丁云錄　成光宇　歐喜燕　李曉兵　李馳坤　陳聲武

(長春中醫(yī)藥大學(xué)附屬醫(yī)院，吉林　長春　130021)

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清肝降濁顆粒對酒精合并高脂飲食性脂肪肝大鼠的治療作用

丁云錄成光宇歐喜燕李曉兵李馳坤陳聲武

(長春中醫(yī)藥大學(xué)附屬醫(yī)院，吉林長春130021)

摘要〔〕目的研究清肝降濁顆粒對酒精與高脂飼料聯(lián)合誘導(dǎo)的大鼠脂肪肝是否具有治療作用。方法采用灌服56%乙醇同時(shí)飼喂高脂飼料的方法，誘導(dǎo)建立復(fù)合因素導(dǎo)致的脂肪肝大鼠模型。給藥4 w后，檢測與酒精性脂肪肝密切相關(guān)的各項(xiàng)指標(biāo)。血液生化學(xué)指標(biāo)檢測：天冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(AST)活性，丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(ALT)活性；血清及肝組織中總膽固醇(TC)含量,甘油三酯(TG)含量；肝臟組織中超氧化物歧化酶(SOD)活性，丙二醛(MDA)含量；肝臟、脾臟、胸腺及腎上腺臟器系數(shù)。結(jié)果清肝降濁顆粒對脂肪肝動物血清AST、ALT、TC和TG水平的異常升高均具有明顯的降低作用(P<0.01或P<0.05)；可以升高脂肪肝動物肝組織中SOD活性，降低TC、TG和MDA含量及肝臟系數(shù)(P<0.01或P<0.05)。結(jié)論清肝降濁顆粒具有保肝降酶、抑制脂質(zhì)過氧化反應(yīng)、降低血脂肝脂含量，從而達(dá)到治療復(fù)合因素所致脂肪肝的作用。

關(guān)鍵詞〔〕清肝降濁膠囊；脂肪肝

第一作者：丁云錄(1979-)，男，助理研究員，主要從事中藥、天然藥物的藥理活性研究。

目前脂肪肝及其相關(guān)疾病的發(fā)病率呈上升趨勢。清肝降濁方是以五味子、刺五加等10幾味藥材為基源，對痰證、虛損、胸痹等均有較好療效。降濁顆粒是新型中藥制劑。本研究旨在證實(shí)其對復(fù)合因素所致脂肪肝模型大鼠的保肝降酶、抑制脂質(zhì)過氧化反應(yīng)、降低血脂肝脂含量的作用。

1材料與方法

1.1實(shí)驗(yàn)材料清潔級雄性Wistar大白鼠，體重(200±20)g。動物合格證號：SCXK-(吉)2011-0004，購于長春市億斯實(shí)驗(yàn)動物技術(shù)有限責(zé)任公司。(1)藥品：清肝降濁顆粒，批號：20140310，由長春中醫(yī)藥大學(xué)實(shí)驗(yàn)研究中心提供。無水乙醇，分析純，500 ml/瓶，批號：20131225，北京化工廠產(chǎn)品；天冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(AST)試劑盒，10 ml×10支，批號：140226；丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(ALT)試劑盒，10 ml×10支，批號：140303；總膽固醇(TC)檢測試劑盒，10 ml×10支，批號：140225；甘油三酯(TG)檢測試劑盒，10 ml×10支，批號：140430；均為中生北控生物科技股份有限公司產(chǎn)品。蛋白質(zhì)(Pr)測試盒，100T/盒，批號：20140427、超氧化物歧化酶(SOD)測試盒，規(guī)格：100T/盒，批號：20140330；丙二醛(MDA)測試盒，100T/盒，批號：20140403；均為南京建成生物工程研究所產(chǎn)品。(2)儀器：酶標(biāo)儀，型號：BIO680，Japan BIO RAD公司產(chǎn)品。Junior全自動分析儀，型號：selectra junior，荷蘭威圖公司產(chǎn)品?？烧{(diào)高速勻漿器，型號：FSH-2，江蘇省金壇市榮華儀器制造有限公司。電熱恒溫水浴鍋，型號：HH·SY21-Ni，北京長源試驗(yàn)設(shè)備廠產(chǎn)品。臺式高速冷凍離心機(jī)，型號： Biofuge Stratos，德國賀利氏公司產(chǎn)品。

1.2方法

1.2.1動物造模與分組〔1～3〕試驗(yàn)大鼠60只，隨機(jī)分為正常對照組；脂肪肝模型組；清肝降濁顆粒設(shè)800、400、200 mg/kg 3個(gè)給藥劑量組，每組12只。動物模型制備，正常對照組給予標(biāo)準(zhǔn)飼料飼養(yǎng)；其余各組均高脂飼料(82.3%標(biāo)準(zhǔn)飼料+15%豬油+2%膽固醇+0.2%丙硫氧嘧啶+0.5%膽酸鈉)飼養(yǎng)；飼喂高脂飼料的同時(shí)，每日9∶00灌胃給予56%乙醇1次，10 ml·kg-1·d-1，連續(xù)4 w。正常對照組大鼠灌胃給予等熱量的56%葡萄糖。受試藥物用蒸餾水配制成混懸液，每日13∶00灌胃給予1次；正常對照組與模型組大鼠灌胃給予等量的蒸餾水，灌胃體積為10 ml·kg-1·d-1。試驗(yàn)過程中大鼠自由攝食飲水，稱量體重1次/w，以調(diào)整給藥劑量。于給藥第4周末處死動物。

1.2.2標(biāo)本采集及觀測指標(biāo)①肝功血液生化學(xué)檢測指標(biāo)：給藥周期結(jié)束，腹主動脈取血，分離血清，檢測血清中AST、ALT；②血脂含量檢測指標(biāo)：血清中TC、TG；③肝臟組織中檢測指標(biāo)：定量剪取肝組織制備肝組織勻漿，檢測肝組織中TC、TG、MDA含量和SOD活性；④臟器系數(shù)：給藥周期結(jié)束，摘取肝臟、脾臟、胸腺、腎上腺，稱重，計(jì)算臟器系數(shù)。

2結(jié)果

2.1對轉(zhuǎn)氨酶活性及血脂的影響經(jīng)復(fù)合因素造成脂肪肝后，模型組動物血清ALT、AST、TC、TG水平均較正常對照組明顯升高(P<0.05或P<0.01)，表明脂肪肝模型已經(jīng)形成。清肝降濁顆粒3個(gè)給藥組動物血清ALT、AST活性、TC、TG水平均明顯低于模型組(P<0.05或P<0.01)。見表1。

2.2對大鼠肝組織中SOD活力、MDA含量及肝脂的影響清肝降濁顆粒800 mg/kg和400 mg/kg給藥組動物血清SOD活力較模型組顯著升高(P<0.01，P<0.05)；而且，清肝降濁顆粒3個(gè)給藥組動物血清MDA、TC、TG水平也明顯低于模型組(P<0.01或P<0.05)。見表2。

2.3對臟器系數(shù)的影響脂肪肝形成后，模型組肝臟系數(shù)比正常對照組明顯增大(P<0.05)；脾臟系數(shù)、胸腺系數(shù)與正常對照組比較有降低趨勢，但無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。清肝降濁顆粒800 mg/kg給藥劑量能明顯降低酒精性脂肪肝模型大鼠的肝臟指數(shù)，與模型組比較差異顯著(P<0.05)。見表3。

表1　清肝降濁顆粒給藥4 w對脂肪肝大鼠血清TC、

與模型組比較：1)P<0.05；2)P<0.01，下表同

表2　清肝降濁顆粒給藥4 w對脂肪肝大鼠肝組織TC、TG、

表3　清肝降濁顆粒給藥4 w對脂肪肝大鼠肝臟、脾臟、

與模型組比較：1)P<0.05

3討論

轉(zhuǎn)氨酶作為反映肝臟損傷的靈敏指標(biāo)，其活性值升高，在一定程度上反映了肝細(xì)胞損傷、壞死、痰凝的病理改變程度。本試驗(yàn)結(jié)果說明清肝降濁顆粒對肝細(xì)胞具有良好的保護(hù)作用。除ALT和AST外，自由基和脂質(zhì)過氧化在肝損傷中起著十分重要的作用〔4〕。肝臟炎癥損傷時(shí)，肝內(nèi)微循環(huán)障礙，超氧陰離子自由基產(chǎn)生增多，導(dǎo)致肝細(xì)胞膜脂質(zhì)過氧化，脂質(zhì)過氧化最終產(chǎn)物是MDA，其含量反映了組織過氧化的損傷程度〔5，6〕。自由基產(chǎn)生過多或清除過慢，體內(nèi)的動態(tài)平衡將被破壞〔7〕。SOD作為抗氧化酶系統(tǒng)主要物質(zhì)之一，對機(jī)體的氧化與抗氧化平衡起著至關(guān)重要的作用。SOD能特異地清除生物氧化產(chǎn)生的氧自由基，對細(xì)胞起到保護(hù)作用〔8〕。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，清肝降濁顆?？商岣吒螕p傷模型動物血清SOD酶活力，降低體內(nèi)MDA含量，抑制肝損傷時(shí)肝細(xì)胞的脂質(zhì)過氧化反應(yīng)，從而發(fā)揮保護(hù)肝細(xì)胞免受損傷的作用。

脂肪肝蓄積脂肪以TG為主，與肝內(nèi)脂酸合成增加或降解減少，脂酸酯化成TG作用增強(qiáng)，肝臟合成的載脂蛋白進(jìn)入血液的量減少，速度減慢有關(guān)，脂酸酯化為TG作用增強(qiáng)是導(dǎo)致脂肪肝的重要原因〔9〕。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明清肝降濁顆?？梢越档椭靖文Ｐ痛笫笱考案闻K脂類含量的升高，具有抑制肝臟脂肪堆積的作用。

本實(shí)驗(yàn)說明清肝降濁顆粒具有多種機(jī)制，可以發(fā)揮其多靶點(diǎn)、多成分協(xié)同作用的特點(diǎn)。其主要機(jī)制可能是通過保護(hù)肝細(xì)胞，增強(qiáng)肝臟對脂質(zhì)的清除能力而達(dá)到作用，對防治復(fù)合因素所致的脂肪肝顯示出了好的應(yīng)用前景。

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〔2015-04-07修回〕

(編輯曲莉/滕欣航)

通訊作者：成光宇(1971-)，男，副主任藥師，主要從事中藥方劑、天然藥物的藥理學(xué)實(shí)驗(yàn)研究。

基金項(xiàng)目：吉林省教育廳“十二五”科學(xué)技術(shù)研究項(xiàng)目〔吉教科合字(2013)第102號〕

中圖分類號〔〕R285.5〔

文獻(xiàn)標(biāo)識碼〕A〔

文章編號〕1005-9202(2015)21-6052-03；doi：10.3969/j.issn.1005-9202.2015.21.020