秦勝萍

【摘 要】 目的：研究HPLC測(cè)定安宮牛黃丸中黃芩苷和黃芩素的含量。方法：色譜柱：Hypersil ODS （250mm×4.6mm，5μm）；流速：1.0ml/min；溫度：室溫；進(jìn)樣量：10μl；流動(dòng)相：乙腈-0.4%磷酸（黃芩苷、黃芩素流動(dòng)相比例分別為21∶79、35∶65）；波長(zhǎng)：277nm，進(jìn)樣前脫氣0.5h。結(jié)果：黃芩苷在80～2400mg、黃芩素在5.10～40.80mg范圍內(nèi)回收效果良好。結(jié)論：本方法可用于安宮牛黃丸中黃芩苷和黃芩素的含量測(cè)定。

【關(guān)鍵詞】 安宮牛黃丸；黃芩苷；黃芩素；

【中圖分類號(hào)】R284.1 【文獻(xiàn)標(biāo)志碼】 A 【文章編號(hào)】1007-8517（2016）06-0026-02

安宮牛黃丸是中醫(yī) “溫病” 范疇的急救藥物，對(duì)其質(zhì)量的要求也較高。臨床主要用于病毒性腦炎、胰島素不足型糖尿病、腦中風(fēng)、原發(fā)性高血壓、精神障礙、嬰幼兒肺炎、股血癥、敗血癥和重型顱腦損傷等[1]。安宮牛黃丸的配方包括牛黃、水牛角、麝香、珍珠、雄黃、朱砂、郁金、黃連、黃芩、梔子和冰皮，其中黃芩的主要成分是黃芩苷和黃芩素，其主要活性為抗菌消炎、增加免疫力、保肝利膽、清熱去火等[2]。利用高效液相色譜（HPLC）對(duì)安宮牛黃丸中的黃芩苷和黃芩素含量進(jìn)行測(cè)定已取得顯著效果[3]。

1 儀器與材料

1.1 儀器 高壓液相色譜儀（美國(guó)Agilent 1100型）；精密電子分析天平（AMY 220）；超聲波震蕩儀（KQ-250B）。

1.2 材料 安宮牛黃丸（國(guó)藥準(zhǔn)字Z21020627，沈陽(yáng)紅藥制藥有限公司）；黃芩苷標(biāo)準(zhǔn)品（批號(hào)：110715-200413，中國(guó)藥品生物制品檢定所）；黃芩素對(duì)照品（批號(hào)：TCM015080118，南京替斯艾么中藥研究所）；乙腈、甲醇為色譜純；磷酸為分析純；水為純凈水。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件 Hypersil ODS （250mm×4.6mm，5 μm）；流速：1.0ml/min；溫度：室溫；進(jìn)樣量：10μl；流動(dòng)相：乙腈-0.4% H3PO4（黃芩苷與黃芩素分別為21∶79、35∶65）；波長(zhǎng)：277nm，進(jìn)樣前脫氣0.5h。

2.2 溶液的制備

2.2.1 樣品溶液的制備 將安宮牛黃丸破碎，準(zhǔn)確稱0.400g，轉(zhuǎn)移至5ml玻璃瓶中，加5ml CH3OH，超聲提取15min，離心后保留上清液，該操作重復(fù)2次。將上述三次收集的上清液合并，定容至25ml。在上樣前，用0.45μm的過濾器去除大的殘?jiān)?/p>

2.2.2 標(biāo)準(zhǔn)品溶液制備 分別準(zhǔn)確稱取黃芩苷和黃芩素標(biāo)準(zhǔn)品5mg與2.5mg，分別用CH3OH稀釋并定容至5ml，濃度為1mg/ml和0.5mg/ml。

2.3 標(biāo)準(zhǔn)曲線 分別精確量取黃芩苷、黃芩素標(biāo)準(zhǔn)品溶液，然后配置系列溶液，并分別吸取20μl進(jìn)樣，根據(jù)色譜峰面積Y對(duì)濃度X（μg/ml）做線性分析。黃芩苷的回歸方程為Y=32160X-3.9419 （r=0.9999），線性范圍為80～2400mg；黃芩素Y=41796X-162.87 （r=0.9999），線性范圍5.10～40.80mg。

2.4 精密度試驗(yàn) 精確吸取標(biāo)準(zhǔn)品20μl。連續(xù)重復(fù)6次，測(cè)定黃芩苷和黃芩素的峰面積并進(jìn)行精密度計(jì)算，結(jié)果見表1。

2.5 穩(wěn)定性試驗(yàn) 取同一樣品，分別于0、1、3、5、7、9h分別加樣20μl，測(cè)定黃芩苷和黃芩素的峰面積，結(jié)果如表2。

2.6 重復(fù)性試驗(yàn) 準(zhǔn)確稱取0.6g的安宮牛黃丸，總共6份。按之前的方法制備成溶液并進(jìn)行峰面積分析。黃芩苷和黃芩素的峰面積結(jié)果見表3。

2.7 回收率試驗(yàn) 準(zhǔn)確稱取0.2g的已知樣品，總共5份，分別加入黃芩苷和黃芩素的標(biāo)準(zhǔn)品，制備成溶液，測(cè)定黃芩苷和黃芩素的含量，計(jì)算兩者的加樣回收率分別為100.02%和98.823%，RSD%分別為0.63和1.29，結(jié)果見表4。

2.8 樣品含量測(cè)定 依次取3顆安宮牛黃丸，按上述條件進(jìn)行制備樣品，并按標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算黃芩苷和黃芩素的含量。結(jié)果見表5。

3 討論

中藥制劑成分復(fù)雜，且各組分的預(yù)處理方式不同，加工方式不同，單純的將組方藥摻雜在一起很難發(fā)揮藥效[4]。鑒于中藥制劑各組分之間的協(xié)調(diào)性、互補(bǔ)性和相互制約性，必須建立一種檢測(cè)方法可以對(duì)中藥組方中的活性物質(zhì)含量進(jìn)行測(cè)定[5]。尤其是多指標(biāo)成分的定量分析，可保證臨床用藥的安全性、有效性和可靠性。目前使用的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)都是以生化藥物為基礎(chǔ)的化學(xué)成分分析和測(cè)定，與中藥的臨床療效的相關(guān)性不高，不能完整的反應(yīng)中藥中有效成分的含量[6]。且復(fù)方藥的成分極為復(fù)雜，其有效成分的含量測(cè)定會(huì)因提取和測(cè)定方法的不同而出現(xiàn)差異。安宮牛黃丸由11種藥物組合而成，其藥理作用機(jī)制復(fù)雜，藥物與藥物之間的作用目前還不能得到科學(xué)的解釋，而黃芩苷和黃芩素是該藥的有效成分，必須對(duì)兩者的含量進(jìn)行嚴(yán)格的檢測(cè)，保證藥品的質(zhì)量[7-8]。

研究采用HPLC法對(duì)安宮牛黃丸中的有效成分黃芩苷和黃芩素的含量進(jìn)行分析，確定最佳的優(yōu)化條件，并對(duì)影響HPLC結(jié)果的各方面因素進(jìn)行考察，結(jié)果表明HPLC的檢測(cè)結(jié)果準(zhǔn)確，可重復(fù)性高。利用分光光度計(jì)對(duì)標(biāo)準(zhǔn)品溶液在200～400nm波長(zhǎng)內(nèi)掃描檢測(cè)，結(jié)果在280nm處有最大吸收峰。研究嘗試多種提取方法以尋求更適合的提取方式，結(jié)果表明超聲波和加熱回流提取兩種方式的回收效果最高，而超聲提取的雜質(zhì)更少，因此選擇超聲提取，時(shí)間選為15min。分別用甲醇和乙醇進(jìn)行提取，根據(jù)過濾時(shí)的難易程度及回收率結(jié)果，甲醇的效果更好。流動(dòng)相經(jīng)過探索確定為乙腈-0.4%磷酸。綜上所述，本法具有精密性、穩(wěn)定性和重復(fù)性好的特點(diǎn)，可用于安宮牛黃丸中黃芩苷和黃芩素的含量測(cè)定。

參考文獻(xiàn)

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[2] 崔愛瑛.安宮牛黃丸的藥理及臨床研究進(jìn)展[J].中國(guó)實(shí)驗(yàn)方劑學(xué)雜志，2012，8（20）：342-343.

[3] 郜清.HPLC法測(cè)定安宮牛黃丸中黃芩苷含量[J].安徽醫(yī)藥，2013，17（5）：766-767.

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[6] 楊華，李希，高華娟，等.中藥質(zhì)量生物活性檢測(cè)的發(fā)展現(xiàn)狀及思考[J].中藥與臨床，2014，5（1）：50-53.

[7] 葉世龍，劉愛芹.安宮牛黃丸的實(shí)驗(yàn)藥理學(xué)研究[J].中華中醫(yī)藥學(xué)刊，2011，29（9）：1954-1957.

[8] 楊仕珉，詹雪艷，馮欣，等.基于牛黃特征峰的安宮牛黃丸特征指紋圖譜研究[J]. 中華中醫(yī)藥雜志，2014，29（9）：2923-2926.

（收稿日期：2016.01.07）