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        1株馬源致病性蠟樣芽孢桿菌的分離與鑒定

        2016-02-03 16:34:35王玉田王承民劉艷華何宏軒金銀姬李志衍鄭瑞峰
        中國獸醫(yī)雜志 2016年11期
        關鍵詞:蠟樣朝陽瓊脂

        王玉田 , 王承民 , 劉艷華 , 何宏軒 , 金銀姬 , 劉 鑫 , 白 煦 , 李志衍 ,鄭瑞峰

        (1.北京市畜牧總站 , 北京朝陽100107 ; 2中國科學院動物研究所 , 北京朝陽100101 ;3.北京農道眾聯(lián)農業(yè)科技有限公司 , 北京海淀100086 ; 4.中國馬業(yè)協(xié)會 , 北京朝陽100125)

        1株馬源致病性蠟樣芽孢桿菌的分離與鑒定

        王玉田1, 王承民2, 劉艷華3, 何宏軒2, 金銀姬1, 劉 鑫1, 白 煦4, 李志衍1,鄭瑞峰1

        (1.北京市畜牧總站 , 北京朝陽100107 ; 2中國科學院動物研究所 , 北京朝陽100101 ;3.北京農道眾聯(lián)農業(yè)科技有限公司 , 北京海淀100086 ; 4.中國馬業(yè)協(xié)會 , 北京朝陽100125)

        蠟樣芽孢桿菌(bacilluscereus)是革蘭陽性需氧產芽孢桿菌,一種廣泛分布于土壤、水、空氣、飼料、食品和環(huán)境中產芽孢桿菌。該菌為條件致病菌,容易污染食物和飼料,也可引起牛乳房炎、子宮內膜炎,但還未見馬感染該菌的報道。

        2015年5月,北京市某馬術俱樂部賽馬皮膚下有直徑2~3 cm大小的膿腫結節(jié)。結節(jié)逐漸增大,突起于皮膚表面,變成膿腫,然后破潰流出黃白色或淡紅色膿液,逐漸形成潰瘍。潰瘍高于皮膚表面如蘑菇狀或周圍突起中間凹陷,易于出血,不易愈合。潰瘍不斷地分泌出膿性分泌物,使病灶附近的毛粘結成痂皮,檢測內容和結果報告如下。

        1 材料與方法

        1.1 病料來源 (1)膿汁:對沒有破潰膿包皮膚用碘酊和75%醫(yī)用消毒酒精消毒,用無菌注射器吸取或用消毒棉簽蘸取膿汁,放入營養(yǎng)肉湯培養(yǎng)基中;(2)血液:前腔靜脈無菌采集靜脈血5mL,注入血液增菌培養(yǎng)基中。

        1.2 細菌分離培養(yǎng)、生化鑒定 營養(yǎng)肉湯和血液培養(yǎng)基37℃厭氧和需氧培養(yǎng)48h增菌;將膿汁樣本涂抹于新鮮血液和巧克力瓊脂培養(yǎng)基培養(yǎng);用革蘭染色鏡檢,觀察細菌形態(tài),多次分離純化,得到純化細菌[1]。接種各種糖發(fā)酵培養(yǎng)基進行糖發(fā)酵試驗,吲哚試驗、甲基紅試驗、V-P 試驗、觸酶試驗、硫化氫試驗,淀粉水解試驗、D-阿拉伯糖試驗、青霉素抑制試驗、觀察生化反應特性[2]。

        1.3 細菌16S rDNA 的檢測 取分離到細菌的DNA作為模板,用細菌菌種鑒定通用引物(7F:5’-CAGAGTTTGATCCTGGCT-3’, 1540R:5’-AGGAGGTGATCCAGCCGCA-3’;27F:5’-AGTTTGATCMTGGCTCAG-3’,1492R:5’-GGTTA-CCTTGTTACGACTT-3’)進行PCR 擴增。擴增產物送上海生工生物工程技術服務有限公司進行測序。測序結果提交GenBank,并與其他芽孢桿菌進行比對,確定16S 基因型。

        2 結果與分析

        2.1 細菌培養(yǎng)特征 經(jīng)鮮血瓊脂培養(yǎng)基和巧克力瓊脂培養(yǎng)基生長良好。菌落淺灰色,毛玻璃狀,伴有草綠色溶血和透明溶血環(huán)。在鮮血瓊脂培養(yǎng)基上呈明顯β型溶血(見中插彩版圖1A)。菌體兩端鈍圓,單個或長鏈狀排列,無莢膜,有鞭毛,能運動。芽孢呈橢圓形,位于中央或近端。革蘭染色呈陽性,可形成芽孢(見中插彩版圖1B)。

        2.2 細菌16S rDNA 分析 芽孢桿菌群成員有13 個基因型,根據(jù)16 S rDNA 序列差異性分析,確定該菌株16 S rDNA 序列(GenBank 登錄號為JX294967)為蠟樣芽孢桿菌群(見圖2)。

        2.3 生化特性、藥敏試驗 該菌株能發(fā)酵葡萄糖、蔗糖和麥芽糖,不發(fā)酵乳糖、木糖、甘露醇和果膠糖。過氧化氫酶試驗、甲基紅試驗(M.R.)和乙酰甲基甲醇試驗(V-P)為陽性,吲哚試驗和硫化氫試驗為陰性。青霉素抑菌試驗陰性,在高濃度處生長,排除炭疽桿菌[3]。對青霉素、氨芐西林、頭孢菌素耐藥;對克林霉素、紅霉素、磺胺類藥物敏感。分離菌生化特性符合蠟樣芽孢桿菌

        3 討論

        3.1 通過病原檢測,可以判定為蠟樣芽孢桿菌感染,引起皮膚產生膿皰,破潰導致出現(xiàn)的淋巴脈管炎。病馬由皮膚傷口感染,經(jīng)淋巴及血液循環(huán)引起全身菌血癥。通過文獻檢索,該菌是人醫(yī)骨科創(chuàng)傷感染的常見菌,導致創(chuàng)面均有紅腫、滲出和膿性分泌物。與本病例癥狀相符,但是在國內在馬上沒有報道,需引起臨床獸醫(yī)注意。

        3.2 馬傳染性脈管炎是由偽皮疽組織胞漿菌引發(fā)的疾病,是真菌感染性疾病。通過涂片鏡檢及培養(yǎng)結果為陰性。應用大劑量抗生素克林霉素治療,傷口處涂抹磺胺粉,經(jīng)15 d治療后治愈。

        [1] GB4789.14—2014, 食品微生物學檢驗 蠟樣芽胞桿菌檢驗[S].

        [2] 尚紅,王毓三,申子瑜.全國臨床檢驗操作規(guī)程[M].北京:人民衛(wèi)生出版社,2015:667-668.

        [3] NY/T 561—2015,動物炭疽診斷技術[S].

        2016-08-04

        王玉田(1971-),男,高級獸醫(yī)師,本科,從事動物疫病診治工作,E-mail:646795388@qq.com

        鄭瑞峰,E-mail:1138028814@qq.com

        S852.6

        B 文章標號:0529-6005(2016)11-0052-02

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