王彩霞

(寧夏醫(yī)科大學，寧夏　銀川　750004)

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枸杞多糖對D-半乳糖誘導衰老小鼠皮膚的影響

王彩霞

(寧夏醫(yī)科大學，寧夏銀川750004)

〔摘要〕目的探討枸杞多糖的抗皮膚衰老作用。方法健康昆明種雌性小鼠50只，隨機分為正常對照組、衰老模型組、枸杞多糖低、中、高劑量組，每組10只。除正常對照組外，其余各組均每日頸背部皮下注射D-半乳糖連續(xù)42 d，建立衰老模型。給藥組同時給予不同劑量的枸杞多糖。42 d后測定小鼠皮膚組織超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽過氧化物酶(GSH-Px)活性，脂質過氧化產(chǎn)物丙二醛(MDA)含量，以及皮膚羥脯氨酸(HYP)含量。結果枸杞多糖可增強衰老模型小鼠皮膚組織SOD、GSH-Px活力，降低MDA含量，提高HYP含量。結論枸杞多糖具有延緩D-半乳糖致小鼠皮膚衰老的作用。

〔關鍵詞〕枸杞多糖；D-半乳糖；皮膚衰老

第一作者：王彩霞(1978-)，女，副教授，碩士，主要從事中醫(yī)藥抗衰老研究。

皮膚衰老是機體衰老的一個重要組成部分，不僅有損于美容，且與許多皮膚病如脂溢性角化病、鱗狀細胞癌、基底細胞癌的發(fā)生也有著病因學的關系。因此，預防和延緩皮膚衰老已成為科學研究的熱點之一〔1〕。寧夏枸杞(L)是我國傳統(tǒng)“藥食同源”的道地藥材，也是回族醫(yī)藥的代表藥物，其有效成分枸杞多糖(LBP)因具有多種生理活性越來越受到人們的關注。現(xiàn)代藥理研究證實，LBP既又具有豐富的生物學活性，又無毒副作用，具有調節(jié)免疫、降血脂、降血壓、保肝、防輻射、抗腫瘤、抗疲勞、延緩衰老等廣泛的藥理學作用〔2〕。無論在保健類食品開發(fā)還是臨床應用方面都有著廣闊的前景〔3〕。本研究擬采用D-半乳糖頸背部注射小鼠建立亞急性衰老模型，探討衰老模型小鼠皮膚組織中超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽過氧化物酶(GSH-Px)活性和羥脯氨酸(HYP)、丙二醛(MDA)含量變化，從而探究LBP對D-半乳糖致衰老模型小鼠皮膚的抗衰老作用及機制。

1材料與方法

1.1實驗動物及分組健康清潔級昆明種小鼠50只，1月齡，雌性，體重(20±2)g，隨機分為5組：正常對照組、衰老模型組、LBP低、中、高劑量組，每組10只。均購自寧夏醫(yī)科大學實驗動物中心。

1.2藥品、試劑與儀器枸杞多糖由銀川市農科院提供，批號20111009；D-半乳糖為上海試劑二廠產(chǎn)品，批號20110916。SOD試劑盒批號20110803，GSH-Px試劑盒批號20110810，MDA試劑盒批號20110920，HYP試劑盒、批號20110825，均購于南京建成生物工程研究所。測定儀器為722分光光度計，上海第三分析儀器廠；DY89-Ⅱ電動玻璃勻漿機，上海將來實驗設備有限公司；TDL-5-A型離心機，上海安亭科學儀器廠；DK-420S型三用恒溫水箱，上海精宏實驗設備有限公司；BLG10電子秤，上海精科天美科學儀器有限公司。ELx808全自動酶標儀，美國佰騰。

1.3實驗方法

1.3.1動物模型的制備及取材衰老模型組和LBP低、中、高劑量組每日頸背部皮下注射D-半乳糖1 000 mg/kg，建立小鼠亞急性衰老模型。造模的同時給藥：①正常對照組：頸背部皮下注射生理鹽水0.2 ml，同時灌服生理鹽水0.1 ml/10 g。②衰老模型組：每日頸背部皮下注射D-半乳糖1 000 mg/kg，同時灌服生理鹽水0.1ml/10g。③LBP低、中、高劑量組：每組每日頸背部皮下注射D-半乳糖1 000 mg/kg，同時灌服LBP 5、10、20 mg·kg-1·d-1。給藥容積20 ml/kg。以上操作每日1次，無菌環(huán)境下進行，各組均連續(xù)給藥42 d。42 d后，小鼠斷頸處死，取背部兩肩胛部之間皮膚(去毛)，面積為3 cm×3 cm，并迅速將取下的皮膚冰凍保存，擬作皮膚組織勻漿。

1.3.210%皮膚勻漿的制備及指標測定取脫毛后背部皮膚組織約0.5 g，在預冷生理鹽水中漂洗，除去血液、皮下脂肪及其他結締組織，用濾紙拭干，稱重，量筒量取該組織塊9倍重量的預冷生理鹽水，先取2/3量倒入裝有組織塊的燒杯中，用眼科小剪剪碎組織塊，將剪碎的組織倒入勻漿管中，將剩余1/3生理鹽水沖洗燒杯壁，用組織勻漿機制成10%組織勻漿。漿液以3 500 r/min的速度離心20 min，取上清液按試劑盒說明測定并計算SOD、GSH-Px活性，MDA及HYP含量。

1.4統(tǒng)計學方法采用SPSS13.0軟件行方差分析。

2結果

2.1對自然衰老小鼠皮膚組織SOD活性、MDA含量的影響與正常對照組比較，衰老模型組小鼠皮膚組織SOD活性降低(P<0.01)，MDA含量升高(P<0.01)。與衰老模型組比較，LBP低、中、高劑量組小鼠皮膚SOD活性明顯升高(P<0.01)，MDA含量降低(P<0.01)。見表1。

表1　LBP對小鼠皮膚組織SOD活性、MDA

與正常對照組比較：1)P<0.01；與衰老模型組比較：2)P<0.05，3)P<0.01，下表同

2.2對皮膚組織GSH-Px活性與HYP含量的影響與正常對照組比較，衰老模型組小鼠皮膚組織GSH-Px活性降低(P<0.01)，HYP含量降低(P<0.01)。與衰老模型組比較，LBP低、中、高劑量組小鼠皮膚GSH-Px活性明顯升高(P<0.05，P<0.01)，HYP含量明顯升高(P<0.05，P<0.01)。見表2。

表2　LBP對小鼠皮膚組織GSH-Px活性與HYP

3討論

衰老自由基學說認為，機體的自由基主要通過內源和外源兩個途徑產(chǎn)生，同時又具備有效的自由基清除系統(tǒng)，以維持體內自由基的正常水平〔4〕。但隨著年齡的增長，自由基代謝平衡失調，機體對自由基的防御能力下降，導致自由基產(chǎn)生蓄積。過量的自由基可攻擊細胞膜、核酸、蛋白質和酶類等生物大分子，引起細胞膜脂質雙層中的不飽和脂肪酸產(chǎn)生過氧化反應〔5，6〕，形成多種脂質過氧化物及其代謝產(chǎn)物MDA。MDA是極活潑的交聯(lián)劑，它能與蛋白質、核算等交聯(lián)聚合，生成無活性的脂褐質(LF)，沉積在皮膚結締組織中形成老年斑〔7〕。因此，MDA可反映機體內脂質過氧化的程度，間接地反映出細胞的受損程度〔8〕。而SOD是最有效的抗氧化劑和自由基清除劑，是人體不可缺少、也是目前為止發(fā)現(xiàn)的唯一以自由基為底物的酶，在維持生物機體內自由基產(chǎn)生與清除的動態(tài)平衡中起著極其重要的作用，是機體內對抗自由基的第一道防線〔4〕。因此其活力的高低間接反映機體清除氧自由基的能力。GSH-Px 是一種含硒的水溶性四聚體蛋白酶，存在于細胞線粒體、胞質內以及生物膜上〔9，10〕，能將H2O2分解成H2O和O2，減輕或阻斷脂質過氧化反應的一級引發(fā)作用，從而保護細胞免受自由基損傷〔5〕，起到延緩機體衰老的作用。測定GSH-Px的活力可以間接反映細胞的完整程度。皮膚中富含膠原蛋白，而HYP是構成膠原蛋白分子的主要成分，約占膠原蛋白全部氨基酸殘基的13.4%〔11〕。HYP可穩(wěn)定膠原蛋白的結構，從而增加皮膚中膠原纖維的韌性，修復受損皮膚組織，增強皮膚彈性，使皮膚光滑、舒展，健康靚麗〔12〕。但隨著年齡的增長，蛋白合成逐漸減少，又由于蛋白交聯(lián)、降解，使總膠原含量減少，從而使皮膚出現(xiàn)松弛，彈性降低等。因此，HYP的含量能夠間接地反映皮膚老化的程度。測定皮膚中HYP含量的變化可作為判定受試動物皮膚衰老程度一個敏感而特殊的指標〔13〕。

本實驗結果提示膠原蛋白量減少，致皮膚真皮層明顯變薄，纖維成分減少且排列疏松，皮膚處于衰老狀態(tài)。LBP低、中、高劑量均可明顯提高D-半乳糖衰老模型小鼠皮膚組織SOD、GSH-Px活性和HYP含量，顯著降低皮膚組織MDA含量，LBP能從一定程度上加速清除衰老模型小鼠體內氧自由基及其代謝產(chǎn)物，增強抗氧化酶活性，提高抗氧化能力，維持體內自由基和抗氧化酶之間的動態(tài)平衡，減輕或抑制脂質過氧化損傷,從而達到延緩衰老的目的。

4參考文獻

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〔2014-02-19修回〕

(編輯趙慧玲/曹夢園)

〔中圖分類號〕R229

〔文獻標識碼〕A

〔文章編號〕1005-9202(2015)22-6360-03；

doi：10.3969/j.issn.1005-9202.2015.22.019