施建國(guó)蔣宇丹 季曉燕( 上海禾豐制藥有限公司 上海 201206)

HPLC法測(cè)定馬來(lái)酸氯苯那敏注射液的有關(guān)物質(zhì)

施建國(guó)*蔣宇丹 季曉燕
( 上海禾豐制藥有限公司 上海 201206)

摘 要目的：建立HPLC法測(cè)定馬來(lái)酸氯苯那敏注射液有關(guān)物質(zhì)的方法。方法：采用高效液相色譜法，色譜柱為C18柱(4.6 mm × 250 mm，5 μm)；流動(dòng)相為乙腈-0.857%磷酸二氫銨溶液（20∶80）（用磷酸調(diào)節(jié)pH值至3.0）；流速：1.2 ml/min；檢測(cè)波長(zhǎng)：225 nm。結(jié)果：氯苯那敏峰與雜質(zhì)A、B、C、D峰之間的分離度良好，氯苯那敏及四個(gè)雜質(zhì)的最小檢測(cè)限分別為0.017、0.016、0.077、0.030、0.053 μg/ml。結(jié)論：該法簡(jiǎn)便、準(zhǔn)確、專(zhuān)屬性好、靈敏度高，可作為馬來(lái)酸氯苯那敏注射液有關(guān)物質(zhì)的檢查方法。

關(guān)鍵詞HPLC法 馬來(lái)酸氯苯那敏注射液 有關(guān)物質(zhì)

Determination of related substances in chlorphenamine maleate injection by HPLC

SHI Jianguo*, JIANG Yudan, JI Xiaoyan
(Shanghai Harvest Pharmaceutical Co. Ltd., Shanghai 201206, China)

ABSTRACTObjective: To establish an HPLC method for the determination of related substances in chlorphenamine maleate injection. Methods: The HPLC was carried out on a C18column (4.6 mm×250 mm, 5 μm) with a mobile phase of acetonitrile - 0.857% of ammonium dihydrogen phosphate solution (20:80) (adjusted to pH 3.0 with phosphoric acid) at the flow rate of 1.2 ml/min and the detected UV wavelength of 225 nm. Results: Good separation among the peaks of chlorphenamine and impurity A, B, C, D was obtained. The detection limits of chlorphenamine and 4 impurities were 0.017, 0.016, 0.077, 0.030 and 0.053 μg/ml, respectively. Conclusion: This method is simple, accurate with good specificity and high sensitivity and can be used for the analysis of related substances in chlorphenamine maleate injection.

KEY WORDSHPLC; chlorphenamine maleate injection; related substances

馬來(lái)酸氯苯那敏為抗組胺藥，臨床上主要用于過(guò)敏性鼻炎、皮膚黏膜的過(guò)敏及藥疹和接觸性皮炎等[1-2]。馬來(lái)酸氯苯那敏注射液為中國(guó)藥典2010年版二部收載品種[3]，有關(guān)物質(zhì)采用HPLC法，但僅對(duì)未知雜質(zhì)進(jìn)行控制。雜質(zhì)A、C為馬來(lái)酸氯苯那敏合成過(guò)程中產(chǎn)生的雜質(zhì)，雜質(zhì)B、D為合成過(guò)程中的中間體，這四種雜質(zhì)均可能影響到馬來(lái)酸氯苯那敏的質(zhì)量。本法參考英國(guó)藥典2013馬來(lái)酸氯苯那敏原料有關(guān)物質(zhì)檢測(cè)方法[4]，建立了馬來(lái)酸氯苯那敏注射液中有關(guān)物質(zhì)檢測(cè)的改進(jìn)方法。

1 儀器與試藥

Agilent 1200和 Agilent 1260高效液相色譜儀（美國(guó)Agilen公司，均配置VWD紫外檢測(cè)器）； CPA225 D電子天平（德國(guó)Sartorius公司）；磷酸二氫銨(分析純，國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司)；雜質(zhì)A（批號(hào)1370-073A3）、B（批號(hào)1376-040A1）、D（批號(hào)1370-071A4）均購(gòu)自TLC Pharmachem；C（批號(hào)Y0000437）購(gòu)自European Pharmacopoeia；乙腈（色譜純，F(xiàn)isher Scientific公司）；馬來(lái)酸氯苯那敏注射液（規(guī)格：1 ml∶10 mg，批號(hào)Y120301本公司產(chǎn)品）；水為超純水。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件

用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，以乙腈-0.857%磷酸二氫銨溶液（20∶80，用磷酸調(diào)節(jié)pH值至3.0）為流動(dòng)相，流速1.2 ml/min，檢測(cè)波長(zhǎng)為225 nm，進(jìn)樣量20 μl。

2.2 專(zhuān)屬性試驗(yàn)

取馬來(lái)酸氯苯那敏注射液1 ml，共5份，分別以下列條件試驗(yàn)：①酸破壞 用稀鹽酸溶液調(diào)pH值2左右，100 ℃水浴蒸干，用流動(dòng)相稀釋至10 ml；②堿破壞 用0.1 mol/L氫氧化鈉溶液調(diào)pH值12左右，100 ℃水浴蒸干，用流動(dòng)相稀釋至10 ml；③熱破壞 于100 ℃水浴中加熱10 h，用流動(dòng)相稀釋至10 ml；④氧化破壞 加30%的過(guò)氧化氫溶液2 ml，100 ℃水浴蒸干，用流動(dòng)相稀釋至10 ml；⑤光破壞 置紫外光（4 500 lx）下直接照射24 h后，用流動(dòng)相稀釋至10 ml。破壞后的樣品按色譜條件進(jìn)行分析，結(jié)果見(jiàn)圖1。

圖1 馬來(lái)酸氯苯那敏注射液破壞試驗(yàn)色譜圖

結(jié)果表明，經(jīng)光、熱破壞，馬來(lái)酸氯苯那敏注射液無(wú)明顯降解產(chǎn)物。經(jīng)酸、堿及氧化破壞試驗(yàn)，馬來(lái)酸氯苯那敏注射液明顯產(chǎn)生降解產(chǎn)物，但峰分離度均良好。

2.3 雜質(zhì)A、B、C、D相對(duì)保留時(shí)間的確定

取馬來(lái)酸氯苯那敏注射液1 ml，置100 ml量瓶中，分別精密加入雜質(zhì)A 5 mg、雜質(zhì)B 50 mg、雜質(zhì)C 10 mg、和雜質(zhì)D 50 mg，用流動(dòng)相溶解并稀釋至刻度，搖勻。精密量取1 ml，置10 ml量瓶中，用流動(dòng)相稀釋至刻度，搖勻，配制成含馬來(lái)酸氯苯那敏10 μg/ml及雜質(zhì)A、B、C、D分別為5 、50 、10 、50 μg/ml的混合溶液。HPLC檢測(cè)結(jié)果見(jiàn)圖2。

圖2 各雜質(zhì)與馬來(lái)酸氯苯那敏混合溶液

結(jié)果表明，雜質(zhì)A、B、C、D的相對(duì)保留時(shí)間分別為0.2、0.25、0.8、3；校正因子分別為1.7、0.8、0.97、2.1。各雜質(zhì)峰與氯苯那敏峰的分離度均符合要求。

2.4 有關(guān)物質(zhì)測(cè)定

取馬來(lái)酸氯苯那敏注射液適量，加流動(dòng)相稀釋制成每1 ml約含1 mg的溶液，作為供試品溶液；精密量取1 ml，置200 ml量瓶中，用流動(dòng)相稀釋至刻度，搖勻，作為對(duì)照溶液。按色譜條件進(jìn)樣，記錄色譜圖至氯苯那敏峰保留時(shí)間的3.5倍。雜質(zhì)A、B、D的校正響應(yīng)分別為1.7、0.8、2.1。供試品溶液的色譜圖中如有雜質(zhì)峰，雜質(zhì)A、B、C、D峰的相對(duì)保留時(shí)間分別為0.2、0.25、0.8、3。除溶劑峰與馬來(lái)酸峰外，雜質(zhì)A不得超過(guò)0.2%，雜質(zhì)B、C、D均不得超過(guò)0.1%，其他單雜峰不得超過(guò)0.2%，各雜質(zhì)峰面積的和不得超過(guò)1.0%。

2.5 檢出限

取雜質(zhì)A、B、C、D及馬來(lái)酸氯苯那敏注射液，分

別不斷稀釋進(jìn)樣，按信噪比S/N=3計(jì)算，雜質(zhì)A、B、C、D及馬來(lái)酸氯苯那敏的最小檢測(cè)限分別為：0.016，0.077，0.030，0.053，0.017 μg/ml。

2.6 精密度試驗(yàn)

取雜質(zhì)A、B、C、D分別配制成含5，50，10，50 μg/ml的溶液，共配制6份，分別按色譜條件進(jìn)樣，按峰面積計(jì)，RSD分別為0.18%，0.14%，0.27%，0.23%。

2.7 耐用性試驗(yàn)

用Agela、Agilent、Kromasil等不同廠家的色譜柱（均為4.6 mm×250 mm，5 μm），分別在Agilent 1200高效液相色譜儀和Agilent 1260高效液相色譜儀上進(jìn)行試驗(yàn)，結(jié)果表明不同色譜柱，不同高效液相色譜儀對(duì)雜質(zhì)的保留和檢出無(wú)顯著性差異（表1）。

表1 耐用性試驗(yàn)結(jié)果

3 討論

國(guó)內(nèi)無(wú)雜質(zhì)A、B、C、D對(duì)照品提供，只有進(jìn)口，價(jià)格昂貴，故考慮用相對(duì)保留時(shí)間對(duì)雜質(zhì)A、B、C、D進(jìn)行定位，結(jié)果顯示，該方法可行。此外，將同一樣品分別采用該法及中國(guó)藥典2010年版二部方法測(cè)定結(jié)果雜質(zhì)檢出分別為0.04%，0.02%，均為未知雜質(zhì)。但是中國(guó)藥典方法檢出馬來(lái)酸峰和氯苯那敏峰出峰時(shí)間較為接近，有文獻(xiàn)[5-8]對(duì)色譜條件進(jìn)行優(yōu)化，以改進(jìn)此現(xiàn)象。本法檢出馬來(lái)酸峰和氯苯那敏峰出峰時(shí)間距離較長(zhǎng)，不易混淆。表明本法更適合馬來(lái)酸氯苯那敏注射液的有關(guān)物質(zhì)測(cè)定。

根據(jù)中國(guó)藥典藥品雜質(zhì)分析指導(dǎo)原則[3]附錄204-206，相對(duì)響應(yīng)因子在0.9～1.1范圍內(nèi)，可以用主成分的自身對(duì)照法計(jì)算含量，超出范圍時(shí)可采用相對(duì)響應(yīng)因子校正后計(jì)算，根據(jù)實(shí)驗(yàn)結(jié)果本法采用相對(duì)響應(yīng)因子計(jì)算不在范圍內(nèi)的雜質(zhì)A、B、D的含量。

馬來(lái)酸在特定條件下會(huì)轉(zhuǎn)換成富馬酸[9-11]，在本法的酸、堿和氧化破壞試驗(yàn)中，馬來(lái)酸附近有新的雜質(zhì)峰出現(xiàn)，有可能是馬來(lái)酸部分轉(zhuǎn)換成富馬酸，需經(jīng)試驗(yàn)進(jìn)一步確實(shí)。

隨著國(guó)家對(duì)藥品雜質(zhì)要求的提高，藥品檢查有關(guān)物質(zhì)只控制未知雜質(zhì)，已遠(yuǎn)遠(yuǎn)不夠，對(duì)已知雜質(zhì)的控制是未來(lái)的發(fā)展趨勢(shì)。我們?cè)谟?guó)藥典原料標(biāo)準(zhǔn)的基礎(chǔ)上，對(duì)馬來(lái)酸氯苯那敏注射液有關(guān)物質(zhì)檢查進(jìn)行改進(jìn)，能更好地控制產(chǎn)品質(zhì)量。

參考文獻(xiàn)

[1] 張瑤華, 李端. 中國(guó)常用藥品集[M]. 上海: 上海交通大學(xué)出版社, 2006: 850.

[2] 孫琛. 臨床用藥大全[M]. 上海: 中國(guó)大百科全書(shū)出版社, 1995: 431.

[3] 國(guó)家藥典委員會(huì). 中華人民共和國(guó)藥典: 2010年版（二部）[M]. 北京: 中國(guó)醫(yī)藥科技出版社, 2010: 49-50.

[4] British Pharmacopoeia Commission. British Pharmacopoeia 2013[M]. London: The Stationery Office on Behalf of the Medicines and Healthcare products Regulatory Agency, 2013: 500.

[5] 羅域城, 張帆. 馬來(lái)酸氯苯那敏HPLC法測(cè)定條件的優(yōu)化[J]. 海峽藥學(xué), 2011, 23(3): 56-58.

[6] 孫素芳, 劉國(guó)瑞, 王喆, 等. 馬來(lái)酸氯苯那敏片的HPLC測(cè)定[J]. 中國(guó)醫(yī)藥工業(yè)雜志, 2006, 37(9): 627-629.

[7] 馬春梅, 趙變, 席榮英, 等. 高效液相色譜法測(cè)定馬來(lái)酸氯苯那敏[J]. 理化檢驗(yàn): 化學(xué)分冊(cè), 2012, 48(10): 1244-1246.

[8] 徐燕, 劉峰, 徐曉霞, 等. 以HPLC法測(cè)定馬來(lái)酸氯苯那敏含量的方法中馬來(lái)酸峰及氯苯那敏峰定位的問(wèn)題[J]. 四川生理科學(xué)雜志, 2008, 30(3): 110-111.

[9] 張國(guó)安, 王玉萍, 彭盤(pán)英, 等. 反相液相色譜法測(cè)定廢水中的馬來(lái)酸和富馬酸[J]. 化學(xué)世界, 2010, 51(7): 404-407.

[10] 張萬(wàn)軒, 劉麗琴, 王思思. 用馬來(lái)酸制備富馬酸和蘋(píng)果酸的綠色化學(xué)方法[J]. 忻州師范學(xué)院學(xué)報(bào), 2010, 26(2): 28-30.

[11] 高翠英, 李彥威, 賈浩旭. 色譜法同時(shí)測(cè)定富馬酸和馬來(lái)酸的含量[J]. 廣東化工, 2008, 35(8): 140-143.

收稿日期：(2014-07-24)

作者簡(jiǎn)介：*施建國(guó)(1982-)，男，助理工程師，從事藥物研發(fā)。E-mail：jian44072@126.com

文章編號(hào)：1006-1533(2015)01-0075-03

文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：A

中圖分類(lèi)號(hào)：R927.1; O657.72