徐　玫,張忠泉,王璟奕

(1.河南大學(xué) 藥學(xué)院 河南 開封 475004；2.河南大學(xué) 教育科學(xué)學(xué)院，河南 開封475004)

同時測定銀黃膠囊中綠原酸、木犀草苷和黃芩苷的含量

徐玫1,張忠泉1,王璟奕2

(1.河南大學(xué) 藥學(xué)院 河南 開封 475004；2.河南大學(xué) 教育科學(xué)學(xué)院，河南 開封475004)

摘要：目的建立同時測定銀黃膠囊中綠原酸、木犀草苷和黃芩苷含量的方法。方法HPLC等度洗脫法。C18色譜柱；流動相為甲醇∶水∶磷酸(53∶47∶0.1)；流速1.0 mL/min；檢測波長328 nm；柱溫30℃。結(jié)果綠原酸在2.200～44.00 μg/mL范圍內(nèi)(r2=0.999 9)、木犀草苷在0.080～22.00 μg/mL范圍內(nèi)(r2=0.999 5)、黃芩苷在24.20～242.0 μg/mL范圍內(nèi)(r2=0.999 2)線性關(guān)系均良好；其平均回收率分別為99.6%、99.3%和99.7%。結(jié)論該方法操作簡便，成本低，工作效率高，可作為銀黃膠囊質(zhì)量的控制方法。

關(guān)鍵詞：HPLC法；銀黃膠囊；綠原酸；木犀草苷；黃芩苷；同時測定

中圖分類號：R927.2

文獻(xiàn)標(biāo)識碼：識碼： A

文章編號：章編號： 1672-7606(2015)01-0029-03

收稿日期：2014-10-1

基金項目：河南大學(xué)大學(xué)生創(chuàng)新性實驗計劃項目(10NB028)。

作者簡介：徐玫(1968-)，女，河南開封人，副教授，從事藥物質(zhì)量控制工作。

Abstract:ObjectiveTo establish a method for determination of chlorogenic acid, galuteolin and baicalin in Yinhuang Capsule. MethodsHPLC method Isocratic elution. column:C18column; mobile phase: methanol-water-phosphoric acid (53∶47∶0.1); flow rate:1.0 mL/min; detection wavelength:328 nm; column temperature:30 ℃. ResultsChlorogenic acid in within the range of 2.200～44.00 μg/mL peak area as well linear relationship (r2=0.9999), the average recovery was 99.6%; galuteolin in within the range of 0.080～22.00 μg/mL peak area as well linear relationship (r2=0.9995), the average recovery was 99.3%; baicalin in within the range of 24.20～242.0 μg/mL peak area as well linear relationship (r2=0.9992), the average recovery was 99.7%. Conclusion The method is simple and increases efficiency, can be used as a method of the determination of silver yellow capsule.

Simultaneous determination chlorogenic acid, galuteolin and baicalin of Yinhuang Capsule

XU Mei1, ZHANG Zhongquan1, WANG Jingyi2

(1.HenanUniversityCollegeofPharmacyDepartment,Kaifeng,Henan475004,China; 2.HenanUniversityCollegeofEducationScience,Kaifeng,Henan475004,China)

Key words: HPLC method; Yinhuang Capsule; chlorogenic acid; galuteolin; baicalin; simultaneous determination

銀黃制劑主要是由金銀花和黃芩藥材經(jīng)提取精致而成，金銀花其活性成分主要為有機酸類(綠原酸、異綠原酸等)、黃酮類(木犀草苷等)；黃芩中的主要成分為黃芩苷。該類制劑具有清熱解毒、消炎等功效，應(yīng)用于臨床多達(dá)十幾種劑型[1]。但現(xiàn)行版的《中國藥典》收載的劑型只有銀黃口服液和銀黃顆粒沖劑，均采用反相高效液相色譜法對其中的有效成分黃芩苷和綠原酸分別進(jìn)行測定[2]。目前國內(nèi)文獻(xiàn)[3-8]報道的對銀黃制劑分別測定及同時測定的目標(biāo)性物質(zhì)，也均是綠原酸和黃芩苷兩種有效成分。為更有效地控制銀黃制劑的質(zhì)量，提高工作效率、降低成本，對金銀花中另一主要活性成分木犀草苷[9-11]同時進(jìn)行測定很有必要。

1儀器、試劑與試藥

1.1　儀器

LC2010A高效液相色譜儀、二極管陣列檢測器(日本島津公司)； AS3120超聲儀(奧特賽恩斯儀器有限公司)；BP211D電子天平(Sartorius公司)。

1.2　藥品和試劑

銀黃膠囊(通化久銘藥業(yè)有限公司，批號：090801、090802、090803)；黃芩苷對照品(批號：110715-200914)和綠原酸對照品(批號：110753-200913)，木犀草苷對照品(批號：1117202200604)(中國藥品生物制品檢定所)；甲醇(色譜純，天津賽孚世紀(jì)科技發(fā)展有限公司)；磷酸(分析純，濟南金恒益化工有限公司)；樂百氏飲用純凈水(樂百氏(廣東)食品飲料有限公司)。

2方法與結(jié)果

2.1　色譜條件

色譜柱：C18柱(5 μm 250 mm×4.6 μm)；流動相為甲醇∶水∶磷酸(53∶47∶0.1)；柱溫：30 ℃；檢測波長：328 nm；流速：1.0 mL/min；進(jìn)樣量20 μL。

2.2　對照品溶液的制備

精密稱取綠原酸對照品0.220 0 mg、木犀草苷對照品0.110 0 mg和黃芩苷對照品1.210 0 mg，分置3個5 mL棕色量瓶中；各加體積分?jǐn)?shù)60%甲醇適量，超聲溶解并稀釋至刻度，搖勻，即得44.00 μg/mL綠原酸對照液、22.00 μg/mL木犀草苷對照液及242.0 μg/mL黃芩苷對照液，在上述色譜條件下分別進(jìn)樣20 μL測定，混合對照品色譜圖見圖1。

2.3　供試品溶液的制備

取同批次銀黃膠囊20粒，去除囊殼，稱取內(nèi)容物5份，每份約0.1 g，精密稱定，置50 mL棕色量瓶中，加體積分?jǐn)?shù)60%的甲醇溶劑約40 mL，超聲提取50 min，加體積分?jǐn)?shù)60%的甲醇溶劑至刻度，搖勻，過濾。精密量取1 mL濾液至25 mL棕色量瓶中，加體積分?jǐn)?shù)60%的甲醇溶劑至刻度，搖勻，0.45 μm微孔濾膜濾過，即得，供試品色譜圖見圖2。

2.4　線性關(guān)系的考察

分別精密量取黃芩苷對照液、綠原酸對照液和木犀草苷對照液各適量，分別加體積分?jǐn)?shù)60%的甲醇溶劑稀釋制成不同梯度濃度的溶液。按上述色譜條件，分別精密吸取各系列對照液20 μL進(jìn)樣，以質(zhì)量濃度(x，μg/mL)為橫坐標(biāo)，峰面積(y)為縱坐標(biāo)進(jìn)行線性回歸，黃芩苷回歸方程：y=34.728x-158.73，r2=0.999 2；綠原酸回歸方程：y=51.161x+0.785 6，r2=0.999 9；木犀草苷回歸方程：y=2 537.98x+269.08，r2=0.999 5。

2.5　精密度實驗

精密吸取同一黃芩苷、綠原酸和木犀草苷對照品混合溶液20 μL，在上述色譜條件下連續(xù)進(jìn)樣6次，測得三者峰面積的RSD分別為1.7%、1.8%和2.0%。

2.6　穩(wěn)定性實驗

精密量取供試品溶液20 μL，依上述色譜條件分別于0，2，4，8，16，24 h進(jìn)樣，黃芩苷、綠原酸和木犀草苷峰面積的RSD分別為1.9%、1.7%和2.3%，表明供試品在24 h內(nèi)穩(wěn)定性良好。

2.7　回收率實驗

精密稱取同批次樣品9份(約半粒內(nèi)容物的量)于10 mL棕色量瓶中；按以下要求分別加入依“2.2”法制備的黃芩苷、綠原酸和木犀草苷對照液。在1～3號樣品中加入3.0 mL對照液；4～6號樣品中加入4.0 mL對照液；7～9號樣品中加入5.0 mL對照液。加體積分?jǐn)?shù)60%甲醇溶劑適量，超聲提取50 min，定容，過濾，按上述色譜條件依次進(jìn)樣測定，計算出回收率，結(jié)果見表1。

表1　黃芩苷、綠原酸和木犀草苷的回收率實驗(n=9)

2.8　樣品含量測定

分別取3批次銀黃膠囊，按“2.3”法制備供試品溶液，分別進(jìn)樣測定，按回歸方程計算，每批次平行測定3次，結(jié)果見表2。

3討論

用二極管陣列檢測器對綠原酸、木犀草苷和黃芩苷的對照品色譜峰進(jìn)行紫外掃描：綠原酸次強吸收分別在218 nm和318 nm，最強吸收在328 nm；黃芩苷次強吸收在328 nm，最強吸收在278 nm；木犀草苷最強吸收在220 nm，但此處溶劑峰會產(chǎn)生干擾，次強吸收分別在255 nm和350 nm處。由于銀黃膠囊中木犀草苷的含量低于綠原酸且兩者含量均遠(yuǎn)遠(yuǎn)低于黃芩苷，若以最低含量的木犀草苷的次強吸收255 nm和350 nm為檢測波長，綠原酸、黃芩苷的吸收均較弱(吸收處于峰谷或峰末尾處)；而在綠原酸的最強吸收328 nm處，黃芩苷有次強吸收，木犀草苷也有較強吸收。因此，為減小測量誤差，以三者吸收均較強的328 nm作為檢測波長。

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[責(zé)任編輯李武營]