作者單位：100039北京，武警總醫(yī)院消化內(nèi)科

胃癌前病變和胃癌組織CD34的表達(dá)及其臨床意義

田南，屈亞威，劉海峰

【摘要】目的研究CD34在萎縮性胃炎、腸上皮化生、上皮內(nèi)瘤變和胃癌組織中的表達(dá)水平及其臨床意義。方法采用免疫組化方法檢測(cè)胃癌前病變及胃癌組織中CD34 的表達(dá)，對(duì)CD34染色陽(yáng)性的微血管進(jìn)行計(jì)數(shù)，研究胃癌發(fā)生發(fā)展過程中CD34表達(dá)情況，以及與胃癌臨床病理學(xué)特征的關(guān)系。結(jié)果CD34的陽(yáng)性反應(yīng)物質(zhì)呈棕黃色細(xì)顆粒狀，表現(xiàn)為圓形、橢圓形、條索狀、分枝狀及不規(guī)則形狀。正常胃黏膜、萎縮性胃炎、腸上皮化生、上皮內(nèi)瘤變、胃癌的微血管密度值分別為11.15±2.36、14.68±3.78、22.18±4.12、39.38±10.43、57.54±12.57。上皮內(nèi)瘤變與胃癌組織微血管密度值明顯高于萎縮性胃炎與腸上皮化生(P<0.05)。CD34在胃癌前病變及胃癌組織中的表達(dá)與胃癌的分化類型及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有關(guān)(P<0.05)。結(jié)論CD34在胃癌組織中的表達(dá)明顯高于胃癌前病變，CD34在萎縮性胃炎、腸上皮化生、上皮內(nèi)瘤變及胃癌中的表達(dá)呈逐漸增多的趨勢(shì)，提示CD34的異常表達(dá)與胃癌的發(fā)生發(fā)展關(guān)系密切，有望成為胃癌發(fā)生發(fā)展的預(yù)測(cè)指標(biāo)。

【關(guān)鍵詞】胃癌；癌前病變；CD34；微血管密度

通訊作者：劉海峰，E-mail：haifengliu333@163.com

基金項(xiàng)目：山西省青年科技研究

作者簡(jiǎn)介：李霞，碩士，副主任醫(yī)師，E-mail:mugu77@sina.com

作者簡(jiǎn)介：趙松花，本科學(xué)歷，副主任醫(yī)師，E-mail:597314549@qq.com

【中國(guó)圖書分類號(hào)】R735.2

Expression and significance of CD34 in gastric precancerous lesions and gastric carcinoma

TIAN Nan, QU Yawei, and LIU Haifeng. Department of Gastroenterology, General Hospital of Chinese People's Armed Police Forces, Beijing 100039, China

Abstract【】ObjectiveTo study the clinical significance of CD34 expression levels and in atrophic gastritis, intestinal metaplasia, intraepithelial neoplasia and gastric carcinoma. MethodsImmunohistochemistry was used to detect expression of CD34 in precancerous lesions and gastric carcinoma, CD34 staining positive microvessels were counted, the occurrence and development of gastric cancer in CD34 expression and its relationship with clinicopathological features of gastric cancer were studied. ResultsCD34 positive reaction showed brown granular substance, expressed as round, oval, cord-like, branched and irregular shapes. The densities of microvessels in normal gastric mucosa, atrophic gastritis, intestinal metaplasia, intraepithelial neoplasia, and gastric carcinoma, were 11.15±2.36,14.68±3.78,22.18±4.12,39.38±10.43, and 57.54±12.57, respectruely. The microressel densities in intraepithelial neoplasia and gastric careinoma were significantly higher than those in atrophic gastritis and intestinal metaplasia (P<0.05). Expression of CD34 in gastric precancerous lesions and gastric carcinoma correlated with differential type of gastric carcinoma is lymph node metastasis (P<0.05). ConclusionsThe expression of CD34 in gastric carcinoma is significantly higher than that in precancerous lesions; Expresion of CD34 in atrophic gastritis, intestinal metaplasia, intraepithelial neoplasia and gastric cancer shows a gradually increasing trend, suggesting that abnormal expression of CD34 is closely related to the development of gastric cancer, and is expected to be a predictor of the development of gastric cancer.

【Key words】gastric cancer;precancerous lesions;CD34;microvessel density

近年來，對(duì)腫瘤血管生成的研究表明, 血管生成在實(shí)體腫瘤的惡變、生長(zhǎng)、轉(zhuǎn)移等方面起著至關(guān)重要的作用[1，2]。腫瘤微血管密度(microvessel density，MVD)是對(duì)腫瘤血管最密集部位進(jìn)行的微小血管計(jì)數(shù)[3]，是檢測(cè)腫瘤新生血管生成的評(píng)價(jià)方法，CD34抗體可用于標(biāo)記新生微血管中血管內(nèi)皮細(xì)胞的表達(dá)。研究表明，乳腺癌、子宮內(nèi)膜癌、結(jié)腸癌中CD34的表達(dá)明顯高于癌旁組織及正常對(duì)照組織[4-6]。目前，有關(guān)CD34在胃癌發(fā)生發(fā)展過程中表達(dá)的研究報(bào)道較少，本研究采用免疫組化方法檢測(cè)胃癌前病變及胃癌組織中CD34表達(dá)，并探討其與臨床病理特征的關(guān)系，旨在分析其在胃癌發(fā)生發(fā)展過程中的意義。

1　材料與方法

1.1材料通過分層抽樣收集我院病理科貯存的2011-08至2014-01的病理組織蠟塊，選擇經(jīng)手術(shù)切除并經(jīng)病理證實(shí)的胃癌標(biāo)本28例，男14例，女14例，平均55.6歲。經(jīng)本院消化內(nèi)鏡中心取材并病理證實(shí)的胃黏膜上皮內(nèi)瘤變標(biāo)本33例，男22例，女11例，平均60.9歲。萎縮性胃炎標(biāo)本22例，男12例，女10例，平均63.3歲。腸上皮化生標(biāo)本32例，男19例，女13例，平均58.1歲，正常胃黏膜標(biāo)本19例，男8例，女11例，平均65.5歲。入選標(biāo)準(zhǔn)：(1)胃癌前病變符合悉尼系統(tǒng)[7]診斷標(biāo)準(zhǔn)；(2)胃癌診斷標(biāo)準(zhǔn)參照文獻(xiàn)[8]；(3)排除術(shù)前已經(jīng)過放射治療或化學(xué)藥物治療的病例。

1.2試劑鼠抗人CD34單克隆抗體工作液、PV-9000試劑盒均購(gòu)自北京中杉生物科技有限公司，DAB顯色試劑盒購(gòu)自美國(guó)DAKO公司。

1.3染色步驟標(biāo)本用10%甲醛固定，常規(guī)脫水石蠟包埋，4 μm連續(xù)切片，70 ℃烤片機(jī)，烤片30 min，二甲苯及梯度乙醇(100%、95%、85%、75%)脫蠟至水，去離子水30 s，3%H2O210 min，去離子水30 s，枸櫞酸鹽溶液高壓修復(fù)2 min 30 s，pH7.4的PBS緩沖液15 min，滴加一抗，4 ℃冰箱過夜，室溫復(fù)溫20 min，pH=7.4的PBS緩沖液15 min，滴加二抗37 ℃溫箱20 min，pH7.4的PBS緩沖液15 min，DAB顯色，蘇木精復(fù)染，脫水、透明、封片。對(duì)照試驗(yàn)，用已知陽(yáng)性對(duì)照片做陽(yáng)性對(duì)照，用PBS代替一抗作陰性對(duì)照。

1.4結(jié)果判定通過免疫組化進(jìn)行CD34染色檢測(cè)，血管內(nèi)皮細(xì)胞被染成棕黃色，MVD計(jì)數(shù)采用Weidner方法[3]進(jìn)行，先在低倍鏡下觀察以確定微血管密度最高處，再在高倍鏡下，以其與周圍腫瘤細(xì)胞和結(jié)締組織成分明顯區(qū)別的任何一個(gè)棕黃著色的內(nèi)皮細(xì)胞或細(xì)胞叢均作為一個(gè)微血管，只要結(jié)構(gòu)不相連，其分支結(jié)構(gòu)也作為一個(gè)微血管計(jì)數(shù)，記錄5個(gè)視野中的微血管數(shù)，取其平均數(shù)作為該樣本的MVD值。由兩位病理科醫(yī)師用雙盲法評(píng)估組織切片機(jī)免疫組織化學(xué)CD34的表達(dá)結(jié)果。

2　結(jié)　　果

2.1胃不同病變組織CD34的表達(dá)CD34在正常胃黏膜、萎縮性胃炎、腸上皮化生、上皮內(nèi)瘤變及胃癌組織中均有表達(dá)。其免疫組化染色背景清晰，為間質(zhì)血管內(nèi)皮細(xì)胞著色呈棕黃色，表現(xiàn)為圓形、橢圓形、條索形、分支狀及不規(guī)則形狀(圖1)。

圖1　CD34在正常胃黏膜和胃不同病變組織中的

A. 正常胃黏膜; B. 萎縮性胃炎; C. 腸上皮化生; D. 低級(jí)別上皮內(nèi)瘤變; E. 高級(jí)別上皮內(nèi)瘤變; F. 胃癌

2.2胃癌前病變及胃癌組織CD34的表達(dá)(MVD值)分析在正常胃黏膜、萎縮性胃炎、腸上皮化生、上皮內(nèi)瘤變及胃癌組織中CD34的表達(dá)(MVD值)存在差異。CD34在胃上皮內(nèi)瘤變及胃癌組織中的表達(dá)明顯高于正常胃黏膜、萎縮性胃炎及腸上皮化生(P<0.05)，CD34在胃癌組織中的表達(dá)顯著高于正常胃黏膜組、萎縮性胃炎組及腸上皮化生組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01，表1)。

表1　胃癌前病變及胃癌組織中的MVD值分析　( ± s)

注：與正常胃黏膜、萎縮性胃炎、腸上皮化生比較，①P<0.05；與正常胃黏膜、萎縮性胃炎、腸上皮化生比較，②P<0.01

2.3CD34的表達(dá)(MVD值)與胃癌臨床病理特征的關(guān)系胃癌組織中MVD值為57.54±12.57，與患者年齡、性別無(wú)關(guān)，與胃癌的分化類型及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有關(guān)，中-低分化型胃癌MVD值明顯高于高分化型胃癌MVD值(P<0.05)，有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的胃癌MVD值明顯高于無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的胃癌MVD值(P<0.05，表2)。

表2　CD34的表達(dá)與胃癌臨床病理特征的關(guān)系　( ± s)

注：與高分化型胃癌比較，①P<0.05；與無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的胃癌比較，②P<0.05

3　討　　論

惡性腫瘤無(wú)限制地增殖、浸潤(rùn)、遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移及復(fù)發(fā)，預(yù)示腫瘤血管的生成；腫瘤血管與正常血管相連通，為腫瘤生長(zhǎng)提供有效的血供，從而使腫瘤細(xì)胞的浸潤(rùn)生長(zhǎng)并向遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移成為可能[9]。Folkman等[10]早在1990年就提出腫瘤生長(zhǎng)依賴于血管生成的觀點(diǎn)，指出腫瘤的生長(zhǎng)、侵襲以及轉(zhuǎn)移，離不開血管的生成。因此，腫瘤的遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移與腫瘤內(nèi)新生的血管數(shù)量有著必然的聯(lián)系[11]。目前正在研究中的血管內(nèi)皮細(xì)胞標(biāo)記物如VWP因子相關(guān)抗原，CD31和CD34抗原等中，以CD34抗原特異性最高，明顯優(yōu)于內(nèi)皮細(xì)胞的其他標(biāo)記物。CD34定位于1號(hào)染色體長(zhǎng)臂，分子量為105～120 ku，作為跨膜單鏈糖蛋白，主要表達(dá)在造血前體細(xì)胞和血管內(nèi)皮細(xì)胞上，因此又稱為人原始造血細(xì)胞抗原，是內(nèi)皮細(xì)胞特異的標(biāo)記物，與血管生成密切相關(guān)[12]。MVD是對(duì)腫瘤血管最密集部位進(jìn)行的微小血管計(jì)數(shù)，可反映腫瘤誘導(dǎo)血管生成的能力，與腫瘤的惡性程度和復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移密切相關(guān)[13]。本研究應(yīng)用CD34來標(biāo)記腫瘤組織內(nèi)的血管內(nèi)皮細(xì)胞，以此反映腫瘤組織內(nèi)的微血管密度。

CD34是一種特異度較高的血管內(nèi)皮細(xì)胞標(biāo)記物，通過特異性抗體與CD34抗原相結(jié)合，產(chǎn)生免疫著色，通過免疫組化試劑的逐級(jí)放大，反映新生血管的生成情況。通過CD34免疫染色法可視化內(nèi)皮細(xì)胞來檢測(cè)血管，用微血管計(jì)數(shù)法來測(cè)定腫瘤新生血管。腫瘤新生血管不僅為腫瘤組織的生長(zhǎng)繁殖提供血供及氣體營(yíng)養(yǎng)，更為腫瘤細(xì)胞的浸潤(rùn)、轉(zhuǎn)移提供了可靠的通路。有研究證實(shí)腫瘤微血管越多，腫瘤細(xì)胞進(jìn)入血液循環(huán)的機(jī)會(huì)就越大[14]。本研究發(fā)現(xiàn)，正常胃黏膜、萎縮性胃炎、腸上皮化生、上皮內(nèi)瘤變及胃癌組織MVD值分別為11.15±2.36、14.68±3.78、22.18±4.12、39.38±10.43、57.54±12.57，與正常胃黏膜相比，萎縮性胃炎、腸上皮化生差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，提示病變組織沒有發(fā)現(xiàn)明顯增殖的新生血管，處在胃癌前病變的最初始階段。與正常胃黏膜相比，上皮內(nèi)瘤變、胃癌組織差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，提示新生血管數(shù)量明顯較多，與胃癌的發(fā)生、發(fā)展具有一定的關(guān)系。目前研究發(fā)現(xiàn)，有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的胃癌MVD值較無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的胃癌高，中-低分化型胃癌MVD值較高分化型胃癌高，說明腫瘤微血管的形成可促進(jìn)腫瘤的侵襲能力，有助于腫瘤的轉(zhuǎn)移及浸潤(rùn)。通過對(duì)胃癌組織CD34表達(dá)的監(jiān)測(cè)，可初步判斷胃癌的惡性程度。這一研究結(jié)果與蘇亦斌等[15]在結(jié)直腸癌中的研究發(fā)現(xiàn)相一致。由此可見，腫瘤微血管的形成為腫瘤細(xì)胞提供了充足的營(yíng)養(yǎng)，可促進(jìn)腫瘤細(xì)胞的增殖、分化及浸潤(rùn)，但具體機(jī)制及參與的相關(guān)因子尚待進(jìn)一步研究。

綜上所述，本研究顯示胃癌前病變及胃癌組織中CD34的表達(dá)與患者的年齡、性別無(wú)關(guān)，與胃癌的分化類型及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有關(guān)。目前抗血管生成療法作為腫瘤治療的新方法，通過對(duì)胃癌發(fā)生發(fā)展進(jìn)程中微血管的定量研究，為胃癌及其他惡性腫瘤抗血管生成療法有一定參考價(jià)值。

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(2015-01-11收稿2015-03-05修回)

(責(zé)任編輯梁秋野)