阿托伐他汀對老年自身免疫性腦脊髓膜炎大鼠腦白質(zhì)的保護(hù)作用

楊挺嘉楚洪波1于慧玲2殷旭華2

(內(nèi)蒙古醫(yī)科大學(xué)附屬醫(yī)院神經(jīng)內(nèi)科,內(nèi)蒙古呼和浩特010050)

摘要〔〕目的探討阿托伐他汀對老年自身免疫性腦脊髓膜炎(EAE)大鼠腦白質(zhì)髓鞘堿性蛋白(MBP)和少突膠質(zhì)細(xì)胞轉(zhuǎn)錄因子(OLIG)1蛋白表達(dá)的影響。方法取老年Wistar雄性大鼠80只，隨機(jī)分為對照組、模型組、阿托伐他汀大劑量組(8 mg/kg組)和阿托伐他汀小劑量組(2 mg/kg組)，每組20只。采用新鮮豚鼠50%全脊髓勻漿液和完全弗氏佐劑(CFA)免疫制備EAE模型，免疫后第2天開始，模型組給予生理鹽水灌胃，阿托伐他汀組給予阿托伐他汀不同劑量灌胃，持續(xù)灌胃21 d，于第22天處死，取腦干和脊髓待測。采用實(shí)時(shí)熒光定量和免疫組織化學(xué)染色檢測各組腦干、脊髓中MBP和OLIG1的mRNA水平和蛋白陽性表達(dá)強(qiáng)度。結(jié)果與對照組比較，模型組MBP mRNA水平和蛋白陽性表達(dá)強(qiáng)度明顯升高、OLIG1明顯降低(P<0.01)；阿托伐他汀小劑量組MBP mRNA水平和蛋白陽性表達(dá)強(qiáng)度升高、OLIG1降低(P<0.01)；阿托伐他汀大劑量組MBP mRNA水平和蛋白陽性表達(dá)強(qiáng)度略升高、OLIG1略降低，無顯著差異(P>0.05)，模型組、阿托伐他汀大、小劑量組差異顯著(P<0.01)。結(jié)論阿托伐他汀能夠通過下調(diào)MBP、上調(diào)OLIG1 mRNA水平和蛋白陽性表達(dá)強(qiáng)度，對EAE大鼠的腦白質(zhì)髓鞘損傷具有保護(hù)作用，且大劑量作用優(yōu)于小劑量。

關(guān)鍵詞〔〕阿托伐他??；自身免疫性腦脊髓膜炎；髓鞘堿性蛋白；少突膠質(zhì)細(xì)胞轉(zhuǎn)錄因子1

中圖分類號〔〕R392.11〔文獻(xiàn)標(biāo)識碼〕A〔

基金項(xiàng)目：內(nèi)蒙古自治區(qū)自然科學(xué)基金(No.2011MS1154)

通訊作者：殷旭華(1966-)，女，碩士，主任醫(yī)師，主要從事神經(jīng)免疫學(xué)研究。

1長春大學(xué)特教學(xué)院2內(nèi)蒙古醫(yī)科大學(xué)病理教研室

第一作者：楊挺嘉(1991-)，女，在讀碩士，主要從事神經(jīng)免疫學(xué)研究。

自身免疫性腦脊髓炎(EAE) 其主要病理特點(diǎn)是中樞神經(jīng)系統(tǒng)白質(zhì)炎性脫髓鞘，其病因及發(fā)病機(jī)制迄今不明〔1〕。髓鞘堿性蛋白(MBP)和少突膠質(zhì)細(xì)胞轉(zhuǎn)錄因子(OLIG)1是調(diào)控髓鞘的兩個(gè)重要蛋白〔2〕。本實(shí)驗(yàn)旨在探究阿托伐他汀對EAE大鼠腦白質(zhì)髓鞘損傷的保護(hù)作用。

1資料與方法

1.1實(shí)驗(yàn)動(dòng)物及分組吉林大學(xué)白求恩醫(yī)學(xué)部實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心Wistar雄性大鼠80只，鼠齡>18 w，平均體重(500±30)g，豚鼠10只，雌雄不限，平均體重(410±20)g，隨機(jī)分為4組(n=20)：對照組、模型組、阿托伐他汀大劑量組(8 mg/kg組)和阿托伐他汀小劑量組(2 mg/kg組)。

1.2模型制備〔3〕及實(shí)驗(yàn)試劑除對照組，其他3組均采用新鮮豚鼠全脊髓和完全弗氏佐劑(CFA)免疫制備EAE模型，即新鮮豚鼠全脊髓與生理鹽水制成50%勻漿液，加上等體積的CFA，按0.5 ml/只注射于大鼠四肢足墊皮下。阿托伐他汀(大連輝瑞制藥有限公司, 生產(chǎn)批號為55837001)；CFA購于Sigma公司；MBP和OLIG1兔抗大鼠一抗及實(shí)時(shí)熒光定量試劑購于Santa Cruz和北京博奧森生物有限公司；DAB和SP9710試劑盒購于福州邁新生物有限公司。

1.3給藥劑量及給藥方式免疫后第2天開始，模型組給予生理鹽水灌胃，阿托伐他汀組給予阿托伐他汀不同劑量灌胃(8 mg/kg組和2 mg/kg組)，持續(xù)治療21 d，于第22天處死，取腦干和脊髓待測。

1.4各組腦干、脊髓中MBP和OLIG1蛋白陽性表達(dá)強(qiáng)度的檢測10%的水合氯醛腹腔麻醉大鼠，取部分大鼠腦干、脊髓放入4%多聚甲醛液中固定、脫水、透明、浸蠟、包埋，然后切成3 μm的切片，進(jìn)行免疫組織化學(xué)染色，染色結(jié)果通過Motic Images Advanced 3.2圖像分析軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，測定光密度值(OD值)；光密度值越大陽性表達(dá)越高，反之則越低。

1.5各組腦干、脊髓中MBP和OLIG1 mRNA水平的檢測取部分大鼠腦干、脊髓凍存待測，采用實(shí)時(shí)熒光定量試劑盒檢測，操作嚴(yán)格按照試劑盒步驟進(jìn)行。

1.6統(tǒng)計(jì)學(xué)方法應(yīng)用SPSS16.0統(tǒng)計(jì)學(xué)分析軟件進(jìn)行t檢驗(yàn)。

2結(jié)果

與對照組比較，模型組MBP蛋白、mRNA表達(dá)強(qiáng)度明顯升高、OLIG1蛋白和mRNA明顯降低(P<0.01)；阿托伐他汀小劑量組MBP蛋白和mRNA表達(dá)強(qiáng)度升高、OLIG1蛋白和mRNA降低(P<0.01)；阿托伐他汀大劑量組MBP蛋白和mRNA表達(dá)強(qiáng)度略升高、OLIG1蛋白和mRNA略降低無顯著差異(P>0.05)，模型組、阿托伐他汀大、小劑量組差異顯著(P<0.01)，見表1。

表1　各組腦干和脊髓中MBP和OLIG1蛋白和mRNA表達(dá)比較

與對照組比較:1)P<0.01；與模型組比較:2)P<0.01；與阿托伐他汀小劑量組比較:3)P<0.01

3討論

中樞神經(jīng)系統(tǒng)腦白質(zhì)由軸突、少突膠質(zhì)細(xì)胞及由少突膠質(zhì)細(xì)胞形成的髓鞘組成〔4〕。MBP是髓鞘的主要組成成分之一，是功能性的髓鞘結(jié)構(gòu)蛋白，當(dāng)髓鞘損傷時(shí)，MBP蛋白釋放表達(dá)增高〔2〕。中樞神經(jīng)系統(tǒng)的傳導(dǎo)功能，需要神經(jīng)纖維髓鞘化才能正常發(fā)揮；而髓鞘形成的過程由OLIG1調(diào)控〔5～7〕，本實(shí)驗(yàn)從形態(tài)學(xué)水平和分子生物學(xué)水平上反映阿托伐他汀能夠下調(diào)MBP、上調(diào)OLIG1 mRNA水平和蛋白陽性表達(dá)強(qiáng)度，對EAE大鼠的腦白質(zhì)炎性脫髓鞘具有保護(hù)作用，且大劑量作用優(yōu)于小劑量，其作用機(jī)制有待于進(jìn)一步探討。

4參考文獻(xiàn)

1金世杰,徐俊,黃榕,等.口服耐受防治大鼠實(shí)驗(yàn)性自身免疫性腦脊髓膜炎的實(shí)驗(yàn)研究〔J〕.嶺南急診醫(yī)學(xué)雜志，2009；14(2)：84-6.

2Kessaris N, Pringle N, Richardson WD.Specification of CNS gliafrom neural stem cells in the embryonic neuroepithelium〔J〕.Philos Trans R Soc Lond B Biol Sci,2008；363(1489)：71-85.

3徐玉, 劉瑞春, 王穎, 等.Wistar大鼠實(shí)驗(yàn)性自身免疫性腦脊髓炎模型的建立〔J〕.腦與神經(jīng)疾病雜志,2007；15(6)：415-7.

4Cao QL, Zhang YP, Howard RM,etal. Pluripotent stem cell sengrafted into the normal or lesioned adult rat spinal cord are restricted to a glial lineage〔J〕. Exp Neurol,2001；167(1):48-58.

5趙紅, 高曉玉, 張擁波, 等.Olig家族調(diào)控腦白質(zhì)損傷后神經(jīng)修復(fù)的研究進(jìn)展〔J〕.中華神經(jīng)醫(yī)學(xué)雜志,2009;8(2)：201-3.

6高曉玉,王得新,張擁波.腦缺血再灌注后Olig1、Nogo-A基因表達(dá)與白質(zhì)損傷〔J〕.中華神經(jīng)科雜志,2009;42(322)：808-12.

7呂合作,鄒健,王艷霞,等. Olig1過表達(dá)對大鼠神經(jīng)干細(xì)胞向少突膠質(zhì)細(xì)胞分化的影響〔J〕.神經(jīng)解剖學(xué)雜志,2010；26(2):201-5.

〔2015-05-19修回〕

(編輯苑云杰)