殷劍 （重慶市長壽區(qū)鳳城街道畜牧獸醫(yī)站 401220)

鵝病的血清學檢驗

殷劍 （重慶市長壽區(qū)鳳城街道畜牧獸醫(yī)站 401220)

鵝病的血清學檢驗也是獸醫(yī)臨床工作中常采用的實驗室診斷技術(shù)。包括凝集試驗、瓊脂擴散試驗、血凝試驗和血凝抑制試驗等。

1 凝集試驗

凝集反應具有重要的實踐意義，利用已知抗原 （稱為凝集原）檢查未知抗體 （稱為凝集素）；也可用已知抗體診斷未知抗原 （如被檢病料中分離的未知病菌），從而達到鑒定抗體 （或抗原）和診斷疾病的目的。

1.1 玻板凝集試驗

以大腸桿菌為例，用吸管吸取大腸桿菌相應的抗體1滴（0.05ml），滴在玻板上。用接種環(huán)通過無菌方法挑取待檢大腸桿菌少許，放在玻板上，與抗體混勻。在2min內(nèi)判定結(jié)果，同時做陽性、陰性對照。結(jié)果判定：2min內(nèi)出現(xiàn)顆粒狀或塊狀凝集者為陽性反應；在2min內(nèi)不出現(xiàn)凝集者為陰性反應。

1.2 凝集試驗用于細菌的血清群和型的鑒定

以檢測沙門氏菌為例。

1.2.1 分群

取一張潔凈玻片，取1滴 （0.05ml）沙門氏菌多價O血清 （A～F群）至玻片上。再用接種環(huán)挑取疑為沙門氏菌的純培養(yǎng)物少許，與玻片上的多價O血清混勻，再稍動玻片。若在2min內(nèi)出現(xiàn)凝集現(xiàn)象，即可初步確定該菌為沙門氏菌。同時，用生理鹽水做對照，以免由于細菌的自凝而判斷錯誤。被A～F多價O血清凝集者，依次用O4、O3、O10、O7、O8、O9、O2和O11因子血清做凝集試驗。視其被哪一群O因子血清所凝集，則確定被檢沙門氏菌為該群的沙門氏菌。

1.2.2 定型

菌群決定后，用該群所含的各種O因子血清和被檢菌做玻片凝集試驗，以確定其含哪些O抗原。同理確定其H抗原。根據(jù)檢出的O和H抗原列出被檢菌的抗原式，查對抗原表即可知被檢菌為哪種沙門氏菌。例如，某一菌的O抗原為O1、O4、O5、O12，而H抗原為i：1，2，其抗原結(jié)構(gòu)式為1，4，5，12：i：1，2，查知這個菌為鼠傷寒沙門氏菌。

2 血凝試驗與血凝抑制試驗

某些病毒表面具有凝集動物紅細胞的物質(zhì)，稱之為血凝素。獸醫(yī)臨床上能凝集動物紅細胞的病毒有鵝副黏病毒、流感病毒等。對新分離的這些病毒材料，可用血凝試驗和血凝抑制試驗、血細胞吸附和吸附抑制試驗、中和試驗、空斑減數(shù)試驗和熒光抗體技術(shù)等方法加以鑒定。但迄今為止，血凝試驗 （HA）和血凝抑制試驗 （HI）仍是一種快速準確的傳統(tǒng)實驗室手段。

以鵝副黏病毒為例介紹血凝試驗與血凝抑制試驗的操作方法，使用的器材為V形96孔血凝板。

2.1 血凝試驗 （HA)

鵝副黏病毒可以凝集多種動物紅細胞，但有的凝集性能不夠穩(wěn)定，故通常多采用雞的紅細胞。被檢材料可用含毒雞胚尿囊液，或含毒細胞培養(yǎng)液 （要凍融2～3次，使細胞破裂釋出病毒）。操作方法：將各種試驗材料加入各孔中，混合均勻，置于室溫 （20～30℃）或37℃10min。每5分鐘觀察一次，以對照孔的紅細胞完全沉淀為準，開始判定結(jié)果?；蛑糜?8～22℃中45～60min后觀察結(jié)果。能夠使雞紅細胞發(fā)生完全凝集的病毒最高稀釋倍數(shù)，稱為該病毒的血凝滴度。能夠使雞紅細胞完全凝集的最高稀釋倍數(shù)的病毒液作為一個血凝單位。在做血凝抑制試驗時，病毒液需含4個血凝單位量的病毒。

2.2 血凝抑制試驗 （HI)

要檢測抗副黏病毒血清的效價，必須在利用血凝試驗測定出4個血凝單位病毒的基礎上進行血凝抑制試驗。血凝抑制試驗的操作方法與血凝試驗操作方法類似。凡能使4個血凝單位的病毒凝集紅細胞的作用完全受到抑制的血清最高稀釋倍數(shù)，稱為血凝抑制價 （血凝抑制滴度）。由于血凝抑制試驗通常用2倍比法進行稀釋，因此其結(jié)果可以表示成以2為底數(shù)的負對數(shù)。如陽性血清的效價為6lg2，是指在稀釋到第6孔可以完全抑制4個血凝 （HA）單位病毒的凝集作用；也可表示陽性血清的血凝抑制 （HI）效價為1:64。

1%雞紅細胞的制備：①用滅菌注射器通過翅靜脈采抗凝血1ml（抗凝劑使用3.8%枸櫞酸鹽）；②將抗凝血放入離心管中，并加入10ml滅菌生理鹽水，輕輕混勻，切勿用力吹打，以免紅細胞破裂；③用低速離心機以1500轉(zhuǎn)/min離心3min后，小心地吸去上清液；④管底的紅細胞用10ml滅菌生理鹽水輕輕混勻，再離心，如此重復3次，用生理鹽水配制成1%的紅細胞懸液，使用前應輕輕吹打混勻。