年不同地區(qū)PRV 野毒抗體陽(yáng)性率Fig.1 The seroprevalence of PRV specific antibody in different districts of 2012-2017

2.3 不同階段豬PRV gE抗體陽(yáng)性率根據(jù)各省PRV野毒抗體檢測(cè)結(jié)果，分析不同日齡豬與PRV野毒抗體陽(yáng)性率的關(guān)系。為方便統(tǒng)計(jì)，根據(jù)豬只的生長(zhǎng)狀況，將豬群劃分為三個(gè)階段，保育仔豬、育肥豬、種豬（包括種公豬和生產(chǎn)母豬）。結(jié)果顯示，2012～2017年間，種豬的PRV野毒抗體陽(yáng)性率分別為14.73%、19.36%、16.53%、19.10%、33.81%、35.63%；保育仔豬的PRV野毒抗體陽(yáng)性率分別為11.56%、21.28%、10.17%、12.73%、33.27%、34.11%；育肥豬的PRV野毒抗體陽(yáng)性率分別為10.90%、17.81%、11.31%、9.81%、26.25%、27.22%（圖2）。通過(guò)對(duì)不同階段豬PRV野毒感染情況分析可知，種豬的PRV野毒抗體陽(yáng)性率最高，為23.19%；其次是保育仔豬，陽(yáng)性率分別是20.52%，育肥豬的PRV野毒抗體陽(yáng)性率最低，為17.22%。種豬野毒感染率高可能與種豬潛伏感染、長(zhǎng)期帶毒有關(guān)，有的豬場(chǎng)為了降低成本，母豬每年僅免疫偽狂犬疫苗一次，不能產(chǎn)生持久有效的抗體，導(dǎo)致仔豬得不到足夠的母源抗體，免疫水平低下。因此，做好疫苗免疫，降低種豬的潛伏感染，應(yīng)引起各豬場(chǎng)重視。

面對(duì)豬偽狂犬病的現(xiàn)狀，規(guī)模化豬場(chǎng)應(yīng)在加強(qiáng)豬場(chǎng)生物安全管理的同時(shí)，選擇優(yōu)質(zhì)的偽狂犬活疫苗，免疫后及時(shí)檢測(cè)PRV抗體，制定合理的免疫程序：后備豬在配種前至少接種2次偽狂犬活疫苗，引進(jìn)種豬時(shí)應(yīng)進(jìn)行偽狂犬gE抗體檢測(cè)，確保偽狂犬病毒呈陰性，陽(yáng)性公豬必須淘汰；對(duì)檢測(cè)陽(yáng)性的豬場(chǎng)，應(yīng)隔離淘汰陽(yáng)性豬只，加強(qiáng)消毒減少豬偽狂犬病的擴(kuò)散和蔓延[11]；定期對(duì)豬群進(jìn)行PRV野毒抗體檢測(cè)，果斷淘汰檢測(cè)陽(yáng)性的老齡母豬和公豬；加強(qiáng)仔豬免疫工作，從而使豬群偽狂犬病得到徹底凈化。

圖2 2012～2017 年不同階段PRV 野毒抗體陽(yáng)性率Fig.2 The seroprevalence of PRV specific antibody in different growth phases of 2012-2017