王金海（中國人民解放軍第四六三醫(yī)院口腔科，遼寧 沈陽 110000）

牙周炎常見菌對抗菌藥物的篩選及活性測定探討

王金海
（中國人民解放軍第四六三醫(yī)院口腔科，遼寧 沈陽 110000）

目的 通過對牙周炎常見菌對抗藥物的篩選及活性測定，分析探討治療不同類型牙周炎的最佳藥物。方法 采用NCCLS推薦的液體稀釋法對牙周炎常見菌進(jìn)行藥物測定，測出最低抑菌濃度（MIC）。結(jié)果 克林霉素、二甲胺四環(huán)素、環(huán)丙沙星這三種抗生素對牙周炎常見菌抑菌效果最好，其中尤以二甲胺四環(huán)素的效果最為突出。結(jié)論 臨床上治療牙周炎時(shí)可將二甲胺四環(huán)素作為最佳藥物。

牙周炎常見菌；對抗菌藥物；篩選；活性測定

局部因素所引起的牙周支持組織產(chǎn)生的慢性炎癥即為牙周炎。該病多分布在35歲以后的年齡階段，如患者不及時(shí)治療，炎癥就會(huì)逐漸向深層擴(kuò)散到牙周膜、牙槽骨、牙骨質(zhì)，從而發(fā)展成牙周炎［1］。本次研究對牙周炎常見菌進(jìn)行了抗菌藥物的篩選與活性測定，具體報(bào)道如下。

1　資料與方法

1.1一般資料

1.1.1牙周炎常見菌。牙周炎常見致病菌株：①國際標(biāo)準(zhǔn)菌株：卟啉單胞菌（牙齦卟啉單胞菌、不解糖卟啉單胞菌、牙髓卟啉單胞菌）、普氏菌（中間普氏菌、盧氏普氏菌、軀體普氏菌）、放線菌（伴放線桿菌、黏性放線菌、內(nèi)氏放線菌）、嗜二氧化碳菌（牙齦嗜二氧化碳菌、黃褐色嗜二氧化碳菌）、血鏈球菌、嗜沫嗜血桿菌、巨核梭形桿菌、韋榮氏球菌；②藥敏指示菌：多形類桿菌、脆弱類桿菌；③分離菌株，主要為從臨床上牙周炎患者牙周袋內(nèi)鑒定、分離的菌株，包括18株類桿菌、56株放線菌、82株產(chǎn)黑色素菌群、57株梭形桿菌、13株伴放線桿菌、12株嗜沫嗜血桿菌、10株韋榮氏球菌、15株其他厭氧菌。

1.1.2牙周炎抗菌藥物。本次研究共選用18種牙周炎抗菌藥物：四環(huán)素類（強(qiáng)力霉素、二甲胺四環(huán)素）、大環(huán)內(nèi)酯類（克拉霉素、羅紅霉素、紅霉素、麥白霉素、阿奇霉素、交沙霉素、乙酰螺旋霉素）、硝咪唑類（替硝唑、甲硝唑）、喹諾酮類（曲氟沙星、環(huán)丙沙星、氧氟沙星、左旋氧氟沙星、諾氟沙星、洛美沙星）、克林霉素。

1.1.3培養(yǎng)基：選擇放線菌、伴放線放線桿菌、梭形桿菌、產(chǎn)黑色素菌群作為培養(yǎng)基。

1.2方法

1.2.1對抗菌藥物的篩選。①配置細(xì)菌懸液：在固體CDC培養(yǎng)基上接種上述國際標(biāo)準(zhǔn)菌株，采取厭氧培養(yǎng)，并保持溫度在37 ℃，5 d后即在液體培養(yǎng)基中置于新鮮細(xì)菌菌落，繼續(xù)進(jìn)行厭氧培養(yǎng)，2 d后再把液體CDC培養(yǎng)基稀釋到一定濃度留置待用。②配置藥敏培養(yǎng)基：對18種牙周炎抗菌藥物進(jìn)行稀釋，由濃到稀分為13個(gè)濃度，把55 ℃混有5%羊血的CDC培養(yǎng)基與1 mL藥液加14 mL的培養(yǎng)基進(jìn)行混合，分置到13個(gè)實(shí)驗(yàn)器皿中，并設(shè)兩個(gè)無藥培養(yǎng)基以進(jìn)行對照。③細(xì)菌點(diǎn)種：把稀釋好的菌液用點(diǎn)種儀分先后點(diǎn)種到其中一個(gè)空白培養(yǎng)基和藥敏培養(yǎng)基上，進(jìn)行先前對照觀察；13個(gè)濃度的藥敏培養(yǎng)基點(diǎn)種完后，再把菌液點(diǎn)種到另一個(gè)空白培養(yǎng)基上，進(jìn)行后對照。將器皿放置到35 ℃的厭氧環(huán)境中進(jìn)行培養(yǎng)，5 d后觀察最低抑菌濃度（MIC）。

1.2.2對抗菌藥物的活性測定：①用選擇培養(yǎng)基對牙周炎患者牙周袋內(nèi)取下的齦下菌斑進(jìn)行致病菌株的培養(yǎng)；②用分離的263株致病菌進(jìn)行細(xì)菌懸液的配置；③選用經(jīng)對抗菌藥物篩選試驗(yàn)后的三種效果最好的抗生素進(jìn)行藥敏培養(yǎng)基的配置；④進(jìn)行細(xì)菌點(diǎn)種；⑤分析觀察263株臨床分離的菌株對三種抗生素的藥物活性。

1.3結(jié)果判斷：針對對抗菌藥物的篩選，平均血藥濃度＜MIC即為耐藥，MIC≤平均血藥濃度＜MIC的5倍即為中度敏感，平均血藥濃度≥MIC的5倍即為高度敏感；針對對抗菌藥物的活性測定，用平均血藥濃度分別與90%抑菌范圍、50%抑菌范圍、有效抑菌范圍（MIC）進(jìn)行比較。

2　結(jié) 果

通過對牙周炎常見致病菌進(jìn)行藥物的篩選試驗(yàn)后取得了克林霉素、二甲胺四環(huán)素、環(huán)丙沙星這三種抑菌效果最好的抗生素，并用臨床分離的263株菌株進(jìn)行了藥物活性的測定，得出了90%抑菌范圍、50%抑菌范圍、有效抑菌范圍（MIC）。

其中二甲胺四環(huán)素的抑菌效果最好，除了對產(chǎn)黑色素菌群的有效抑菌范圍在0.06～64 mg/L，對其他菌株的抑菌活性范圍（MIC）均＜0.06～64 mg/L；克林霉素對類桿菌、放線菌、產(chǎn)黑色素菌群、梭形桿菌的有效抑菌范圍相同（＜0.06或＞256 mg/L），對其他菌株的有效抑菌范圍則不同；環(huán)丙沙星則對類桿菌、韋榮氏球菌的有效抑菌范圍相同（＜0.06～16 mg/L），對其他菌株的有效抑菌范圍都不同。

3　討 論

牙周炎是由特定的可疑致病菌所引起的慢性感染性疾病，牙齦卟啉單胞菌、伴放線桿菌、福賽類桿菌這三類均屬于革蘭陰性桿菌、具有多種毒力因子的牙周致病菌已被世界牙周病研討會(huì)所公認(rèn)［2］。在大部分研究中，黃褐色嗜二氧化碳菌、伴放線桿菌是導(dǎo)致青少年患上牙周炎的主要致病菌，其中克林霉素、二甲胺四環(huán)素、強(qiáng)力霉素、環(huán)丙沙星對它們有較高的敏感性。而中間普氏菌、牙齦卟啉單胞菌、巨核梭形桿菌、黏性放線菌則是導(dǎo)致成年人出現(xiàn)牙周病的主要原因，克林霉素、二甲胺四環(huán)素、環(huán)丙沙星這三種抗生素對他們的敏感性最高［3］。

本次試驗(yàn)中得出的抑菌效果最好的三種抗生素中尤以二甲胺四環(huán)素的抗菌效果最好，它是一種半合成的四環(huán)素類抗生素，與同類其他藥物相比，具有更廣的抗菌譜，抑菌作用更強(qiáng)，因此可作為臨床上治療牙周炎的首選藥物。

［1］ 楊暤.茶多酚聯(lián)用奧硝唑?qū)ρ乐芸梢芍虏【捏w外抑菌活性研究［D］.重慶：重慶醫(yī)科大學(xué)，2012.

［2］ 張研.克拉霉素治療重度慢性牙周炎的基礎(chǔ)與臨床研究［D］.天津：天津醫(yī)科大學(xué)，2012.

［3］ 劉曉花.派麗奧聯(lián)合布洛芬治療慢性牙周炎的臨床應(yīng)用研究［D］.濟(jì)南：山東大學(xué)，2010.

R781.4+2

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1671-8194（2016）23-0051-01