多耐藥基因在乳腺癌組織中的表達(dá)及價(jià)值*

林慧梅1，安玉芳2，張凡3

(1.河北省崇禮縣婦幼保健院，河北崇禮076350

2.河北省萬全縣醫(yī)院，河北萬全076250

3.河北北方學(xué)院附屬第一醫(yī)院病理科，河北張家口075000)

摘要：目的：觀察多藥耐藥基因(MDR1)及其編碼的糖蛋白(P-gp)在乳腺癌組織中的表達(dá)及臨床價(jià)值。方法：選取病歷資料完整的乳腺癌根治術(shù)乳腺組織標(biāo)本84份，使用S-P法免疫組化法染色檢測(cè)P-gp、谷光甘肽S轉(zhuǎn)移酶(GST-π)及熱休克蛋白(HSP70)、p53的表達(dá)情況，采用Kendall's taub相關(guān)性分析P-gp、p53、GST-π、及HSP70、p53之間協(xié)同表達(dá)關(guān)系。結(jié)果：P-gp表達(dá)陽性率為50%(42/84)，HSP70表達(dá)陽性率為61.9%(52/84)，p53表達(dá)陽性率為52.4%(44/84)，GST-π表達(dá)陽性率為40.5%(34/84)；相關(guān)性分析顯示，GST-π與P-gp無協(xié)同表達(dá)(r=0.146，P>0.05)，HSP70與p53有協(xié)同表達(dá)(r=0.626，P<0.05)，p53與P-gp有協(xié)同表達(dá)(r=0.763，P<0.05)；P-gp表達(dá)對(duì)對(duì)乳腺癌10年生存率有明顯影響。COX模型乳腺癌預(yù)后多因素分析表明，年齡因素、GST-π表達(dá)均不具有獨(dú)立的預(yù)后意義；臨床分期、組織學(xué)分級(jí)、P-gp表達(dá)、p53表達(dá)、HSP70表達(dá)均具有獨(dú)立的預(yù)后意義。結(jié)論：同時(shí)檢測(cè)MDR1、HSP7、p53和GST-π的表達(dá)，可為乳腺癌臨床耐藥性的判斷提供更為全面的信息。

關(guān)鍵詞：乳腺癌；耐藥；MDR1；HSP70；GST-π；p53

文章編號(hào)：1006-6233(2015)10-1588-03

基金項(xiàng)目：*國家十一五科技支撐項(xiàng)目，(編號(hào)：2008BA157B00)

文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：B

The Expression and Clinical Significance of Multidrug

Resistance Gene in Breast Cancer Tissues

LINHuimei,etal

(The Maternal and Child Health Hospital of Chongli County, Hebei Chongli 076350, China)

Abstract:Objective: To observe the expression of multidrug resistance gene (MDR1) and its encoding glycoprotein (P-gp) and clinical value in breast cancer. Methods:Selected the complete medical records of breast cancer radical mastectomy of breast tissue specimens of 84 copies, using S-P method of immunohistochemical staining to detect P-gp, GST-π and heat shock protein(HSP70), the expression of p53, using the Kendall's Taub correlation analysis between P-gp, p53,GST-π, and HSP70, a PI the relationship between the expression of p53. Result: The positive rate of P-gp expression was 50%(42/84), the positive rate of HSP70 expression was 61.9%(52/84), the positive rate of p53 expression was 52.4% (44/84), GST-class expression positive rate was 40.5%(34/84); correlation analysis showed that GST-π and P-gp, PI no synergistic expression (r=0.146, P>0.05), HSP70 and p53 have synergistic expression (r=0.626, P<0.05), p53 and P-gp have synergistic expression(r=0.763, P<0.05); the expression of P-gp of breast cancer 10 years survival rate has obvious effect. Multivariate prognostic models of human breast cancer COX analysis showed that the factors of age, GST-π, PI expression do not have independent prognostic significance; clinical staging, tissue have independent prognostic significance grading, P-gp expression, p53 expression, HSP70 expression. Conclusion: At the same time, the expression of MDR1, HSP7, p53 and GST-π, for clinical drug resistance of breast cancer judgment to provide more comprehensive information.

Key words:Breast cancer;Drug resistance;MDR1；HSP70；GST-π；p53

乳腺癌為臨床常見惡性腫瘤，早期發(fā)病即可出現(xiàn)全身轉(zhuǎn)移，嚴(yán)重威脅女性生命健康[1]。目前，臨床的治療方案大多是圍繞手術(shù)而進(jìn)行放、化療治療[2]?；熢谌橄侔┲委熤姓贾匾匚唬[瘤細(xì)胞對(duì)治療藥物產(chǎn)生耐藥性，是影響治療效果及患者生存率的重要原因[3]。有研究發(fā)現(xiàn)，MDR1及P-gp與乳腺癌耐藥產(chǎn)生關(guān)系密切[4]。本研究為探討MDR1及P-gp在乳腺癌組織中的表達(dá)及耐藥機(jī)制，現(xiàn)將結(jié)果報(bào)道如下。

1資料與方法

1.1一般資料:選取北方學(xué)院附屬第一醫(yī)院收治病歷資料完整的乳腺癌根治術(shù)后乳腺組織標(biāo)本84份，入選標(biāo)本均來源自女性患者，并完成6個(gè)周期CAF方案化療，年齡28～75歲，平均年齡47.8±2.3歲。所選標(biāo)本均經(jīng)病理學(xué)檢查明確診斷，其中浸潤性小葉癌6例，浸潤性導(dǎo)管癌66例，粘液癌8例，腺癌4例；臨床分期Ⅰ期10例，Ⅱ期56例，Ⅲ期14例，Ⅳ期4例；組織學(xué)分級(jí)Ⅰ級(jí)10例，Ⅱ級(jí)48例，Ⅲ級(jí)26例。

1.2檢測(cè)方法:采用免疫組化S-P法進(jìn)行P-gp、GST-π、HSP70、p53檢測(cè)，采用Kendall's taub相關(guān)性分析P-gp、p53、GST-π、HSP70、p53之間協(xié)同表達(dá)關(guān)系，抗GST-π單克隆抗體、抗HSP70多克隆抗體、抗P-gp單克隆抗體、抗p53單克隆抗體均購自美國ZYMED公司。入選標(biāo)本常規(guī)固定、包埋、切片，分別行HE及S-P免疫組織化學(xué)染色，并選取已知陽性切片標(biāo)本作為陽性參照。

1.3結(jié)果判定:P-gp陽性表達(dá)主要分布于胞漿與胞膜，呈棕黃色顆粒；GST-π陽性表達(dá)分布于胞漿，呈棕黃色顆粒，可伴見少數(shù)細(xì)胞核染色；p53陽性呈棕黃色顆粒，主要分布于細(xì)胞核；HSP70陽性細(xì)胞呈棕黃色顆粒，主要分布于細(xì)胞核或細(xì)胞漿。判斷標(biāo)準(zhǔn)：陰性：未檢出陽性細(xì)胞；陽性：陽性細(xì)胞計(jì)數(shù)>10%；+：陽性細(xì)胞計(jì)數(shù)>25%；++：陽性細(xì)胞計(jì)數(shù)為25～50%；+++：陽性細(xì)胞計(jì)數(shù)>50%。

1.4統(tǒng)計(jì)學(xué)方法:所得數(shù)據(jù)錄入統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件SPSS10.0處理，GST-π、P-gp、HSP70、p53之間協(xié)同表達(dá)關(guān)系采用Kendall's taub進(jìn)行相關(guān)性分析，耐藥相關(guān)標(biāo)志表達(dá)對(duì)總生存期影響采用多變量COX回歸分析，P<0.05為有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2結(jié)果

2.1基因表達(dá)情況及P-gp不同表達(dá)患者10年生存率比較:本組標(biāo)本中P-gp表達(dá)陽性率為50.0%(21/42)；HSP70表達(dá)陽性率為61.9%(26/42)；p53表達(dá)陽性率為52.4%(22/42)，GST-π表達(dá)陽性率為40.5%(17/42)。COX模型生存分析顯示P-gp具有預(yù)后意義，P-gp表達(dá)陽性患者生存期低于P-gp表達(dá)陰性患者(P<0.01)；相關(guān)性分析發(fā)現(xiàn)P-gp表達(dá)與年齡無關(guān)(r=0.061，P>0.05)，與組織分級(jí)無關(guān)(r=0.184，P>0.05)，與臨床分期無關(guān)(r=0.258，P>0.05)，與ER有關(guān)(r=0.447，P<0.05)，與PR無關(guān)(r=0.061，P>0.05)；HSP70表達(dá)與年齡無關(guān)(r=0.122，P>0.05)，與組織分級(jí)無關(guān)(r=0.221，P>0.05)，與臨床分期有關(guān)(r=0.3，P<0.05)；p53表達(dá)與年齡無關(guān)(r=0.087，P>0.05)，組織分級(jí)無關(guān)(r=0.229，P>0.05)，與臨床分期無關(guān)(r=0.171，P>0.05)；GST-π表達(dá)與年齡無關(guān)(r=0.122，P>0.05)，與組織分級(jí)無關(guān)(r=0.020，P>0.05)，表達(dá)與臨床分期無關(guān)(r=0.169，P>0.05)。P-gp陽性患者10年生存率為38.1%，P-gp陰性患者為85.7%，P-gp陽性患者10年生存率顯著高于P-gp陰性患者(P<0.01)，結(jié)果見表1。

表1　P-gp不同表達(dá)患者10年生存率比較(n)

注：*P<0.01

2.2相關(guān)性分析:本組標(biāo)本P-gp、p53、GST-π、HSP70免疫組織化學(xué)表達(dá)結(jié)果用Kendall's taub法相關(guān)性分析顯示，GST-π與P-gp無協(xié)同表達(dá)(r=0.146，P>0.05)；HSP70與p53有協(xié)同表達(dá)(r=0.626，P<0.05)，p53與P-gp有協(xié)同表達(dá)(r=0.763， P<0.05)。

2.3多變量COX回歸分析:年齡、GST-π、PR均不具有獨(dú)立的預(yù)后意義(P>0.05)。臨床分期、組織分級(jí)、P-gp(P<0.01)、p53陽性表達(dá)、HSP70陽性表達(dá)均具有獨(dú)立的預(yù)后意義(P<0.05)。

3討論

有研究表明[5]，細(xì)胞的耐受程度與藥物在細(xì)胞內(nèi)蓄積水平呈負(fù)相關(guān)。細(xì)胞在獲得MDR后短時(shí)間即可將治療藥物泵出胞外；而藥敏細(xì)胞外輸藥物的能力相對(duì)較弱，故能提高藥物在胞內(nèi)停留時(shí)間[6]。MDR表型涉及的親脂類的化療藥物，主要來自抗腫瘤抗生素及天然的植物堿類抗腫瘤藥物，如5-氟脲嘧啶(5-Fu)、柔紅霉素、絲裂霉素、長春新堿、阿霉素等[7]。然而，以往研究結(jié)果多來源自惡性細(xì)胞系，而非腫瘤標(biāo)本，與臨床實(shí)際情況有一定差距，難以為臨床提供指導(dǎo)性作用。

本研究中患者選用CAF為化療方案，該方案所使用的藥物為阿霉素即為P-gp耐藥藥物。研究結(jié)果顯示，P-gp陽性患者10年生存率顯著低于P-gp陰性患者(P<0.05)，提示P-gp耐藥是影響化療效果及患者生存率的主要原因，因此，P-gp表達(dá)又可作為乳腺癌的預(yù)后指標(biāo)。另有研究認(rèn)為[8]，乳腺癌耐藥為多基因、多步驟耐藥，原發(fā)耐藥的機(jī)理是異常復(fù)雜，單機(jī)制和多機(jī)制可以同時(shí)存在，涉及p53、HSP70及GST-π等。有學(xué)者認(rèn)為，在乳腺癌耐藥產(chǎn)生的早期階段GST-π所起作用更為重要，GST-π非特異性的結(jié)合作用可協(xié)助藥物通過P-gp形成的藥物排流泵。本研究結(jié)果顯示，GST-π與P-gp無協(xié)同表達(dá)，提示GST-π和P-gp是否參與了腫瘤的形成還值得進(jìn)一步研究。HSP70在腫瘤發(fā)生發(fā)展中充當(dāng)分子伴侶，可防止異常蛋白積聚，維持細(xì)胞的自穩(wěn)態(tài)，使細(xì)胞維持增生狀態(tài)免于凋亡，參與了腫瘤細(xì)胞的增殖、分化及轉(zhuǎn)移，在腫瘤的發(fā)生發(fā)展過程中起著重要的作用。本組實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，HSP70與p53有協(xié)同表達(dá)，與文獻(xiàn)報(bào)道相符。本研究結(jié)果顯示，p53與P-gp有協(xié)同表達(dá)。其原因與p53基因可明顯激活MDR1基因的促進(jìn)因子有關(guān)。預(yù)后因素分析中發(fā)現(xiàn)，臨床分期、組織分級(jí)，P-gp、p53、HSP70陽性表達(dá)均具有獨(dú)立的預(yù)后意義，提示腫瘤大小、病理分級(jí)、臨床分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移等傳統(tǒng)預(yù)后指標(biāo)應(yīng)與分子指標(biāo)相結(jié)合，可提供更多的預(yù)后信息。

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