巴曉紅　唐　欣

(遼寧醫(yī)學(xué)院附屬第一醫(yī)院神經(jīng)內(nèi)科，遼寧　錦州　121001)

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尼可地爾與前列地爾預(yù)處理對(duì)大鼠心肌缺血再灌注脂質(zhì)過氧化反應(yīng)的影響

巴曉紅唐欣1

(遼寧醫(yī)學(xué)院附屬第一醫(yī)院神經(jīng)內(nèi)科，遼寧錦州121001)

〔摘要〕目的探討尼可地爾與前列地爾聯(lián)合應(yīng)用預(yù)處理對(duì)大鼠心肌缺血再灌注脂質(zhì)過氧化反應(yīng)的影響。方法將48只大鼠隨機(jī)分為正常對(duì)照組，模型對(duì)照組，尼可地爾組，前列地爾組，尼可地爾加前列地爾全劑量給藥(聯(lián)合全劑量)組和尼可地爾半量加前列地爾半量給藥(聯(lián)合半劑量)組。在模型制備之前前列地爾經(jīng)腹腔給藥3 d，藥量0.036 ml/200 g，半劑量組給藥0.018 ml/200 g。尼克地爾經(jīng)口服給藥3 d，藥量0.09 mg/200 g，半劑量組給藥0.045 mg/200 g；正常對(duì)照組及模型對(duì)照組實(shí)驗(yàn)動(dòng)物給予等體積的安慰劑(生理鹽水)；連續(xù)3 d，模型制備前0.5 h各組分別追加1 d劑量的藥物或安慰劑。除正常對(duì)照組外其余各組制備心肌缺血再灌注模型。測定血清中一氧化氮(NO)含量、肌酸激酶(CK)活性、超氧化物歧化酶(SOD)活性及丙二醛(MDA)含量；同時(shí)TTC染色檢測心肌梗死面積。結(jié)果與正常對(duì)照組相比，模型對(duì)照組CK和MDA含量減少，SOD和NO含量增加，與模型對(duì)照組及其他給藥組相比，聯(lián)合半劑量組CK和MDA含量明顯減少，SOD和NO含量明顯增加，心肌梗死面積均明顯降低(均P<0.05)。結(jié)論尼可地爾和前列地爾的聯(lián)合用藥半劑量組能夠減少心肌組織氧自由基含量，減輕大鼠心肌缺血再灌注損傷 。

〔關(guān)鍵詞〕尼可地爾；前列地爾；心肌缺血再灌注損傷；脂質(zhì)過氧化反應(yīng)

1遼河油田總醫(yī)院

第一作者：巴曉紅(1968-)，女，碩士，教授，主任醫(yī)師，碩士生導(dǎo)師，主要從事腦血管病研究。

心肌缺血再灌注損傷(IRI)越來越受到關(guān)注。前列地爾是一種具有廣泛生物活性的內(nèi)源性物質(zhì)，可通過提高細(xì)胞內(nèi)環(huán)磷腺苷(cAMP)水平來抑制炎癥介質(zhì)的釋放，減少氧自由基的產(chǎn)生，抑制白細(xì)胞對(duì)內(nèi)皮細(xì)胞的黏附，擴(kuò)張血管，抑制血小板聚集，穩(wěn)定生物膜和細(xì)胞保護(hù)作用。尼可地爾具有雙重作用機(jī)制，一是抗心絞痛作用，二是心肌保護(hù)作用，通過開放線粒體的KATP通道導(dǎo)致心肌的預(yù)適應(yīng)〔1，2〕。目前已有動(dòng)物實(shí)驗(yàn)證實(shí)尼可地爾預(yù)處理對(duì)心肌IRI具有保護(hù)作用。關(guān)于尼可地爾和前列地爾聯(lián)合應(yīng)用，對(duì)心肌IRI的保護(hù)作用鮮有報(bào)道。本實(shí)驗(yàn)探討尼可地爾和前列地爾聯(lián)合應(yīng)用對(duì)心肌IRI的保護(hù)作用。

1材料和方法

1.1實(shí)驗(yàn)動(dòng)物、試劑、儀器雄性SD大鼠48只，6周齡，體重220～250 g，清潔級(jí)，由大連醫(yī)科大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供〔許可證號(hào)SCXK(遼)2008-0002〕。對(duì)動(dòng)物處置方法符合科學(xué)技術(shù)部發(fā)布的《關(guān)于善待實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的指導(dǎo)性意見》。尼可地爾(默克雪蘭諾)；前列地爾(北京泰德制藥股份有限公司)；NO檢測試劑和盒(化學(xué)法)；微量MDA檢測試劑盒；SOD檢測試劑盒；CK檢測試劑盒(南京建成生物工程研究所)。

1.2方法

1.2.1實(shí)驗(yàn)動(dòng)物分組及動(dòng)物模型制備48只大鼠，隨機(jī)分6組，每組8只，分別為正常對(duì)照組，模型對(duì)照組，尼可地爾給藥組，前列地爾給藥組，尼可地爾加前列地爾全劑量給藥(聯(lián)合全劑量)組和尼可地爾半量加前列地爾半量給藥(聯(lián)合半劑量)組。根據(jù)比較醫(yī)學(xué)原則計(jì)算出大鼠用藥量。在模型制備之前前列地爾經(jīng)腹腔給藥3 d，藥量0.036 ml/200 g，半劑量組給藥0.018 ml/200 g。尼克地爾經(jīng)口服給藥3 d，藥量0.09 mg/200 g，半劑量組給藥0.045 mg/200 g；正常對(duì)照組及模型對(duì)照組實(shí)驗(yàn)動(dòng)物給予等體積的安慰劑(生理鹽水)；連續(xù)3 d，模型制備前半小時(shí)各組分別追加1 d劑量的藥物或安慰劑。參考文獻(xiàn)〔3〕除正常對(duì)照組外其余各組制備心肌IRI模型。大鼠術(shù)前12 h禁食，不禁水。以烏拉坦(1 g/kg)腹腔注射麻醉，行氣管插管術(shù)，上微型呼吸機(jī)，描記肢體Ⅱ?qū)?lián)心電圖。自左側(cè)3～4肋間剪開皮膚，鈍性分離肌肉組織，打開胸腔，剪開心包膜，充分暴露心臟及其表面的血管，結(jié)扎冠狀動(dòng)脈前降支，結(jié)扎之前在預(yù)結(jié)扎的冠狀動(dòng)脈前降支處放置一根長約0.5 cm，直徑1.5 mm的乳膠管，造成缺血。缺血30 min后松解結(jié)扎線，再灌注60 min。冠脈斷流及再通成功與否依心電圖肢體導(dǎo)聯(lián)的ST段抬高及恢復(fù)為標(biāo)準(zhǔn)。

1.2.2檢測大鼠血清一氧化氮(NO)、肌酸激酶(CK)、丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)含量血清標(biāo)本的收集：實(shí)驗(yàn)動(dòng)物除正常組直接采血外，其他各組在再灌注60 min后通過心臟采血，抽取5 ml血加入已預(yù)先冷凍的抗凝試管中(內(nèi)含7.5 mg EDTA和2 500 U抑肽酶)，3 000～4 000 r/min，離心10 min，取血清置于-80℃低溫冰箱保存，供檢測用。

1.2.3檢測并計(jì)算大鼠心肌梗死面積腹主動(dòng)脈采血后，迅速剪下心臟，橫向?qū)⑿呐K切5～6片，每片厚約1.5～2 mm，放人1%氯化三苯基四氮(TTC)磷酸緩沖液(pH7.4)，37℃水浴10 min，損傷的心肌細(xì)胞因細(xì)胞膜損傷脫氫酶釋放丟失，因而不被染色;正常心肌含有脫氫酶可被染為紅色。應(yīng)用B12000軟件處理系統(tǒng)計(jì)算各部分面積，以各片非染色區(qū)面積之和與各片室壁面積之和的百分比反映心肌梗死范圍。

1.3統(tǒng)計(jì)學(xué)方法采用SPSS17.0軟件行單因素方差分析。

2結(jié)果

2.1大鼠心肌IRI模型的心電圖表現(xiàn)觀察大鼠的心電圖，如果發(fā)現(xiàn)肢體Ⅱ?qū)?lián)R波下降及ST段改變(抬高或壓低)T波改變(高聳或倒置)，證明模型制備成功，見圖1。

2.2血清CK、MDA、NO、SOD活性檢測結(jié)果正常對(duì)照組CK活性最低，模型對(duì)照組CK活性最高，其他治療組也較正常對(duì)照組升高，說明IRI均能引起CK活性升高，導(dǎo)致機(jī)體損傷。聯(lián)合半劑量組療效優(yōu)于聯(lián)合全劑量組(P<0.05)；聯(lián)合全劑量組療效優(yōu)于尼可地爾組(P<0.05)；尼可地爾組療效優(yōu)于前列地爾組(P<0.05)。正常對(duì)照組NO、SOD含量最高，與其他各組比較差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；模型對(duì)照組NO、SOD含量最低，與其他各組比較差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；其他各組NO、SOD含量分別是：聯(lián)合半劑量組>聯(lián)合全劑量組>尼可地爾組>前列地爾組，且各組間比較差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。正常對(duì)照組MDA含量最低，與其他各組比較差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；模型對(duì)照組MDA含量最高，與其他各組比較差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；其他各組MDA含量分別是：聯(lián)合半劑量組<聯(lián)合全劑量組<尼可地爾組<前列地爾組，且各組比較差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。見表1。

2.3對(duì)心肌損傷范圍影響與正常對(duì)照組比較，模型對(duì)照組心肌梗死面積〔(43.20±6.5)% vs(30.20±2.3)%〕明顯增大(P<0.01)，表明大鼠心肌IRI模型建立成功。與模型對(duì)照組相比，聯(lián)合半劑量組能明顯縮小梗死面積〔(32.26±4.8)%,P<0.05〕。與聯(lián)合半劑量組比較，聯(lián)合全劑量組梗死面積較大〔(36.56±3.5)%，P<0.05〕。

圖1　大鼠模型建立過程中的心電圖

組別CK活性(U/ml)NO含量(μmol/L)MDA含量(nmol/ml)SOD活性(U/ml)正常對(duì)照組2.4685±0.230246.3165±0.520326.4444±1.448768.4819±1.0528模型對(duì)照組13.3621±0.44391)27.6633±0.52031)104.2222±2.13721)32.5158±1.57111)前列地爾組8.7079±0.41691)2)34.4108±0.62631)2)94.2222±3.63451)2)49.5579±0.91871)2)尼可地爾組5.7327±0.41271)2)3)37.9394±0.64171)2)3)73.1111±5.46591)2)3)51.9974±0.58571)2)3)聯(lián)合全劑量組4.7092±0.40111)2)3)4)42.8148±1.16481)2)3)4)54.4444±2.35701)2)3)4)53.9142±0.80421)2)3)4)聯(lián)合半劑量組3.2119±0.52331)2)3)4)5)44.0539±0.67741)2)3)4)5)47.9595±3.04241)2)3)4)5)59.2464±0.87991)2)3)4)5)

與正常對(duì)照組比較：1)P<0.05；與模型對(duì)照組比較：2)P<0.05；與前列地爾組比較：3)P<0.05；與尼可地爾組比較：4)P<0.05；與聯(lián)合全劑量組比較：5)P<0.05

3討論

心肌缺血/再灌注時(shí)，大量自由基產(chǎn)生，細(xì)胞膜脂質(zhì)過氧化反應(yīng)增強(qiáng)，膜流動(dòng)性和通透性發(fā)生變化，導(dǎo)致電生理活動(dòng)異常，誘發(fā)和促進(jìn)心律失常的產(chǎn)生；心肌細(xì)胞脂質(zhì)過氧化反應(yīng)增強(qiáng)〔5〕，導(dǎo)致細(xì)胞膜的結(jié)構(gòu)和功能受損。心肌細(xì)胞損傷時(shí)CK溢出增加，使其在血清中活性提高；缺血心肌的組織損傷，致使心肌缺血區(qū)的過氧化產(chǎn)物MDA含量增多、心肌組織中SOD減少；NO具有很強(qiáng)的生物學(xué)活性，是一種生物信使。CK、MDA、NO和SOD的變化均可反映心肌受損的程度。心肌缺血/再灌注整個(gè)過程中都存在細(xì)胞凋亡。

尼可地爾具有清除氧自由基和調(diào)節(jié)中性粒細(xì)胞的作用〔6〕；為了防止活性氧(ROS)引起組織損傷，所有細(xì)胞本身都存在防御機(jī)制，包括SOD、過氧化氫酶、谷胱甘肽還原酶等；其作為鉀離子(K+)通道開放劑，當(dāng)開放心肌線粒體上的KATP通道時(shí)，可以模擬缺血預(yù)適應(yīng)，提供心肌的耐缺氧能力，引起血管平滑肌的松弛，保護(hù)心肌。前列地爾為天然前列腺素(PG)類物質(zhì)，具有舒張血管、抗血小板聚集等多種作用，其不僅能擴(kuò)張正常的冠狀動(dòng)脈，還可使因血管阻塞發(fā)生缺血的心肌區(qū)域血流增加。

本實(shí)驗(yàn)通過預(yù)先給予藥物尼可地爾、前列地爾或兩者聯(lián)合，可使兩種藥物的藥理作用在各自發(fā)揮作用的同時(shí)，互相彌補(bǔ)不足，達(dá)到有效降低大鼠心肌缺血再灌注中細(xì)胞凋亡的發(fā)生及減少氧自由基的生成，且兩者半劑量聯(lián)合的效果更優(yōu)。以此在臨床中可采用尼可地爾和前列地爾聯(lián)合預(yù)給藥，保護(hù)心肌，降低心肌缺血再灌注的損傷程度，提高預(yù)后。

4參考文獻(xiàn)

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〔2014-09-17修回〕

(編輯趙慧玲/曹夢園)

〔中圖分類號(hào)〕R541.4

〔文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼〕A

〔文章編號(hào)〕1005-9202(2015)22-6350-02；

doi：10.3969/j.issn.1005-9202.2015.22.014