胡曉波，　宋　穎，　王　青，　金大鳴，　熊立凡

(1.上海交通大學(xué)醫(yī)學(xué)院附屬第三人民醫(yī)院，上海 201900；2.上海市臨床檢驗(yàn)中心，上海 200126；

3.上海交通大學(xué)醫(yī)學(xué)院附屬仁濟(jì)醫(yī)院，上海 200001)

2014版ICSH血液分析儀評(píng)價(jià)指南介紹(下)

胡曉波1，宋穎2，王青2，金大鳴2，熊立凡3

(1.上海交通大學(xué)醫(yī)學(xué)院附屬第三人民醫(yī)院，上海 201900；2.上海市臨床檢驗(yàn)中心，上海 200126；

3.上海交通大學(xué)醫(yī)學(xué)院附屬仁濟(jì)醫(yī)院，上海 200001)

摘要：介紹了2014年國(guó)際血液學(xué)標(biāo)準(zhǔn)化委員會(huì)(ICSH)關(guān)于血液分析儀的性能評(píng)價(jià)指南。該指南從儀器的進(jìn)樣模式、批內(nèi)精密度、批間精密度、攜帶污染、線性、標(biāo)本穩(wěn)定性、參考區(qū)間、準(zhǔn)確性和可比性等方面對(duì)廠商提出了具體確認(rèn)、評(píng)價(jià)的方法和要求，并推薦對(duì)流式細(xì)胞術(shù)和/或數(shù)字成像技術(shù)的白細(xì)胞分類計(jì)數(shù)、有核紅細(xì)胞計(jì)數(shù)和未成熟粒細(xì)胞計(jì)數(shù)采用流式細(xì)胞免疫表型參考方法進(jìn)行評(píng)價(jià)。每個(gè)臨床實(shí)驗(yàn)室在儀器用于患者標(biāo)本檢測(cè)前，應(yīng)對(duì)上述性能進(jìn)行部分確認(rèn)或轉(zhuǎn)移。

關(guān)鍵詞：血液分析儀；評(píng)價(jià)；確認(rèn)；驗(yàn)證；數(shù)字成像；流式細(xì)胞

中圖分類號(hào)：

文章編號(hào)：1673-8640(2015)01-0001-06R446.1

文獻(xiàn)標(biāo)志碼：碼：A

DOI：10.3969/j.issn.1673-8640.2015.01.001

Abstract:Introduces the International Council for Standardization in Haematology (ICSH) guideline for the evaluation of blood cell analyzers, 2014 edition. In this guideline, the performance evaluation, including sampling mode, within-run precision, between-run precision, carry-over, linearity, sample stability, reference interval, accuracy and comparability of haematology analyzers, should be conducted through validation and verification by manufacturers. The assessment of flow cytometry-based or digital imaging-based leukocyte differential count, nucleated red blood cell count and immature granulocyte count is recommended by flow cytometry immune-phenotypic counting as a reference method. A part of validation or transference of instrument should be performed by each clinical laboratory before reporting patient results.

作者簡(jiǎn)介：胡曉波，男，1969年生，碩士，主任技師，主要從事臨床檢驗(yàn)基礎(chǔ)研究。

收稿日期：(2014-11-24)

Introduction of the ICSH guidelines for the evaluation of blood cell analyzers, 2014 edition (Ⅱ)HUXiaobo1,SONGYing2,WANGQing2,JINDaming2,XIONGLifan3.(1.TheThirdPeople′sHospitalAffiliatedtoShanghaiJiaotongUniversitySchoolofMedicine,Shanghai201900,China; 2.ShanghaiCentreforClinicalLaboratory,Shanghai200126,China; 3.RenjiHospital,ShanghaiJiaotongUniversitySchoolofMedicine,Shanghai200001,China)

Key words: Haematology analyzer; Evaluation; Validation; Verification; Digital imaging; Flow cytometry

7.準(zhǔn)確度準(zhǔn)確度是檢測(cè)結(jié)果與已知真值之間的一致程度。真值概念不適用于全血細(xì)胞計(jì)數(shù)(complete blood count, CBC)的許多參數(shù)。真值由決定性參考方法獲得，而參考方法常不適用于CBC。CBC中能正確估計(jì)的相關(guān)參數(shù)是血紅蛋白、血細(xì)胞壓積(packed cell volume, PCV)、紅細(xì)胞計(jì)數(shù)、白細(xì)胞計(jì)數(shù)、血小板計(jì)數(shù)、網(wǎng)織紅細(xì)胞(reticulocyte, Ret)計(jì)數(shù)和白細(xì)胞分類計(jì)數(shù)。氰化高鐵血紅蛋白法是國(guó)際推薦的血紅蛋白濃度測(cè)定的參考方法。其原理是用含氰化鉀和高鐵氰化鉀的溶液稀釋血液，除硫化血紅蛋白外，血紅蛋白和碳氧血紅蛋白(HbCO)均轉(zhuǎn)化為氰化高鐵血紅蛋白，用分光光度計(jì)在540 nm處比色，或使用帶黃綠色濾光片的光電比色儀比色，測(cè)定溶液吸光度。目前，大多數(shù)計(jì)數(shù)儀采用手工法改良氰化試劑或無害的化學(xué)試劑(如十二烷基硫酸鈉)檢測(cè)血紅蛋白，可避免因處理大量含氰廢棄物而造成的環(huán)境污染。無論采用哪種方法檢測(cè)血紅蛋白，氰化高鐵血紅蛋白法是唯一可接受的參考方法。測(cè)定Ret推薦采用流式細(xì)胞術(shù)作為參考方法，檢測(cè)精密度高于使用新亞甲藍(lán)染色的手工方法。手工方法雖然主觀且不精密，但目前仍是可接受的參考方法。美國(guó)臨床實(shí)驗(yàn)室標(biāo)準(zhǔn)化協(xié)會(huì)(Clinical and Laboratory Standards Institute, CLSI) H26-A2文件指出：手工Ret計(jì)數(shù)的參考方法是流式細(xì)胞術(shù)，但在常規(guī)臨床實(shí)驗(yàn)室中通常不使用。在實(shí)踐中，除白細(xì)胞分類計(jì)數(shù)項(xiàng)目推薦與參考方法(即手工分類400個(gè)白細(xì)胞)的結(jié)果進(jìn)行比較外，許多臨床實(shí)驗(yàn)室還常比較待評(píng)價(jià)儀器與常規(guī)儀器之間的結(jié)果，但對(duì)國(guó)家級(jí)評(píng)價(jià)而言，如檢測(cè)系統(tǒng)之間的結(jié)果有明顯差異時(shí)，應(yīng)采用上文列出的參考方法進(jìn)行評(píng)價(jià)。

8.可比性在比較待評(píng)價(jià)儀器與目前常規(guī)儀器的測(cè)定結(jié)果時(shí)，應(yīng)盡可能使用大量正常和異常標(biāo)本，包括含干擾物質(zhì)的標(biāo)本，其中正常標(biāo)本應(yīng)占總數(shù)的1/2～1/3。完整驗(yàn)證需要的總標(biāo)本量至少為250～300份，表1(見本刊2014年第29卷第12期第1204頁)列出了應(yīng)包括的各種標(biāo)本。標(biāo)本應(yīng)至少能在1周或更長(zhǎng)時(shí)間內(nèi)檢測(cè)，以評(píng)估儀器變異和實(shí)驗(yàn)室內(nèi)患者群體的每日變異。檢測(cè)結(jié)果應(yīng)作圖，以顯示待評(píng)價(jià)儀器(Y軸)與常規(guī)儀器(X軸)之間結(jié)果的差異。采用回歸分析、相關(guān)分析和特定的Bland-Altman散點(diǎn)圖進(jìn)行一致性評(píng)估。相關(guān)系數(shù)是一種估計(jì)落在直線上的數(shù)據(jù)是否良好的量值，其越接近1.0越顯示線性。斜率、截距、相關(guān)或偏移是很重要的評(píng)估信息。因儀器不能正確識(shí)別所有細(xì)胞(如白血病原始細(xì)胞等)，所以在進(jìn)行方法學(xué)比較時(shí)，應(yīng)了解離群值的醫(yī)學(xué)診斷價(jià)值。因?yàn)樵诜治鏊袛?shù)據(jù)時(shí)易忽視低值的差異，所以對(duì)白細(xì)胞減少、貧血和血小板減少的標(biāo)本應(yīng)注意觀察平均差異或Bland-Altman散點(diǎn)圖。應(yīng)計(jì)算所有分析誤差(即基于儀器之間的差異)，即使兩臺(tái)儀器的結(jié)果存在偏移，線性回歸分析也可能顯示為有良好的相關(guān)性，所以當(dāng)結(jié)果呈正態(tài)分布時(shí)，相同標(biāo)本的配對(duì)數(shù)據(jù)應(yīng)采用配對(duì)t檢驗(yàn)；而對(duì)于非正態(tài)分布的數(shù)據(jù)，配對(duì)數(shù)據(jù)可采用Wilcoxon秩和檢驗(yàn)或Mann-WhitneyU檢驗(yàn)。一般情況下，所有上述試驗(yàn)以P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。應(yīng)解釋任何標(biāo)本出現(xiàn)極端值的原因，極端值不能和其他結(jié)果合并，否則會(huì)影響統(tǒng)計(jì)分析結(jié)果。當(dāng)待評(píng)價(jià)儀器測(cè)定結(jié)果與常規(guī)儀器的結(jié)果存在離群值時(shí)，應(yīng)采用上述參考方法檢測(cè)標(biāo)本。所有標(biāo)本應(yīng)制備血涂片，并做顯微鏡檢查。某些參數(shù)僅在一種或型號(hào)有限的儀器上使用，如低色素紅細(xì)胞百分比、網(wǎng)織紅細(xì)胞血紅蛋白量/濃度或未成熟血小板分?jǐn)?shù)。此時(shí)，這些參數(shù)或許不可能與另一種方法進(jìn)行結(jié)果比較，但對(duì)這些參數(shù)的結(jié)果也應(yīng)進(jìn)行評(píng)估，以確定是否與患者診斷和臨床情況一致且適當(dāng)。當(dāng)血液分析儀采用單克隆抗體和流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)某些細(xì)胞時(shí)，如抗CD61標(biāo)記血小板?？笴D4和抗CD8標(biāo)記淋巴細(xì)胞亞群應(yīng)按CD4+T細(xì)胞群分析指南與已驗(yàn)證的流式細(xì)胞儀的檢測(cè)結(jié)果進(jìn)行比較，或與當(dāng)前臨床實(shí)驗(yàn)室測(cè)定CD4+和CD8+淋巴細(xì)胞亞群的流式細(xì)胞術(shù)進(jìn)行比較。

9.白細(xì)胞分類參考方法[含有核紅細(xì)胞(nucleated red blood cells, NRBC)和未成熟粒細(xì)胞(immature granulocytes, IG)]推薦采用2×200個(gè)白細(xì)胞分類的參考方法，含NRBC和IG計(jì)數(shù)。一般由兩位有經(jīng)驗(yàn)的檢驗(yàn)人員對(duì)所有標(biāo)本進(jìn)行檢查，若兩位檢驗(yàn)人員的結(jié)果不一致，由第3位檢驗(yàn)人員復(fù)查。不同的自動(dòng)計(jì)數(shù)儀對(duì)異常細(xì)胞的處理方法不同，如某些儀器原先只能提供異常細(xì)胞報(bào)警提示，現(xiàn)已能計(jì)數(shù)NRBC和IG。如果儀器報(bào)警提示原始細(xì)胞，應(yīng)與形態(tài)學(xué)檢查結(jié)果相關(guān)。相似方法可用于某些儀器提供的紅細(xì)胞碎片報(bào)警或研究計(jì)數(shù)類的參數(shù)。對(duì)血液分析儀全面評(píng)價(jià)機(jī)構(gòu)或制造商來說，今后將推薦采用流式細(xì)胞術(shù)做白細(xì)胞分類。使用數(shù)字成像系統(tǒng)分析白細(xì)胞可能會(huì)替代顯微鏡方法，但在引入評(píng)價(jià)或臨床實(shí)驗(yàn)室前應(yīng)對(duì)其進(jìn)行評(píng)估/驗(yàn)證。此類評(píng)估/驗(yàn)證應(yīng)含正常和異常標(biāo)本(包括各系異常形態(tài))，并采用手工分類2×200個(gè)白細(xì)胞或流式細(xì)胞術(shù)的方法。

10.數(shù)字成像血液系統(tǒng)數(shù)字成像系統(tǒng)已有很長(zhǎng)的歷史，始于20世紀(jì)60年代后期和70年代早期。數(shù)字成像系統(tǒng)可對(duì)楔形涂片做WBC五分類和形態(tài)學(xué)檢查。隨著常規(guī)三分類血液分析儀以及之后五分類自動(dòng)分類技術(shù)的廣泛應(yīng)用，這些數(shù)字成像系統(tǒng)的持續(xù)維護(hù)成本及系統(tǒng)性能的局限性(取決于楔形涂片、涂片上細(xì)胞分布、染色一致性)導(dǎo)致了這些原始儀器系統(tǒng)的消亡。隨著計(jì)算機(jī)系統(tǒng)、復(fù)雜處理能力和圖形分析軟件的改進(jìn)以及人工神經(jīng)網(wǎng)絡(luò)的出現(xiàn)，數(shù)字成像系統(tǒng)重回臨床實(shí)驗(yàn)室，用于血常規(guī)分析。該系統(tǒng)有兩種類型：(1)具備預(yù)分類功能的細(xì)胞定位系統(tǒng)(即數(shù)字細(xì)胞定位/預(yù)分類系統(tǒng)，由有經(jīng)驗(yàn)的檢驗(yàn)人員確認(rèn)細(xì)胞)：目前，美國(guó)FDA批準(zhǔn)了兩種數(shù)字細(xì)胞定位/預(yù)分類系統(tǒng)，即“由有經(jīng)驗(yàn)的檢驗(yàn)人員確認(rèn)的具備預(yù)分類功能的細(xì)胞定位儀”，由檢驗(yàn)人員決定所有細(xì)胞(正常和異常)的最終分類。除美國(guó)以外還有其他國(guó)家有其它系統(tǒng)可用。數(shù)字細(xì)胞定位/預(yù)分類系統(tǒng)對(duì)細(xì)胞的準(zhǔn)確識(shí)別取決于血涂片的質(zhì)量和染色質(zhì)量。手工制備血涂片應(yīng)有恰當(dāng)?shù)挠馉钸吘墸员悴檎壹?xì)胞；自動(dòng)血涂片儀的制片和染色更一致。系統(tǒng)設(shè)計(jì)應(yīng)能兼容各種染色方案，制造商可推薦特定的設(shè)置或提供儀器使用方案，以評(píng)價(jià)單個(gè)實(shí)驗(yàn)室目前使用的涂片制備/染色方案。這些系統(tǒng)的質(zhì)控可采用臨床實(shí)驗(yàn)室自制的血涂片作為質(zhì)控涂片，對(duì)日內(nèi)或日間染色和涂片質(zhì)量進(jìn)行評(píng)價(jià)。這些數(shù)字成像細(xì)胞定位/預(yù)分類系統(tǒng)的評(píng)估需包括下列性能：可重復(fù)性/精密度、準(zhǔn)確度、可比性、診斷靈敏度和特異度。若有替代基于CLSI H20-A2文件的評(píng)估方案，經(jīng)批準(zhǔn)可用的細(xì)胞定位/預(yù)分類系統(tǒng)則可考慮將CLSI H20-A2文件作為細(xì)胞定位/預(yù)分類系統(tǒng)的參考方法。因細(xì)胞定位/預(yù)分類系統(tǒng)不能自動(dòng)吸取血液，故攜帶污染、線性、空白限(limit of blank, LoB)/檢出限(limit of detection, LoD)/定量限(limit of quantity, LoQ)就不適用于此類系統(tǒng)的評(píng)價(jià)。盡管標(biāo)本穩(wěn)定性對(duì)能否識(shí)別陳舊標(biāo)本的細(xì)胞很重要，但無需嚴(yán)格用于數(shù)字細(xì)胞定位/預(yù)分類系統(tǒng)的評(píng)價(jià)。數(shù)字細(xì)胞定位/預(yù)分類系統(tǒng)很少受干擾(如緡錢狀紅細(xì)胞、紅細(xì)胞聚集和血小板凝塊等)，若存在典型的干擾物也多數(shù)是肉眼可見的。另外，必須用已安裝的系統(tǒng)驗(yàn)證每個(gè)實(shí)驗(yàn)室手工或自動(dòng)分類法建立的參考區(qū)間。(2)數(shù)字成像血液系統(tǒng)，即數(shù)字成像CBC/分類(differential, Diff)/Ret血液分析儀：可做CBC和正常白細(xì)胞五分類，有些儀器還可做Ret。當(dāng)檢出異常細(xì)胞時(shí)，儀器會(huì)報(bào)警，讓有經(jīng)驗(yàn)的檢驗(yàn)人員進(jìn)行復(fù)檢。對(duì)數(shù)字成像系統(tǒng)識(shí)別CBC、正常白細(xì)胞和Ret來說，在使用前應(yīng)對(duì)儀器所有的性能特征進(jìn)行全面評(píng)估(目前，美國(guó)FDA尚未批準(zhǔn)過任何系統(tǒng))。各種類型的數(shù)字成像系統(tǒng)應(yīng)測(cè)試的性能特征見表2。攜帶污染、線性、LoD和LoQ等性能特征的測(cè)試可在較常用方法的基礎(chǔ)上改良，以適應(yīng)數(shù)字成像系統(tǒng)與大多數(shù)“傳統(tǒng)”電阻抗或光學(xué)法血液分析儀之間的差異。在某些系統(tǒng)上，攜帶污染的評(píng)估需要使用處理后的標(biāo)本(如空白血清標(biāo)本、商品化低值紅細(xì)胞標(biāo)本及乏白細(xì)胞和血小板標(biāo)本)作為“高值”標(biāo)本分析后的“低值”標(biāo)本，以檢測(cè)白細(xì)胞、紅細(xì)胞、血紅蛋白和血小板攜帶污染。從低值標(biāo)本中去除白細(xì)胞和血小板很難做到。應(yīng)重視異常細(xì)胞的攜帶污染。影響電阻法或光學(xué)法血液分析儀的干擾物質(zhì)(如脂血、膽紅素血癥、副蛋白血癥等)不會(huì)影響數(shù)字成像檢測(cè)CBC/分類(Diff)/Ret參數(shù)。緡錢狀紅細(xì)胞、冷凝集和RBC聚集等極端情況可能影響CBC、Diff和Ret結(jié)果，因此，需在分析前處理這些標(biāo)本。評(píng)價(jià)時(shí)應(yīng)包括形態(tài)學(xué)異常標(biāo)本(見本刊2014年第29卷第12期第1204頁表1)。“數(shù)字成像系統(tǒng)”血液分析儀和細(xì)胞/預(yù)分類系統(tǒng)的分析軟件中都應(yīng)包括這些異常情況(細(xì)胞)的識(shí)別或計(jì)數(shù)。

表2　數(shù)字成像血液分析系統(tǒng)需測(cè)試的性能特征

11. 流式細(xì)胞術(shù)免疫表型計(jì)數(shù)法流式細(xì)胞術(shù)是手工顯微鏡白細(xì)胞計(jì)數(shù)的一種替代方法，用造血白細(xì)胞不同標(biāo)志物的特定單克隆抗體進(jìn)行分類，預(yù)期不但能提高精密度和準(zhǔn)確度，而且還可對(duì)顯微鏡不能識(shí)別的細(xì)胞做進(jìn)一步分類，明顯減少顯微鏡細(xì)胞分類的主觀性。初步研究使用了3種不同組合的6色單克隆抗體和熒光色素。在ICSH的主持下，初步的研究結(jié)果表明，要獲得新方法白細(xì)胞分類的預(yù)期性能特征需使用8種及以上的配色組合。免疫表型方法的特點(diǎn)是一次分析即能明確識(shí)別淋巴細(xì)胞(定義不同亞型)、單核細(xì)胞(活化、靜止和未成熟)、粒細(xì)胞(成熟和未成熟)和漿細(xì)胞，同時(shí)計(jì)數(shù)原始細(xì)胞和有核紅細(xì)胞。最終推薦的白細(xì)胞計(jì)數(shù)參考方法旨在作為替代CLSI H20-A2文件的更穩(wěn)健的方法。目前，ICSH工作組正在用最新的“ICSH/ICCS細(xì)胞熒光檢測(cè)確認(rèn)指南”做進(jìn)一步的評(píng)價(jià)和確認(rèn)，研究使用的抗體組合方案見表3。

表3　單克隆抗體及DNA染料Syto16組合方案(按ICSH

12.異常細(xì)胞報(bào)警和細(xì)胞計(jì)數(shù)一樣，細(xì)胞形態(tài)也需評(píng)估，并與儀器產(chǎn)生的可疑異常細(xì)胞報(bào)警的有效性進(jìn)行比較。當(dāng)白細(xì)胞、紅細(xì)胞和血小板異常時(shí)，大多數(shù)儀器會(huì)報(bào)警。在其他情況下，產(chǎn)生的報(bào)警是提示儀器結(jié)果不可靠或錯(cuò)誤，不應(yīng)繼續(xù)使用。理想的情況是儀器能識(shí)別異常細(xì)胞，以便進(jìn)一步進(jìn)行實(shí)驗(yàn)研究。根據(jù)Galen和Gambino的建議，應(yīng)計(jì)算每個(gè)與形態(tài)學(xué)或出現(xiàn)異常細(xì)胞有關(guān)的單個(gè)報(bào)警的靈敏度、特異度、陽性預(yù)期值、陰性預(yù)期值和總有效率，且所有標(biāo)本都需做血涂片檢查。靈敏度是儀器顯示異常標(biāo)本陽性結(jié)果的能力，而特異度是儀器顯示非異常標(biāo)本陰性結(jié)果的能力。細(xì)胞形態(tài)分類有效性的評(píng)估見表4、表5。

13.質(zhì)量保證參加經(jīng)認(rèn)證的室間質(zhì)量評(píng)價(jià)(EQA)計(jì)劃是有益的。EQA能顯示該儀器與其他儀器進(jìn)行比較的性能水平。EQA計(jì)劃[包括美國(guó)病理學(xué)家學(xué)會(huì)(College of American Pathologists，CAP)、英國(guó)國(guó)家室間質(zhì)量評(píng)價(jià)方案(United Kingdom National External Quality Assessment Service，UK NEQAS)或其他組織的方案]常使用部分或全部穩(wěn)定化全血，因此，不能采用和新鮮血液相同的操作方法。EQA樣品的檢測(cè)結(jié)果通常具有儀器特異性，特別是白細(xì)胞分類計(jì)數(shù)、血小板和Ret。EQA是在多個(gè)實(shí)驗(yàn)室的儀器組之間，而不是在所有儀器組之間進(jìn)行相互比較。通常由EQA組織方計(jì)算靶值和可接受限值并反饋給參加的實(shí)驗(yàn)室。所有可報(bào)告結(jié)果應(yīng)有一個(gè)室內(nèi)質(zhì)控的設(shè)定值(廠商提供的穩(wěn)定化全血)。目前，有些儀器的某些參數(shù)是不可信的，實(shí)驗(yàn)室管理者至少應(yīng)考慮這些參數(shù)能否用于臨床決策。理想情況下，EQA是真實(shí)的，但對(duì)儀器特定的參數(shù)或新的參數(shù)而言，并非都可行。值得注意的是，某些擴(kuò)展參數(shù)，甚至是某些既定的參數(shù)，如NRBC、IG、平均血小板體積、未成熟血小板分?jǐn)?shù)、未成熟網(wǎng)織紅細(xì)胞分?jǐn)?shù)和紅細(xì)胞分布寬度等在許多國(guó)家沒有可用的EQA計(jì)劃。

表4　細(xì)胞形態(tài)分類有效性評(píng)估的計(jì)算

注：TP為真陽性；FP為假陽性；FN為假陰性；TN為真陰性

表5　細(xì)胞形態(tài)分類有效性的評(píng)估

14.血液分析儀地區(qū)性確認(rèn)/轉(zhuǎn)移在各種情況下，新系統(tǒng)都應(yīng)與當(dāng)前實(shí)驗(yàn)室內(nèi)部正在使用的系統(tǒng)進(jìn)行比較。在進(jìn)行比較時(shí)應(yīng)使用1套用于檢測(cè)靈敏度、特異度、可重復(fù)性和結(jié)果穩(wěn)健性的標(biāo)本。如尚未按本指南所述做過完整的評(píng)估，則應(yīng)進(jìn)行文獻(xiàn)檢索，查找針對(duì)設(shè)備的獨(dú)立的同行評(píng)議。確認(rèn)/轉(zhuǎn)移可定義為：建立文件化的證據(jù)，保證一個(gè)特定的流程將始終如一地產(chǎn)生符合其預(yù)定質(zhì)量規(guī)格和質(zhì)量屬性的結(jié)果。在國(guó)家級(jí)評(píng)價(jià)期間，雖然已評(píng)估了儀器的精密度、與參考方法的可比性、線性、攜帶污染和偏移，但仍需對(duì)儀器有一個(gè)簡(jiǎn)單的確認(rèn)和對(duì)參考區(qū)間的研究?？傊?，臨床實(shí)驗(yàn)室應(yīng)根據(jù)本文件前述的評(píng)估方案進(jìn)行簡(jiǎn)單的確認(rèn)，并有必要至少使用120例標(biāo)本確定參考區(qū)間是否與現(xiàn)有儀器相同。如臨床實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)新生兒或兒童標(biāo)本還應(yīng)獨(dú)立進(jìn)行評(píng)估。如兒童標(biāo)本采用開蓋模式檢測(cè)，也應(yīng)進(jìn)行評(píng)估。許多血液分析儀可采用儀器特定稀釋液稀釋的毛細(xì)血管血液進(jìn)行分析。血液稀釋液各異，若在毛細(xì)血管模式下運(yùn)行，通常儀器會(huì)計(jì)算全血結(jié)果。如臨床實(shí)驗(yàn)室采用此模式，應(yīng)至少使用30例標(biāo)本與全血模式進(jìn)行比較和評(píng)估。在任何評(píng)價(jià)開始前，最重要的是確保儀器符合臨床實(shí)驗(yàn)室要求，其服務(wù)能達(dá)到預(yù)期的目的。評(píng)價(jià)人員應(yīng)能獲得下列信息：名稱、儀器制造商和分銷商、價(jià)目表(包括出租或租賃的選項(xiàng)、試劑和耗材成本)和服務(wù)合同。應(yīng)核查儀器整體尺寸、電力需求、排液、操作環(huán)境(溫度范圍)和儀器產(chǎn)熱性等。耗材(試劑、質(zhì)控品、校準(zhǔn)品)的信息、試劑配方和有效期、可能的測(cè)試量和測(cè)試數(shù)以及儲(chǔ)存要求可作為儀器完整評(píng)價(jià)的一部分。此時(shí)，還應(yīng)了解儀器與實(shí)驗(yàn)室/醫(yī)院信息系統(tǒng)的連接能力、可用參數(shù)、檢測(cè)原理、最小標(biāo)本量、數(shù)據(jù)顯示、與其它系統(tǒng)的兼容性等全部?jī)?nèi)容。新儀器產(chǎn)生的結(jié)果應(yīng)與同一機(jī)構(gòu)內(nèi)其他儀器和即時(shí)檢驗(yàn)(point-of-care testing，POCT)儀器已用的報(bào)告單位和參考區(qū)間具有可比性。儀器應(yīng)能處理臨床實(shí)驗(yàn)室最常接收到的各類試管。在評(píng)估計(jì)劃中應(yīng)包括獲得相關(guān)標(biāo)本、保養(yǎng)記錄、結(jié)果分析、使用統(tǒng)計(jì)學(xué)處理和撰寫最終報(bào)告所需的實(shí)際時(shí)間或周期。對(duì)貸款購買或租賃的儀器，此點(diǎn)尤為重要。應(yīng)估計(jì)評(píng)估所需的試劑和耗材的量。在評(píng)估期間，對(duì)維修和保養(yǎng)的安排必須合適，若有可用的培訓(xùn)活動(dòng)，則于評(píng)估前就應(yīng)開始。制造商和供應(yīng)商應(yīng)簽署在儀器安裝后檢測(cè)和校準(zhǔn)均在預(yù)定范圍內(nèi)的聲明。應(yīng)選擇恰當(dāng)職級(jí)的檢驗(yàn)人員來完成評(píng)估，并確保這些人員可用。應(yīng)選擇技能與設(shè)備均可能與用戶相似的檢驗(yàn)人員進(jìn)行評(píng)估。買方應(yīng)對(duì)儀器做地區(qū)性評(píng)價(jià)，并確認(rèn)結(jié)果。在技術(shù)評(píng)估前，應(yīng)要求制造商提供儀器安裝、培訓(xùn)和適用的血液標(biāo)本的初步信息。應(yīng)建立書面方案，規(guī)定如何進(jìn)行確認(rèn)。首先，臨床實(shí)驗(yàn)室應(yīng)確定儀器的性能規(guī)格與制造商提供的證明相似甚至更好，且與之前公開報(bào)道的性能相比不分上下。儀器的地區(qū)性評(píng)價(jià)和分析也應(yīng)考慮結(jié)果的可比性、參考區(qū)間、可靠性和可接受性，其評(píng)價(jià)方法應(yīng)與國(guó)家級(jí)評(píng)價(jià)一樣。與全面評(píng)價(jià)相比，進(jìn)行性能確認(rèn)只需較少的標(biāo)本，但用于可比性和參考區(qū)間的確認(rèn)至少需要50例標(biāo)本。未來，將有更多的核心/中心實(shí)驗(yàn)室接收來自遠(yuǎn)程或運(yùn)輸時(shí)間達(dá)48 h的標(biāo)本。應(yīng)確認(rèn)這些標(biāo)本的結(jié)果，以保證提供給臨床醫(yī)生的結(jié)果是正確的，臨床上使用這些結(jié)果是安全的。有些指南性文件，如CLSI H20-A2文件中白細(xì)胞分類參考方法規(guī)定儀器評(píng)價(jià)至少應(yīng)包括200個(gè)標(biāo)本(1/2正常、1/2異常)。規(guī)范的臨床實(shí)驗(yàn)室應(yīng)規(guī)定手工分類和自動(dòng)分類的比較使用的標(biāo)本量最低限度至少為50～100例(1/3～1/2為正常標(biāo)本，其余為異常標(biāo)本)。

15.效率(1)處理量：應(yīng)記錄每小時(shí)標(biāo)本(包括質(zhì)控物)的處理量。任何需時(shí)多于標(biāo)準(zhǔn)的CBC和白細(xì)胞分類的試驗(yàn)(如Ret)、某些分析儀對(duì)異常標(biāo)本有選擇另一檢測(cè)通道、進(jìn)行擴(kuò)展計(jì)數(shù)或采用不同檢測(cè)方法的反饋功能，這些時(shí)間均應(yīng)加以考慮。還應(yīng)測(cè)定儀器開機(jī)、關(guān)機(jī)和常規(guī)保養(yǎng)所需的時(shí)間。也應(yīng)記錄無論何種原因需重新檢測(cè)的標(biāo)本。(2)標(biāo)本識(shí)別：目前，使用條碼閱讀器識(shí)別標(biāo)本很普遍，這給臨床實(shí)驗(yàn)室提供了明顯的益處。但為了機(jī)動(dòng)起見，應(yīng)有手工錄入患者信息和試驗(yàn)的程序。在評(píng)價(jià)期間，如條碼用于標(biāo)本識(shí)別，則還應(yīng)評(píng)估和記錄儀器條碼讀取的差錯(cuò)，避免這些差錯(cuò)影響儀器的效率。臨床實(shí)驗(yàn)室應(yīng)尋求有關(guān)信息技術(shù)的選擇、中間件的可用性(儀器和實(shí)驗(yàn)室信息系統(tǒng)之間的軟件通訊)和基于專家規(guī)則系統(tǒng)的結(jié)果自動(dòng)審核或自動(dòng)血片制備的信息。(3)結(jié)果顯示和儲(chǔ)存的信息技術(shù)：應(yīng)確立儀器和醫(yī)院信息系統(tǒng)，尤其是雙向接口的兼容性。應(yīng)評(píng)估數(shù)據(jù)顯示和圖形的質(zhì)量和格式，包括質(zhì)控結(jié)果的顯示以及結(jié)果確認(rèn)的處理、數(shù)據(jù)儲(chǔ)存的能力、結(jié)果檢索的速度和可用的質(zhì)控計(jì)劃。(4)培訓(xùn)：應(yīng)明確制造商所提供的培訓(xùn)的質(zhì)量，包括操作手冊(cè)的易用性和清晰性。臨床實(shí)驗(yàn)室應(yīng)列出制造商的聯(lián)系表，用于儀器升級(jí)、召回通知或技術(shù)更新。(5)可靠性：應(yīng)記錄儀器損壞而無法使用的持續(xù)時(shí)間以及制造商的維修響應(yīng)時(shí)間。(6)價(jià)格：應(yīng)確定每次測(cè)試的費(fèi)用，包括質(zhì)控品價(jià)格、操作人員保養(yǎng)和操作儀器的耗時(shí)以及從標(biāo)本處理至報(bào)告最終解釋所需的時(shí)間。(7)可接受性：應(yīng)考慮員工的意見和喜好。應(yīng)對(duì)檢查儀器操作所需的專業(yè)水平及儀器對(duì)臨床實(shí)驗(yàn)室流程和組織的影響進(jìn)行評(píng)估。任何對(duì)臨床實(shí)驗(yàn)室設(shè)計(jì)的修改均應(yīng)予以考慮。正如本指南之前所述，應(yīng)保存所有的評(píng)估記錄。應(yīng)確認(rèn)制造商聲明的批內(nèi)、批間精密度。應(yīng)使用異常標(biāo)本和盡可能含有干擾物質(zhì)的標(biāo)本研究設(shè)備的適用性和與當(dāng)前方法的可比性。應(yīng)記錄所產(chǎn)生的異常細(xì)胞報(bào)警和儀器因故障而不能提供結(jié)果的數(shù)量，并與現(xiàn)有的方法進(jìn)行比較。地區(qū)性評(píng)價(jià)也應(yīng)與國(guó)家級(jí)分析一樣，考慮儀器的精密度、結(jié)果可比性、參考區(qū)間、可靠性和可接受性。一旦在數(shù)月內(nèi)確認(rèn)了設(shè)備，就應(yīng)進(jìn)行審核，確保設(shè)備符合制造商的所有聲明、所報(bào)告的參數(shù)、任何中間件和信息系統(tǒng)均符合臨床實(shí)驗(yàn)室需求。

16.POCT分析儀評(píng)價(jià)的特殊注意事項(xiàng)POCT可定義為在臨床實(shí)驗(yàn)室以外的環(huán)境，由醫(yī)護(hù)人員為患者所做的任何分析試驗(yàn)。POCT的設(shè)計(jì)是將實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)靠近患者，所提供的服務(wù)比來自中心實(shí)驗(yàn)室的服務(wù)更為快捷。從設(shè)計(jì)用于患者床邊、重癥監(jiān)護(hù)室或手術(shù)室的手持式POCT設(shè)備到小型臺(tái)式POCT分析儀，雖各不相同，但最終的檢測(cè)結(jié)果均應(yīng)附有參考區(qū)間，其結(jié)果與主要的血液分析儀應(yīng)具有可比性。對(duì)現(xiàn)有一些采用毛細(xì)管血液檢測(cè)白細(xì)胞和血小板的便攜式血紅蛋白儀和單獨(dú)檢測(cè)血紅蛋白的血?dú)夥治鰞x，也應(yīng)采用同樣的方式進(jìn)行評(píng)價(jià)。理想情況下，在一個(gè)機(jī)構(gòu)不同地點(diǎn)需多臺(tái)POCT儀器時(shí)，只能選擇一種型號(hào)的儀器。這樣患者才可能有相同的檢測(cè)結(jié)果和參考區(qū)間；同時(shí)也簡(jiǎn)化了培訓(xùn)、試劑申請(qǐng)和儲(chǔ)存以及服務(wù)和維護(hù)合同。之前，ICSH已發(fā)表了3篇有關(guān)POCT性能確認(rèn)的全面綜述。應(yīng)在儀器將要放置的環(huán)境中檢測(cè)設(shè)備的性能；檢測(cè)應(yīng)由將要操作的人員予以實(shí)施，從而確保證明由非檢驗(yàn)人員使用的易操作性?，F(xiàn)已證明熟練和不熟練的使用者之間的經(jīng)驗(yàn)是不同的。通常POCT儀器用戶的檢測(cè)質(zhì)量要遜于有經(jīng)驗(yàn)的檢驗(yàn)人員。

注：以上內(nèi)容是ICSH工作組血液分析儀評(píng)價(jià)指南(已發(fā)表于《國(guó)際實(shí)驗(yàn)血液學(xué)雜志》2014年第6期[1])的譯文，希望能對(duì)國(guó)內(nèi)CFDA、檢驗(yàn)界同行在評(píng)價(jià)和確認(rèn)/驗(yàn)證血液分析儀的工作中會(huì)有所幫助，以提高我國(guó)血液分析儀整體評(píng)價(jià)水平。

參考文獻(xiàn)

[1]International Council for Standardization in Haematology. ICSH guidelines for the evaluation of blood cell analysers including those used for differential leucocyte and reticulocyte counting [J]. Int J Lab Hematol，2014，36(6)：613-627.

(本文編輯：龔曉霖)