李海聰，雷　建，劉倩雯，譚　軍

(1.廣州市番禺區(qū)第二人民醫(yī)院外科，廣州 511430； 2.廣州醫(yī)科大學(xué)附屬第一醫(yī)院外科，廣州 510120)

胸苷磷酸化酶在腫瘤細(xì)胞中的表達(dá)及與卡培他濱治療效果的關(guān)系

李海聰1，雷建2，劉倩雯1，譚軍1

(1.廣州市番禺區(qū)第二人民醫(yī)院外科，廣州 511430； 2.廣州醫(yī)科大學(xué)附屬第一醫(yī)院外科，廣州 510120)

摘要：目的探討胸苷磷酸化酶(thymidine phosphorylase,TP)在腫瘤細(xì)胞中的表達(dá)及與卡培他濱治療效果的關(guān)系。方法選取280例腫瘤患者，其中胃癌94例、結(jié)直腸癌101例、乳腺癌85例。檢測不同類型癌癥的癌組織與其對應(yīng)癌旁正常組織的TP表達(dá)，對不同癌癥患者均給予卡培他濱治療，比較各組治療效果，并觀察TP表達(dá)與卡培他濱治療效果的關(guān)系。結(jié)果胃癌、結(jié)直腸癌、乳腺癌中TP表達(dá)陽性率分別為64.89%、69.31%、81.18%，均明顯高于癌旁正常組織(均P<0.01)；乳腺癌TP表達(dá)陽性率明顯高于胃癌與結(jié)直腸癌(均P<0.01)；胃癌、結(jié)直腸癌、乳腺癌采用卡培他濱治療后療效比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，其中乳腺癌的疾病控制率明顯高于胃癌(P<0.05)；采用卡培他濱治療后TP陽性患者疾病控制率明顯高于TP陰性患者(90.59%比37.18%，P<0.01)。結(jié)論與正常組織比較，TP在癌組織中呈過度表達(dá)；TP陽性表達(dá)的癌癥患者采用卡培他濱治療效果更為確切，故對于TP表達(dá)陽性的患者可選擇使用卡培他濱進(jìn)行治療。

關(guān)鍵詞：胸苷磷酸化酶； 腫瘤細(xì)胞； 卡培他濱

胸苷磷酸化酶(thymidine phosphorylase,TP)為嘧啶核苷合成及分解過程中所需的重要酶，在多種實(shí)體腫瘤細(xì)胞中呈過度表達(dá)。TP是促腫瘤微血管生長因子之一，可誘導(dǎo)血管生成，與腫瘤的生長和轉(zhuǎn)移密切相關(guān)。相反地，TP又可通過催化5-氟尿嘧啶(5-FU)前體藥物，起到化療抗癌的作用[1]。卡培他濱是一種新型口服氟尿嘧啶類抗腫瘤藥，以氨基甲酸酯的形式存在?？ㄅ嗨麨I本身無細(xì)胞毒性，氨基甲酸酯可促使其以原藥形式被迅速吸收，再經(jīng)酶的催化代謝為氟尿嘧啶，起到抗腫瘤的作用?？ㄅ嗨麨I代謝過程中TP是腫瘤組織內(nèi)氟尿嘧啶選擇性生成的關(guān)鍵酶，卡培他濱之所以在腫瘤組織內(nèi)優(yōu)先轉(zhuǎn)化成氟尿嘧啶，是因?yàn)門P在腫瘤組織中比在正常組織中具有更高的活性[2]。本研究通過檢測胃癌、結(jié)直腸癌、乳腺癌腫瘤細(xì)胞中TP的表達(dá)，探討TP表達(dá)及與卡培他濱療效的相關(guān)性。

1資料與方法

1.1一般資料

選取廣州市番禺區(qū)第二人民醫(yī)院及廣州醫(yī)科大學(xué)附屬第一醫(yī)院2011年6月至2014年5月收治的280例惡性腫瘤患者，男95例，女185例，年齡21～86歲，平均(52.7±4.8)歲。其中胃癌94例，結(jié)直腸癌101例，乳腺癌85例。同時(shí)收集所有患者手術(shù)切除癌組織標(biāo)本以及周圍正常組織標(biāo)本。全部腫瘤與正常組織經(jīng)組織病理學(xué)檢查證實(shí)。

1.2治療方法

所有患者均在基礎(chǔ)化療基礎(chǔ)上加用卡培他濱治療，其中胃癌采取奧沙利鉑130 mg·m-2靜脈滴注，第1天，亞葉酸鈣200 mg·m-2，第1—5天，卡培他濱1 250 mg·m-2口服，2次·d-1，第1—14天，每3周重復(fù)，4周期為1個(gè)療程；結(jié)直腸癌采取奧沙利鉑130 mg·m-2靜脈滴注，第1天，卡培他濱1 250 mg·m-2口服，2次·d-1，第1—14天，每3周重復(fù)，4周期為1個(gè)療程；乳腺癌采取多西他賽75 mg·m-2靜脈滴注，第1天，卡培他濱1 250 mg·m-2口服，2次·d-1，第1—14天，每3周重復(fù)，4周期為1個(gè)療程。療程結(jié)束后1個(gè)月進(jìn)行療效評定。

1.3療效評定標(biāo)準(zhǔn)

參照WHO有關(guān)實(shí)體瘤藥物治療的療效標(biāo)準(zhǔn)，分為完全緩解(CR)、部分緩解(PR)、無變化(NC)、疾病進(jìn)展(PD)。其中CR+PR為有效，CR+PR+NC為疾病控制。

1.4TP檢測方法

采取親和組織化學(xué)技術(shù)：酶標(biāo)鏈親和素-生物素技術(shù)(S-P法)。使用雙抗體夾心酶聯(lián)免疫吸附法(ELISA)檢測血清TP濃度。鼠抗人TP/PD-ECGF單克隆抗體購自美國LABVISION公司，PS超敏試劑盒購自福州邁新生物技術(shù)開發(fā)有限公司。染色步驟按試劑盒說明書進(jìn)行。

1.5結(jié)果判定標(biāo)準(zhǔn)

胞質(zhì)和(或)包膜內(nèi)呈棕黃色染色即為陽性。將切片中陽性細(xì)胞占比評分與陽性顯色細(xì)胞染色程度評分結(jié)合起來，以二者乘積作為判定結(jié)果。0～2分為陰性(-)，3～4分為弱陽性(+)，5～8分為中度陽性()，9～12分為強(qiáng)陽性()。≥3分為陽性，<3分為陰性。

1.6統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

2結(jié)果

2.1TP表達(dá)

胃癌、結(jié)直腸癌、乳腺癌腫瘤細(xì)胞中TP表達(dá)陽性率分別為64.89%、69.31%、81.18%，均明顯高于癌旁正常組織(均P<0.01)；乳腺癌的TP表達(dá)陽性率明顯高于胃癌與結(jié)直腸癌(P<0.01)；正常胃組織與乳腺組織TP表達(dá)陽性率分別為14.29%、11.54%，正常結(jié)直腸組織則無表達(dá)。見表1。

2.2療效

胃癌、結(jié)直腸癌、乳腺癌使用卡培他濱治療后療效比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，其中乳腺癌的疾病控制率明顯高于胃癌(P<0.05)，見表2。

2.3TP表達(dá)與卡培他濱療效的關(guān)系

采用卡培他濱治療后TP陽性患者疾病控制率為90.59%，TP陰性患者疾病控制率為37.18%，TP陽性患者疾病控制率明顯高于TP陰性患者(P<0.01)，見表3。

表1　不同癌組織與其相應(yīng)正常組織TP表達(dá)的比較

表2　不同癌癥卡培他濱治療效果比較　　　　例

*P<0.05與胃癌比較。

表3　直腸癌患者TP表達(dá)與卡培他濱療效之間的關(guān)系

*P<0.01與TP陰性相比。

3討論

癌細(xì)胞的增殖、轉(zhuǎn)移、抗凋亡等惡性生物學(xué)行為和細(xì)胞生長因子的活性作用密不可分。TP是近年來發(fā)現(xiàn)的一種細(xì)胞生長因子，由2條多肽鏈構(gòu)成的二聚體，其不僅在嘧啶核苷代謝中起到重要作用，還能促進(jìn)血管生成[3]。TP在體內(nèi)分布廣泛，早在1990年Yoshimura等[4]就從人胎盤內(nèi)提取出人TP，并以其制出抗體檢測TP在人體各組織中的表達(dá)，發(fā)現(xiàn)TP在癌組織中的TP表達(dá)顯著高于癌旁正常組織。本研究發(fā)現(xiàn)，胃癌、結(jié)直腸癌、乳腺癌癌組織中TP表達(dá)陽性率分別為64.89%、69.31%、81.18%，均明顯高于癌旁正常組織，與Yoshimura等[4]的研究一致。

TP除了能誘導(dǎo)腫瘤血管生成，在腫瘤的治療上同樣能起著重要作用。TP可通過催化5-FU前體藥物的活性，起到抗腫瘤作用[5]。故TP提供了治療腫瘤的2個(gè)可能的作用靶點(diǎn)：其一是使用5-FU前體藥物(如卡培他濱)，通過提高腫瘤細(xì)胞組織內(nèi)TP的表達(dá)，起到活化5-FU前體藥物、增加癌細(xì)胞組織中藥物濃度的作用；其二是通過抑制TP使癌細(xì)胞血管生成活性降低，經(jīng)典的TP抑制劑主要為6-氨基-5-嗅尿嘧啶。

卡培他濱是5-FU前體藥物的一種，是近年來用于臨床的細(xì)胞毒類化療新藥，口服后可迅速吸收，并以完整藥物進(jìn)入肝臟。TP催化卡培他濱轉(zhuǎn)化成5-FU的過程一般需經(jīng)歷3個(gè)序貫反應(yīng)步驟?？ㄅ嗨麨I經(jīng)腸道吸收后先經(jīng)肝臟轉(zhuǎn)化為5′-脫氧-5-氟胞嘧啶，再被肝臟及腫瘤組織轉(zhuǎn)化為5-氟脫氧尿苷(5′-DFUR)，5′-DFUR隨著血液進(jìn)入到腫瘤細(xì)胞中經(jīng)TP轉(zhuǎn)化為5-FU，進(jìn)而阻斷腫瘤細(xì)胞的DNA合成起到靶向抗腫瘤作用[2]。由于卡培他濱最大的特點(diǎn)為“選擇性腫瘤內(nèi)活化”，腫瘤組織5-FU濃度高，正常組織5-FU濃度低，故能最大限度地減少對正常組織的損害。由于TP在體內(nèi)分布差異較大，故在TP表達(dá)水平高的腫瘤中應(yīng)用卡培他濱療效更為確切，檢測腫瘤組織中的TP表達(dá)可作為提示化療有效性的一個(gè)預(yù)測因子。本研究中，乳腺癌TP表達(dá)陽性率為81.18%，明顯高于胃癌和結(jié)直腸癌，在對這3類癌癥同劑量使用卡培他濱治療后，乳腺癌的疾病控制率明顯高于胃癌(P<0.05)。癌組織內(nèi)TP的過度表達(dá)盡管是不良預(yù)后因素，但這也意味著在TP的作用下，卡培他濱在腫瘤組織中更易于被選擇性激活，使腫瘤組織中5-FU濃度增加，進(jìn)而增強(qiáng)抗腫瘤作用。

總之，TP的檢測有利于了解腫瘤生物學(xué)特性，為腫瘤預(yù)后判斷與治療提供幫助。本研究中，采用卡培他濱治療后TP陽性患者疾病控制率要明顯高于TP陰性患者，故可對腫瘤患者檢測TP，若TP為陽性者，可考慮選擇卡培他濱治療。

參考文獻(xiàn)：

[1]盧振霞，邢洪存，郭芳芳.胸苷磷酸化酶在大腸癌組織中的表達(dá)及其臨床意義[J].中國實(shí)驗(yàn)診斷學(xué)，2009，13(5)：625-627.

[2]楊冬陽，黎瑩，劉建化，等.晚期結(jié)直腸癌聯(lián)合化療后卡培他濱維持治療的臨床評價(jià)[J].南方醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào)，2013，33(12)：1815-1818,1830.

[3]肖永勝，周儉，樊嘉，等.干擾素對肝癌細(xì)胞胸苷磷酸化酶表達(dá)和凋亡的雙重影響[J].世界華人消化雜志，2009，17(35)：3630-3634.

[4]Yoshimura A,Kuwazuru Y,Furukawa T,et al.Purification and tissue distribution of human thymidine phosphorylase;high expression in lymphocytes,reticulocytes and tumors[J].Biochim Biophys Acta,1990,1034(1):107-113.

[5]高慶，劉劍，張繼民.結(jié)直腸癌組織胸苷磷酸化酶表達(dá)臨床意義研究的現(xiàn)狀[J].中華腫瘤防治雜志，2012，19(1)：76-80.

(責(zé)任編輯：鐘榮梅)

收稿日期：2015-01-28

基金項(xiàng)目：廣州市番禺區(qū)科技計(jì)劃項(xiàng)目(2013-Z03-34)

作者簡介：李海聰(1978—)，男，本科，主治醫(yī)師，主要從事普通外科學(xué)的研究。

中圖分類號：R73.3

文獻(xiàn)標(biāo)志碼：A

文章編號：1009-8194(2015)07-0034-03

DOI:10.13764/j.cnki.lcsy.2015.07.012

Expression of Thymidine Phosphorylase in Tumor Cells
and Its Correlation with Curative Efficacy of Capecitabine

LI Hai-cong1，LEI Jian2，LIU Qian-wen1，TAN Jun1

(1.DepartmentofSurgery,theSecondPeople’sHospitalofPanyuDistrictof

Guangzhou,Guangzhou511430,China； 2.DepartmentofSurgery,theAffiliated

FirstHospitalofGuangzhouMedicalUniversity，Guangzhou510120,China)

ABSTRACT：ObjectiveTo investigate the expression of thymidine phosphorylase(TP) in tumor cells and its correlation with curative efficacy of capecitabine.MethodsThe expression of TP in cancer tissue and adjacent normal tissue was detected in 94 patients with gastric cancer,101 patients with colorectal cancer and 85 patients with breast cancer.All the 280 patients were treated with capecitabine.The curative efficacy was compared among different groups.In addition,the relationship between TP expression and capecitabine efficacy was observed.ResultsCompared with adjacent normal tissue,the positive rate of TP expression significantly increased in gastric cancer(64.89%),colorectal cancer(69.31%) and breast cancer(81.18%)(P<0.01).Compared with colorectal cancer or gastric cancer,the positive rate of TP expression significantly increased in breast cancer(P<0.01).There were significant differences in the curative efficacy of capecitabine among gastric cancer,colorectal cancer and breast cancer(P<0.05).Compared with patients with gastric cancer,the disease control rate significantly increased in patients with breast cancer(P<0.05).Compared with TP- negative patients,the disease control rate significantly increased in TP-positive patients after treatment with capecitabine(90.59%比37.18%，P<0.01).ConclusionCompared with normal tissue,TP expression increases in cancer tissue.The curative efficacy of capecitabine in TP-positive patients is more precise than that in TP- negative patients.Therefore,capecitabine treatment can be used in TP-positive patients.

KEY WORDS：thymidine phosphorylase; tumor cells; capecitabine