亚洲免费av电影一区二区三区,日韩爱爱视频,51精品视频一区二区三区,91视频爱爱,日韩欧美在线播放视频,中文字幕少妇AV,亚洲电影中文字幕,久久久久亚洲av成人网址,久久综合视频网站,国产在线不卡免费播放

        ?

        Nogo受體拮抗劑對神經(jīng)生長因子表達的影響

        2015-12-28 12:01:55楊朝勃王春劉成招林永綏
        中國現(xiàn)代醫(yī)生 2015年32期
        關(guān)鍵詞:神經(jīng)生長因子再生脊髓損傷

        楊朝勃 王春 劉成招 林永綏

        [摘要] 目的 探討Nogo受體拮抗劑NEP1-40對大鼠脊髓損傷后,對神經(jīng)生長因子(NGF)蛋白表達的影響。 方法 取雌性SD大鼠,隨機分成對照組、生理鹽水治療組和NEP1-40治療組,每組10只。建立T10節(jié)段的大鼠脊髓半切損傷模型,分別注射生理鹽水和NEP1-40;于術(shù)后不同時間點對各組大鼠行后肢運動功能BBB評分;免疫組織化學(xué)染色檢測神經(jīng)生長因子(NGF)的表達。 結(jié)果 術(shù)后3周時,NEP1-40治療組的BBB評分高于生理鹽水治療組(P<0.05);術(shù)后4周時,NEP1-40治療組的BBB評分高于生理鹽水治療組(P<0.01)。與生理鹽水治療組相比,NEP1-40治療組在治療2周后的神經(jīng)生長因子(NGF)蛋白表達水平較高,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。 結(jié)論 脊髓損傷后,NEP1-40可以增加神經(jīng)生長因子(NGF)蛋白的表達,促進脊髓損傷后大鼠神經(jīng)的再生。

        [關(guān)鍵詞] 脊髓損傷;Nogo受體拮抗劑;神經(jīng)生長因子;再生

        [中圖分類號] R722.1 [文獻標(biāo)識碼] A [文章編號] 1673-9701(2015)32-0027-03

        [Abstract] Objective To discuss the effect of NEP1-40 on the expression of NGF in rats with spinal cord injury (SCI). Methods 30 healthy adult Sprague-Dawley rats were randomly divided into model control normal group(n=10), saline treatment group(n=10) and NEP1-40 treatment group (n=10). Establish the model of acute spinal cord injury in T10. Injection of saline and NEP1-40 respectively. At different time points after operation, 5 rats in each group were assessed with Basso-Beattie-Bresnahan(BBB) scale, and the expression of Nerve Growth Factor of the spinal cord were detected with immunohistochemistry. Results The scores of BBB were better in NEP1-40 treatment group than in normal saline treatment group 3 weeks after SCI(P<0.05), The scores of BBB were better in NEP1-40 treatment group than in normal saline treatment group 4 weeks after SCI (P<0.01). Compared with normal saline treatment group, the expression of NGF increased 2 weeks after SCI in NEP1-40 treatment group(P<0.05). Conclusion NEP1-40 may promote the expression of NGF in spinal cord after SCI in order to improve neural regeneration in rats.

        [Key words] Spinal cord injury; Nogo receptor antagonist; Nerve growth factor; Regeneration

        脊髓損傷(spinal cord injury,SCI)是一種致殘與致死率很高的疾病,其治療一直是神經(jīng)損傷修復(fù)領(lǐng)域的難題[1]。Nogo蛋白是目前所知有效的神經(jīng)軸突生長的抑制因子[2]。Nogo受體拮抗劑(Nogo extra cellular peptide,residues1-40,NEP1-40)是Nogo受體(Nogo receptor,NgR)競爭性拮抗劑,能拮抗中樞神經(jīng)抑制因子與Nogo受體的結(jié)合,間接促進新生軸突的生長,是目前國內(nèi)外研究的熱點[3]。本研究主要觀察大鼠急性脊髓損傷后NEP1-40對運動功能恢復(fù)的影響及對神經(jīng)生長因子(NGF)蛋白表達的影響,現(xiàn)報道如下。

        1 資料與方法

        1.1 實驗動物

        重量200 g左右健康SD(Sprague-Dawley)雌性大鼠30只,隨機分成生理鹽水治療組(A組),NEP1-40治療組(B組)和對照組(C組)。動物合格證號:SCXK(滬)2008000513655,由福建醫(yī)科大學(xué)實驗動物中心提供,研究時間2014年9月~2015年7月。

        1.2 藥品與試劑

        Nogo受體拮抗劑NEP1-40:購自上海信裕生物科技有限公司。免疫組化試劑:兔抗人神經(jīng)生長因子(NGF)相應(yīng)抗體均購自于上海麗臣生物科技有限公司。

        1.3 儀器

        光學(xué)顯微鏡(Olympus,SZ61,日本),低溫高速離心機(Thermo Sorvall RC-6 plus,美國),Image-Pro Plus 6.0計算機圖像分析系統(tǒng),超凈工作臺(SW-CJ-1B,蘇州安泰),電子天平(Sartouris,M371137,德國)。

        1.4 實驗方法

        1.4.1 脊髓損傷模型制備 采用10%水合氯醛(300 mg/kg)腹腔注射麻醉,切開皮膚、皮下組織,暴露脊柱,以T8棘突為中心,打開T8椎板,做T10脊髓的后半橫斷,損傷深度1.0 mm。置入硬脊膜下導(dǎo)管,固定導(dǎo)管,逐層縫合,模型制作完成。NEP1-40治療組每天將NEP1-40 10 μL(0.4 μg/μL)通過導(dǎo)管注入蛛網(wǎng)膜下腔,連續(xù)注射4周,早、中、晚各一次,注射完后用10 μL生理鹽水沖管,使藥物完全進入蛛網(wǎng)膜下腔。術(shù)后前3 d注射青霉素4萬U/只,防止感染。術(shù)后每日擠壓膀胱,促使排尿,直至排尿反射形成。生理鹽水治療組每天注入生理鹽水20 μL,對照組切開皮膚后縫合,未干預(yù)。

        1.4.2 標(biāo)本收集和切片制作 實驗動物均于脊髓損傷后第1、2、3、4周時打開胸腔,經(jīng)心臟灌注緩沖液沖洗組織內(nèi)血液。取出脊髓組織,在4%多聚甲醛中固定約6 h,以30%蔗糖溶液浸泡,冰凍切片,厚度20 μm。

        1.5 評價指標(biāo)

        1.5.1 后肢運動神經(jīng)功能 評分用BBB評分法[4]于術(shù)后1 d、3 d、1周、2周、3周、4周觀察大鼠雙后肢運動功能,并按后肢全癱(0分)至后肢運動完全正常(21分)記錄分數(shù)。

        1.5.2 NGF蛋白表達的免疫組織化學(xué)方法及步驟 免疫組織化學(xué)染色嚴(yán)格按照試劑盒操作,每只大鼠隨機5張切片。觀察與計數(shù)方法:以胞質(zhì)或胞核中出現(xiàn)棕黃色顆粒為陽性,以Image-Pro Plus 6.0軟件計算每張切片的陽性細胞數(shù),該標(biāo)本的陽性細胞數(shù)為每張片的平均陽性細胞個數(shù)。

        1.6 統(tǒng)計學(xué)分析

        采用SPSS20.0統(tǒng)計軟件,計量資料用(x±s)表示,進行單因素方差分析,P<0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

        2 結(jié)果

        2.1 行為學(xué)觀察

        術(shù)后脊髓損傷的大鼠均呈現(xiàn)雙后肢完全癱瘓,術(shù)后1周時,手術(shù)組大鼠后肢功能無明顯恢復(fù),隨著觀察時間延長,手術(shù)組動物的神經(jīng)功能均有不同程度的恢復(fù)。術(shù)后1 d~2周,BBB評分NEP1-40治療組(B組)與生理鹽水治療組(A組)組間比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05);術(shù)后3周時,B組的BBB評分顯著高于A組(P<0.05);術(shù)后4周時,B組的BBB評分顯著高于A組(P<0.05)。見表1。

        2.2 NGF蛋白的表達

        在第1周時,生理鹽水治療組(A組)與NEP1-40治療組(B組)NGF蛋白表達水平差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05);與A組相比,B組在第2、3、4周的NGF蛋白表達水平較高,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05);與C組相比,A組、B組在不同時相點NGF蛋白表達水平明顯降低,差異有高度統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.01)。見封三圖1~封三圖8、表2。

        3 討論

        目前脊髓損傷的發(fā)病率正在逐年增加,對人們的健康和生活質(zhì)量構(gòu)成了重大的威脅。具有致殘率高、花費高,病死率高的特點[5]。目前治療脊髓損傷的主要方法有藥物治療和手術(shù)干預(yù)等,雖然有一定的療效,但療效甚微。患者不僅身心健康受到影響,也造成社會經(jīng)濟問題。

        脊髓損傷后局部環(huán)境改變導(dǎo)致神經(jīng)缺血、變性。脊髓軸突的再生由于髓磷脂被破壞、膠質(zhì)細胞丟失等原因受到影響,脊髓損傷后難以恢復(fù)主要由于軸突再生抑制[6]。髓磷脂相關(guān)糖蛋白、少突膠質(zhì)細胞髓磷脂糖蛋白、Nogo蛋白是三種目前已知的神經(jīng)軸突再生抑制因子[7]。Nogo基因能夠表達三種網(wǎng)狀蛋白。三種蛋白均作用于共同的受體NgR(Nogo receptor,NgR),NgR是抑制某些神經(jīng)軸突生長因子的關(guān)鍵靶點。NgR至少有3個亞單位構(gòu)成,被激活后有阻止神經(jīng)軸突生長的作用[8]。當(dāng)作為結(jié)合體三種蛋白與NgR相結(jié)合,可以激活Rho-A,中止生長錐使神經(jīng)軸突的生長受到抑制[9]。表達在神經(jīng)元軸突中的Nogo-A分子質(zhì)量大且是其中作用最重要的蛋白,Nogo-A抑制神經(jīng)軸突生長,功能區(qū)由66個氨基酸組成,是發(fā)揮抑制作用的主要功能結(jié)構(gòu)區(qū)。與位于神經(jīng)軸突細胞膜表面的Nogo-66受體結(jié)合后,通過信號傳導(dǎo)抑制神經(jīng)軸突再生[10]。由Nogo基因表達的蛋白質(zhì)產(chǎn)物與NgR復(fù)合物,是目前被世人認可的神經(jīng)軸突生長抑制因子,在人的脊髓等部位的研究有所進展[11,12]。

        NEP1-40是目前有效的NgR受體的競爭性抑制劑,同時具有營養(yǎng)神經(jīng)的作用。GrandPré等[13]的實驗結(jié)果顯示,NEP1-40可以和NgR受體結(jié)合,使抑制神經(jīng)軸突生長NgR受體的下游信號通路塌陷,從而促使脊髓損傷后軸突生長。

        NGF是第一個被發(fā)現(xiàn)的典型的細胞因子,對神經(jīng)軸突的生長具有重要的作用[14]。NGF通過與膜上的受體結(jié)合,通過信號傳導(dǎo)系統(tǒng)發(fā)揮活性,同時具有營養(yǎng)神經(jīng)的作用。當(dāng)脊髓損傷后,神經(jīng)系統(tǒng)會產(chǎn)生神經(jīng)營養(yǎng)因子,以NGF作用尤為突出,從而對神經(jīng)元的正常功能和結(jié)構(gòu)進行維持和保護。機制可能是通過細胞內(nèi)分泌和細胞旁分泌的形式,刺激軸突生長,在神經(jīng)系統(tǒng)的修復(fù)中發(fā)揮不可替代的作用[15]。

        本實驗中,術(shù)后3周,NEP1-40治療組BBB評分較生理鹽水治療組高(P<0.05)。術(shù)后4周,NEP1-40治療組BBB評分較生理鹽水治療組高(P<0.01)。NEP1-40治療組比生理鹽水治療組有更好的神經(jīng)功能的恢復(fù),說明NEP1-40治療后的大鼠受損中樞神經(jīng)系統(tǒng)軸突的生長及功能恢復(fù)更加有效??赡躈EP1-40在脊髓損傷恢復(fù)中除了促進軸突生長以外,尚有其他作用。通過對NGF表達的免疫組化分析,術(shù)后1周NEP1-40治療組與生理鹽水治療組差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)。術(shù)后2周后,NEP1-40治療組陽性細胞數(shù)目多于生理鹽水治療組(P<0.05)。說明NEP1-40能促進脊髓神經(jīng)元的生長。NEP1-40在大鼠脊髓損傷模型中的蛛網(wǎng)膜下腔的給藥,導(dǎo)致了神經(jīng)軸突的生長,促進了大鼠脊髓損傷后雙下肢運動功能恢復(fù)。因此,Nogo蛋白與NgR為中樞神經(jīng)系統(tǒng)損傷后神經(jīng)軸突生長受到阻礙的主要結(jié)構(gòu)。而NEP1-40通過競爭性與NgR結(jié)合,促進神經(jīng)軸突生長通過損傷區(qū),在中樞神經(jīng)系統(tǒng)損傷的修復(fù)中發(fā)揮著關(guān)鍵的作用[16]。

        隨著藥物、基因、細胞、高壓氧[17]等治療技術(shù)的發(fā)展,神經(jīng)損傷后修復(fù)明顯進步。已發(fā)展為綜合的多技術(shù)、多學(xué)科療法[18,19]。雖在一定程度上可緩解癥狀,但無法根本上恢復(fù)脊髓功能[20]。Teng等[21]觀察到NEP1-40促進脊髓損傷后軸突再生效果確切,是目前研究脊髓損傷后促進神經(jīng)再生的熱點,相信在不久的將來,有一定的臨床應(yīng)用前景。

        [參考文獻]

        [1] Martin Ginis KA,J rgensen S,Stapleton J. Exercise and sport for persons with spinal cord injury[J]. PMR,2012,4(11):894-900.

        [2] Yu P,Huang L,Zou J,et al. Immunization with recombinant Nogo-66 receptor(NgR) promote saxonal regeneration and recovery of function after spinal cordinjury in rats[J].Neurobiol Dis,2008,32(3):535-542.

        [3] Li S,Strittmatter SM. Delayed systemic Nogo-66 receptor antago-nistpromotes recovery from spinal cordinjury[J].Neurosci,2003,23(10):4219-4227.

        [4] 熊春翔,宗少暉,曾高峰,等. 大鼠Alles脊髓損傷模型化建立及評價[J]. 廣州醫(yī)科大學(xué)學(xué)報,2011,28(2):215-217.

        [5] Li Shenghua,Guo Pingde,Wang Wenjing. Current situation and progression in the treatment of spinal cord injury[J].China J Orthop & Trauma,2010,23(1):70-73.

        [6] Savaskan NE,Weinmann O,Heimrich B,et al. High resolution neurochemical gold staining method for myelin in peripheral and central nervous system at the light-and electron-microscopic level[J]. Cell and Tissue Research,2009,337(2):213-221.

        [7] Woolf CJ,Bloechlinger S. It takes more than two to Nogo[J].Science,2002,297(5584):1132-1134.

        [8] Yamashita T,F(xiàn)ujitani M,Yamagishi S,et al. Multiple signals regulate axon regen-eration through the nogo receptor complex[J]. Mol Neurobiol,2005,32(2):105-111.

        [9] Steward O,Sharp K,Yee KM,et al. A reassessment of the effects of a Nogo-66 receptor antagonist on regenerative growth of axons and locomotor recovery after spinal cord injury in mice[J]. Exp Neurol,2008,209(2):446-468.

        [10] Walmsley AR,Mir AK. Targeting the Nogo-A signalling pathway topromote recovery following acute CNS injury[J].rr Pharm Des,2007,13(24):2470-2484.

        [11] Yu P,Huang Zou. Immunization with recombinant Nogo-66 receptor (NgR) promotes axonal regeneration and recovery of function after spinal cord injury in rats[J]. Neurobiol Dis,2008,32(3):535-542.

        [13] GrandPre T. Nogo-66 receptor antagonist peptidepromotes axonal regeneration[J]. Nature,2002,417:547-551.

        [14] Koda M,Hashimoto M,Mu rakami M,et al. Adenovirus vector-mediated in vivo genetransfer of brain-derived neurot rophic factor(BDNF) promot es rub rospinal axonal regeneration and functional recovery after complete trans ection of the adult rat spinalcord[J]. Neurotrauma,2004, 21(3):329-337.

        [15] Cao L,Liu L,Chen ZY,et al. Olfactory ensheathing cells genetically modified to secret GDNF to promote spinal cord repair[J]. Brain,2004,127(pt3):535-549.

        [16] Harvey PA,Lee DH,Qian F. Blockade of Nogo receptor ligands promotes functional regeneration of sensory axons after dorsal root crush[J]. The Journal of Neuroscience,2009,29(19):6285-6295.

        [17] 孫文志,魯世保. 高壓氧治療脊髓損傷機制的研究進展[J]. 中國脊柱脊髓雜志,2014,24(12):1116-1119.

        [18] Tos P,Ronchi G,Geuna S,et al. Future perspectives in nerve repair and regeneration[J]. Int Rev Neurobiol,2013, 109:165-192.

        [20] 石良晨,秦峰. 膠質(zhì)細胞源性神經(jīng)營養(yǎng)因子修飾骨髓間充質(zhì)干細胞移植與傳統(tǒng)方法治療脊髓損傷研究進展[J].中華實用診斷與治療雜志,2015,29(5):423-425.

        [21] Lee JK,Kim JE,Sivula M,et al. Nogo receptor antagonism promotes strok covery by enhancing axonal plasticity[J]. J Neurosci,2004,24(27):6209-6217.

        (收稿日期:2015-08-23)

        猜你喜歡
        神經(jīng)生長因子再生脊髓損傷
        追尋“紅色”足跡
        山東青年(2016年11期)2017-03-02 22:56:29
        溴吡斯的明聯(lián)合巴氯酚對T6以上脊髓損傷神經(jīng)源性膀胱的臨床觀察
        早期康復(fù)對脊髓損傷患者ADL及功能獨立性的影響探析
        今日健康(2016年12期)2016-11-17 14:09:35
        綜合護理與康復(fù)訓(xùn)練對胸腰椎骨折合并脊髓損傷患者的應(yīng)用觀察
        紅十字騎士的死亡與再生
        試論在高?!爱a(chǎn)、學(xué)、研”中發(fā)展現(xiàn)代傳統(tǒng)手工藝文化
        人間(2016年26期)2016-11-03 18:25:32
        大學(xué)化學(xué)實驗用氟離子選擇電極的再生處理研究
        科技視界(2016年6期)2016-07-12 09:48:04
        行動學(xué)習(xí)法在脊髓損傷患者實施自助間歇導(dǎo)尿中的應(yīng)用效果
        神經(jīng)生長因子治療腦出血56例的臨床療效分析
        銀丹心腦通軟膠囊對糖尿病周圍神經(jīng)病變伴高血壓患者神經(jīng)生長因子的影響
        久久综合国产精品一区二区| 欧洲亚洲视频免费| 亚洲区精品久久一区二区三区女同 | 亚洲国产美女在线观看| 国产黄色一区二区福利| av在线免费高清观看| 无码va在线观看| 乱色精品无码一区二区国产盗| 波多野结衣中文字幕久久 | 女优免费中文字幕在线| 青青河边草免费在线看的视频| 最近中文字幕免费完整版| 麻豆av传媒蜜桃天美传媒| 日本国产在线一区二区| 偷拍一区二区三区四区视频| 中文字幕人妻熟在线影院| 国产最新网站| 亚洲人妻有码中文字幕| 中文乱码字幕精品高清国产| 在线视频观看免费视频18| 在线精品无码一区二区三区| 日本在线一区二区在线| 综合偷自拍亚洲乱中文字幕| 国产性生交xxxxx免费| 亚洲午夜久久久久中文字幕久| 亚洲国产成人va在线观看天堂| 午夜天堂精品久久久久| 国产精品后入内射日本在线观看| 亚洲av噜噜狠狠蜜桃| 国产夫妻自拍视频在线播放| 国内露脸少妇精品视频| 无码日日模日日碰夜夜爽| 少妇久久一区二区三区| 日韩av午夜在线观看| 国产亚洲婷婷香蕉久久精品| 成人国产自拍在线播放| 三个黑人插一个女的视频| 亚洲成a人片在线观看无码专区| 亚洲色大成网站www永久一区 | 亚洲精品国产熟女久久| 午夜一区二区三区观看|