郝晶，梅婷

（1.黑龍江中醫(yī)藥大學(xué)附屬第一醫(yī)院，黑龍江哈爾濱150040；2.黑龍江中醫(yī)藥大學(xué)，黑龍江哈爾濱150040）

參芪景天顆粒聯(lián)合化療對(duì)急性髓系白血病患者NK細(xì)胞影響

郝晶1，梅婷2

（1.黑龍江中醫(yī)藥大學(xué)附屬第一醫(yī)院，黑龍江哈爾濱150040；2.黑龍江中醫(yī)藥大學(xué)，黑龍江哈爾濱150040）

急性髓系白血病；參芪景天顆粒；化療；NK細(xì)胞

急性白血病是指由于造血干細(xì)胞惡變，導(dǎo)致某系列白細(xì)胞成熟障礙，其幼稚白細(xì)胞在骨髓或其他造血組織中惡性增殖，浸潤(rùn)全身組織器官，使正常造血功能受抑制，以貧血、發(fā)熱、出血、肝脾及淋巴結(jié)腫大為主要臨床表現(xiàn)的一組造血系統(tǒng)惡性腫瘤。目前白血病的發(fā)病機(jī)理尚不明確，現(xiàn)代藥理學(xué)研究證實(shí)，急性白血病的發(fā)生、發(fā)展與機(jī)體免疫水平降低有著密切的關(guān)系，尤其是細(xì)胞免疫異常。NK細(xì)胞執(zhí)行細(xì)胞免疫功能，是機(jī)體免疫防護(hù)中重要的活性細(xì)胞［1］。急性白血病本身可致NK細(xì)胞數(shù)量及功能異常，NK細(xì)胞功能缺陷也與白血病的發(fā)生、發(fā)展及預(yù)后有密切關(guān)系。NK細(xì)胞能快速溶解腫瘤細(xì)胞、病毒感染細(xì)胞、骨髓及胸腺的某些細(xì)胞亞群等，無(wú)需抗體參與和事先致敏［2］，亦不受MHC限制［3］，是機(jī)體免疫監(jiān)視的主要成分，可以識(shí)別和殺傷突變細(xì)胞，在機(jī)體的抗腫瘤免疫監(jiān)視中起第一道防線的作用［4］。各種白血病細(xì)胞系對(duì)藥物的敏感性取決于患者免疫功能的改變，如紊亂的T淋巴細(xì)胞亞群得到糾正，NK細(xì)胞數(shù)量逐漸增加。因此通過(guò)某種途徑使NK細(xì)胞重新獲得活躍能力，使患者的免疫力獲得提高，成為白血病治療的新方向。本研究旨在觀察參芪景天顆粒聯(lián)合化療能否改善NK細(xì)胞功能來(lái)判斷用藥的臨床療效，為參芪景天顆粒的臨床應(yīng)用及研究提供依據(jù)。

1 資料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)對(duì)象30例急性髓系白血?。ˋML）患者均選自2010年—2013年黑龍江中醫(yī)藥大學(xué)附屬第一醫(yī)院血液病科住院患者，均符合張之南的《血液病診斷及療效標(biāo)準(zhǔn)》［5］中相關(guān)標(biāo)準(zhǔn)。入選病例按簡(jiǎn)單隨機(jī)分組方法隨機(jī)分為治療組和對(duì)照組各15例。治療組中男6例，女9例；年齡最小17歲，最大56歲，平均年齡（39.51±13.26）歲。對(duì)照組中男7例，女8例；年齡最小16歲，最大54歲，平均年齡（37.25±14.92）歲。另設(shè)正常對(duì)照組（正常健康人群）15例，其中男8例，女7例；年齡最小18歲，最大60歲，平均年齡（41.68±14.69）歲。3組性別和年齡經(jīng)統(tǒng)計(jì)學(xué)處理，差別無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05），具有可比性。

1.2 實(shí)驗(yàn)方法2組均應(yīng)用HA或DA方案，治療組加用參芪景天顆粒，藥物由西洋參、黃芪、紅景天等組成，根據(jù)辨證分型加減用藥，由黑龍江中醫(yī)藥大學(xué)附屬第一醫(yī)院制劑室提供。

1.3 儀器和試劑①儀器：流式細(xì)胞儀（美國(guó)BD公司，F(xiàn)ACSCaliber型）、離心機(jī)（北京雷勃爾離心機(jī)有限公司，LDZ5-2型）、50 mL精確移液器。②試劑：CD3／CD16+56／CD45／CD19四色熒光抗體、Trucount tube、FACS Lysing Solution（均購(gòu)自美國(guó)BD公司）。

1.4 實(shí)驗(yàn)步驟①取50 μL全血（抗凝）加入Trucount tube中；②取10 μL三色或四色標(biāo)記的抗體，加入Trucount tube中，混勻，室溫避光放置15 min；③取出加入450 μL 1×FACS軟件下，收獲15 000個(gè)細(xì)胞分析；④計(jì)算細(xì)胞數(shù)：獲取細(xì)胞數(shù)× Beads總數(shù)。

細(xì)胞數(shù)/（個(gè)／μL）＝Beads獲取數(shù)×樣本量

1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理計(jì)量資料屬正態(tài)分布用x±s表示，兩樣本計(jì)量資料比較采用t檢驗(yàn)，計(jì)數(shù)資料中兩樣本率比較采用χ2檢驗(yàn)。

2 治療結(jié)果

2.1 療效判定標(biāo)準(zhǔn)參照《血液病診斷及療效標(biāo)準(zhǔn)》［5］評(píng)定療效，①完全緩解（CR）：臨床無(wú)白血病細(xì)胞浸潤(rùn)所致的癥狀和體征，生活正?；蚪咏?；血象：Hb≥100 g／L（男），或≥90 g／L（女及兒童），中性粒細(xì)胞絕對(duì)值≥1.5×109／L，血小板≥100×109／L，外周血白細(xì)胞分類(lèi)中無(wú)白血病細(xì)胞；骨髓象：原粒細(xì)胞Ⅰ型+Ⅱ型（原始單核-幼稚單核細(xì)胞）≤5%，紅細(xì)胞及巨核細(xì)胞系正常；M2b型：原粒細(xì)胞Ⅰ型+Ⅱ型≤5%，中性中幼粒細(xì)胞比例在正常范圍；M3型：原粒細(xì)胞+早幼粒細(xì)胞≤5%；M4型：原粒細(xì)胞Ⅰ、Ⅱ型+原始單核及幼稚單核細(xì)胞≤5%；M5型：原始單核細(xì)胞Ⅰ型+Ⅱ型及幼稚單核細(xì)胞≤5%；M6型：原粒細(xì)胞Ⅰ型+Ⅱ型≤5%，原始紅細(xì)胞及幼紅細(xì)胞比例基本正常；M7型：粒細(xì)胞、紅細(xì)胞二系比例正常，原始巨核細(xì)胞+幼稚巨核細(xì)胞基本消失。②部分緩解（PR）：骨髓原粒細(xì)胞Ⅰ型+Ⅱ型（原始單核+幼稚單核細(xì)胞）＞5%而≤20%；或臨床、血象中有1項(xiàng)未達(dá)完全緩解標(biāo)準(zhǔn)者。③復(fù)發(fā)（經(jīng)治療獲CR后出現(xiàn)下列三者之一）：骨髓原粒細(xì)胞Ⅰ型+Ⅱ型（原始單核+幼稚單核細(xì)胞）＞5%而≤20%，經(jīng)過(guò)有效地抗白血病治療1個(gè)療程仍未達(dá)到骨髓象完全緩解標(biāo)準(zhǔn)者；骨髓原粒細(xì)胞Ⅰ型+Ⅱ型（原始單核+幼稚單核細(xì)胞）＞20%者；骨髓外白血病細(xì)胞浸潤(rùn)。④持續(xù)完全緩解（CCR）：從治療后完全緩解之日算起，其間無(wú)白血病復(fù)發(fā)達(dá)3～5 a以上。⑤長(zhǎng)期存活：急性白血病確診之日起，存活時(shí)間（包括無(wú)病或帶病生存）達(dá)5 a或5 a以上。⑥臨床治愈：停止化療5 a或無(wú)病生存達(dá)10 a。

2.2 結(jié)果見(jiàn)表1～表3。

表1 2組療效比較（n，%）

表2 3組治療前后NK細(xì)胞比較（x±s）個(gè)／μL

表3 2組不良反應(yīng)比較

3 討論

在中醫(yī)文獻(xiàn)中無(wú)“白血病”之名稱(chēng)，根據(jù)其發(fā)熱、出血、貧血、肝脾及淋巴結(jié)腫大等特征，白血病分別歸屬于中醫(yī)“溫病”“血證”“虛勞”“瘰疬”等范疇。扶正祛邪是中醫(yī)學(xué)的重要治療原則，根據(jù)疾病發(fā)病的不同階段，分別采用扶正、祛邪的方法。我院科應(yīng)用參芪景天顆粒聯(lián)合化療治療AML已達(dá)十余年，方中西洋參、黃芪、紅景天具有益氣生血、扶正填精之效?，F(xiàn)代藥理研究證實(shí)：西洋參中Rg3總苷，能夠作用于人體內(nèi)的腫瘤，使腫瘤生長(zhǎng)速度得到顯著緩解，并且能夠提高人體免疫力［6］；黃芪可通過(guò)誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞凋亡而抑制腫瘤生長(zhǎng)［7］；紅景天能抑制腫瘤細(xì)胞增殖，阻滯細(xì)胞周期，誘導(dǎo)分化，誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞凋亡，抑制腫瘤新生血管［8］。

本研究結(jié)果顯示：初診AML患者NK細(xì)胞活性和數(shù)量明顯低于正常健康對(duì)照人群，化療緩解后NK細(xì)胞水平升高，但還未升高至正常健康人群水平，這與Luczynski等［9］觀點(diǎn)一致，提示AML患者在經(jīng)過(guò)誘導(dǎo)治療后NK細(xì)胞水平并未恢復(fù)至正常，體內(nèi)仍存在大量白血病細(xì)胞，NK細(xì)胞免疫監(jiān)視功能未完全恢復(fù)，不能完全清除殘留白血病細(xì)胞，患者有復(fù)發(fā)可能，仍需鞏固治療。本結(jié)果證實(shí)參芪景天顆粒具有升高NK細(xì)胞數(shù)量，增強(qiáng)NK細(xì)胞活性，抑制白血病細(xì)胞生長(zhǎng)的作用。

中醫(yī)藥聯(lián)合化療治療AML可協(xié)同傳統(tǒng)化療藥物提高AML患者的緩解率，使AML患者緩解期、生存期延長(zhǎng)，降低化療的毒副作用，希望能為AML的治療探索新的途徑。

［1］FARAG S S，VAN DEUSEN J B，F(xiàn)EHNIGER T A，et al.Biology and clinic impact of human natural killer cells［J］.Int J Hematol，2003，78（1）：7-17.

［2］KIESSLING R，KLEIN E，WIGZELL H.“Natural”killer cells in the mouse.I.Cytotoxic cells with specificity for mouse Moloney leukemia cells.Specificity and distribution according to genotype［J］. Eur J Immunol，1975，5（2）：112-117.

［3］LANIER L L.NK cell recognition［J］.Annu Rev Immunol，2005（23）：225-274.

［4］FARAG S S，F(xiàn)EHNIGER T A，RUGGERI L，et al.Natural killer cells receptors：new biology and insights into the graft-versusleukemia effect［J］.Blood，2002，100（6）：1935-1947.

［5］張之南.血液病診斷及療效標(biāo)準(zhǔn)［S］.3版.北京：科學(xué)出版社，2008：172-175.

［6］尹麗麗.人參的藥理作用及現(xiàn)代研究進(jìn)展［J］.中醫(yī)臨床研究，2013（5）：122.

［7］胡新月，王新雨，王麗.黃芪的藥理作用及臨床研究進(jìn)展［J］.中國(guó)民族民間醫(yī)藥，2013，4（15）：20-21.

［8］劉明成，張得鈞.紅景天藥理作用研究進(jìn)展［J］.亞太傳統(tǒng)醫(yī)藥，2013，9（6）：65-69.

［9］LUCZYNSKI W，STASIAK-BAMUTA A，KRAWCZUK-RYBAK M，et al.Is cellular immunity not impaired after remission induction in acute lymphoblastic leukemia in children［J］.Pol Merkur Lekarski，2004，16（91）：17-21.

R733.71

B

1000-338X（2015）04-0024-02

2014-12-25

郝晶（1976—），女，醫(yī)學(xué)碩士，副主任醫(yī)師，主要從事中西醫(yī)結(jié)合治療血液系統(tǒng)疾病臨床工作。

梅婷（1988—），女，碩士研究生。

E-mail:meiting19880608@163.com