王宇峰　商強強　叢德毓　楚云杰

(長春中醫(yī)藥大學附屬醫(yī)院，吉林　長春　130021)

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推拿療法對衰老家兔皮膚組織超氧化物歧化酶、丙二醛含量的影響

王宇峰商強強叢德毓楚云杰

(長春中醫(yī)藥大學附屬醫(yī)院，吉林長春130021)

摘要〔〕目的觀察推拿療法對衰老家兔皮膚組織中超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)含量的影響。方法無特定病原體(SPF)級家兔48只隨機分為空白組、模型組和推拿組，每組16只。推拿組施以推拿治療21 d，其余兩組不予特殊處置。分別在治療前后取家兔皮膚組織，采用酶聯(lián)免疫吸附法(ELISA)測定SOD、MDA含量。結果治療后與模型組比較，推拿組SOD含量明顯高(P<0.01)，MDA含量明顯降低(P<0.05)。結論推拿療法可通過調節(jié)兔皮膚組織中SOD、MDA的含量，以達到抗御皮膚衰老的作用。

關鍵詞〔〕推拿；皮膚；衰老；超氧化物歧化酶；丙二醛

皮膚是人體最大的器官，具有感受刺激、排泄汗液、保護身體等作用。由于皮膚經(jīng)常暴露于外部環(huán)境中，易于衰老退化。推拿療法是抗御皮膚衰老的有效治法，在美容、保健領域具有廣泛的應用。本研究觀察推拿療法對衰老家兔皮膚組織中超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)含量的影響。

1材料與方法

1.1實驗動物及分組吉林大學動物實驗中心無特定病原體(SPF)級家兔48只，體重2.0～2.5 kg，雌性〔合格證：SCXK-(吉)2007-0004〕。通過隨機數(shù)字表法，將家兔隨機分為空白組、模型組和推拿組，每組16只，同等環(huán)境下正常喂養(yǎng)。

1.2主要實驗儀器與試劑Lambda 25紫外/可見分光光度計(美國PerkinElmer公司)，Σ960型全自動酶標儀(美國Metertech公司)，GS-15R低溫高速離心機(美國Beckman公司)，T-500型電子天平(美國G&G公司)，乙酰苯肼(APH，上海試劑三廠)，SOD試劑盒(南京建成生物工程研究所)，MDA試劑盒(南京建成生物工程研究所)。

1.3動物造模取模型組、推拿組家兔，采用APH皮下注射法建立亞急性衰老模型：2%APH生理鹽水注射液皮下注射，第1天注射5 ml·kg-1·只-1，第4、7天注射2.5 ml·kg-1·只-1。在同時間段，空白組皮下注射等量生理鹽水。

1.4干預方法推拿組在造模成功24 h后，予推拿治療：①家兔俯臥位，由上至下輕揉背部膀胱經(jīng)2 min，推背部膀胱經(jīng)第1、2側線2 min，由下至上捏脊9次，小魚際直擦背部并以透熱為度。②家兔仰臥位，摩腹5 min，點按中脘、天樞(雙)、關元穴各1 min。1次/d，連續(xù)21 d。模型組和空白組不予特殊處置。

1.5標本采集與測定在第1次治療前和最后1次治療后，各組分別處死家兔8只，取背部皮膚組織3 cm×3 cm。預冷生理鹽水漂洗，除去皮下脂肪和其他結締組織，濾紙拭干，用肌肉均漿器4℃攪拌，30 s/次，間隔15 s/次，共攪拌3次制備皮膚勻漿；加入含有0.4 mmol/L乙二胺四乙酸 (EDTA)，0.4 mmol/L NaN3，0.004 mmol/L苯甲基磺酰氨(PMSF)和2% Iodoacetamide的磷酸鹽緩沖液(PBS)10 ml；4℃，12 000 r/min離心，取上清液；用含2%Triton X-100 的PBS緩沖液15 ml重懸后再次離心，取上清液備用。采用酶聯(lián)免疫吸附法(ELISA)檢測SOD、MDA的表達水平，操作按試劑盒說明書進行。

1.6統(tǒng)計方法應用SPSS18.0統(tǒng)計軟件進行t檢驗。

2結果

治療后，推拿組皮膚組織中SOD含量明顯高于模型組，MDA含量明顯低于模型組(P<0.05)；推拿組治療前后的組內比較，有統(tǒng)計學意義(P<0.05)，見表1。

組別SOD(U/ml)治療前治療后MDA(mmol/ml)治療前治療后空白組168.2350±2.0021168.8213±1.52762.3475±0.12852.3588±0.1441模型組164.9663±2.89742)165.3375±3.06292.9650±0.28202)2.9263±0.2531推拿組165.4675±1.70351)167.5588±1.43673)5)2.8775±0.23711)2.2775±0.11314)6)

與空白組比較：1)P<0.05，2)P<0.01；與模型組比較：3)P<0.05，4)P<0.01；與治療前比較：5)P<0.05，6)P<0.01

第一作者：王宇峰(1981-)，男，主治醫(yī)師，博士，主要從事推拿手法與效應機制研究。

3討論

人體的皮膚組織經(jīng)常接受紫外線、風吹、煙霧、化學物質等有害刺激，容易出現(xiàn)皮膚粗糙、皺紋增加、色素沉著、血管擴張等衰老改變〔1〕，對人們的生活質量和心理均會帶來一定程度的影響。衰老的自由基學說認為在多種因素的作用下，機體產(chǎn)生過多的自由基，對機體內的蛋白質、核酸、脂質等產(chǎn)生氧化損傷導致機體衰老〔2，3〕。MDA是脂質過氧化最重要的產(chǎn)物之一，可直接損傷生物大分子及細胞膜，是導致機體衰老的重要因素〔4〕，體內MDA的含量可以間接反映自由基對機體損傷的程度。SOD是體內重要的氧化自由基清除劑，具有重要的抗氧化作用，SOD的表達水平可以間接反映機體清除氧化自由基的能力〔5〕。中醫(yī)學的推拿〔6〕、針灸療法〔7〕等療法具有良好的抗衰老的作用。

參考文獻4

1Helfrich YR, Sachs DL, Voorhees JJ.Overview of skin aging and photoaging〔J〕.Dermatol Nurs,2008;20(3):177-83.

2Labat-Robert J，Robert L.Longevity and aging.Role of free radicals and xanthine oxidase.A review〔J〕.Pathol Biol (Paris)，2014；62(2)：61-6.

3Kumar H，Lim HW，More SV，etal.The role of free radicals in the aging brain and Parkinson′s disease：convergence and parallelism〔J〕.Int J Mol Sci，2012；13(8)：10478-504.

4李超彥，周媛媛，辛慶鋒，等.黃精多糖對自然更年期大鼠超氧化物歧化酶、丙二醛及血脂的影響〔J〕.中國老年學雜志，2013；33(24)：6215-6.

5張笑天，鄭曉英.氧化自由基清除劑超氧化物歧化酶與疾病〔J〕.中國公共衛(wèi)生，2014；30(10)：1349-52.

6王宇峰，叢德毓，高輝，等.推拿療法對亞急性衰老家兔谷胱甘肽過氧化物酶、乳酸脫氫酶表達水平的影響〔J〕.中國老年學雜志，2014；34(22)：6433-4.

7姜艷玲，李野.針灸抗衰老機制研究〔J〕.長春中醫(yī)藥大學學報，2012；28(4)：632-3.

〔2014-11-17修回〕

(編輯苑云杰)

通訊作者：楚云杰(1965-)，男，副主任醫(yī)師，碩士生導師，主要從事推拿臨床與技術規(guī)范化研究。

基金項目：吉林省自然科學基金項目(No.201215153)

中圖分類號〔〕R244.1〔

文獻標識碼〕A〔

文章編號〕1005-9202(2015)23-6671-02；doi：10.3969/j.issn.1005-9202.2015.23.012