鄧俊

（長沙市中心醫(yī)院檢驗科，湖南410004）

梅毒血清學檢測合理模式探析

鄧俊

（長沙市中心醫(yī)院檢驗科，湖南410004）

目的通過分析和比較檢測梅毒的4種血清學方法，尋找合理的梅毒血清學檢測模式。方法應用甲苯胺紅不加熱血清反應素試驗（TRUST）、梅毒螺旋體酶聯免疫吸附試驗（TP-ELISA）、膠體金試驗（SYP）和梅毒螺旋體明膠顆粒凝集試驗（TPPA）對該院2014年7月的58例臨床懷疑梅毒感染患者的血清標本進行分析，并比較TRUST、TPELISA、SYP 3種方法所測結果與TPPA結果是否存在差異。結果TRUST結果與TPPA結果比較，差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.05），而ELISA、SYP結果與TPPA結果比較，差異均無統(tǒng)計學意義（P＞0.05）。結論ELISA和SYP對梅毒抗體檢測均有較好的靈敏性和特異性。而TRUST與TPPA差異較大，需合理利用TRUST的檢測結果。結合各方法的優(yōu)缺點建立一種便捷、準確和合理的檢測模式，為臨床診斷梅毒提供依據是很有必要的。

密螺旋體，蒼白；梅毒血清學診斷；敏感性與特異性；實驗室技術和方法

梅毒是目前最為常見的性傳播疾病之一，其臨床表現復雜，可累及多個組織和器官；傳染性強，除通過性傳播外，還可通過血液和體液傳播，母嬰垂直傳播。為預防醫(yī)源性感染的發(fā)生，梅毒抗體的檢測已成為輸血前常規(guī)的必檢項目之一。近年來梅毒發(fā)病率有明顯上升趨勢，防治工作任重道遠[1]。

梅毒的致病菌是梅毒螺旋體。由于梅毒螺旋體不能在體外培養(yǎng)，且直接顯微鏡觀察又容易漏檢，加之先進的化學發(fā)光免疫分析和核酸擴增技術缺乏足夠的臨床數據支持和金標準[2]，還未能在臨床上推廣使用，所以目前臨床上最常用的檢測方法還是血清學檢測。

血清學檢測分為非特異性和特異性梅毒抗體檢測，本文通過比較臨床常用的4種血清學檢測方法的結果，綜合各方法的特點探索一種合適的檢測模式，為臨床更快更準確的診斷梅毒提供幫助?，F報道如下。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 血清標本隨機選取2014年7月在本院行梅毒常規(guī)檢測的門診和住院患者的血清標本58例。門診就診21例，住院37例，其中男32例，女26例，年齡21～68歲，平均（42.17±1.92）歲，均為臨床懷疑梅毒感染患者。

1.1.2 儀器西門子全自動酶免分析系統(tǒng)BEPⅢ。

1.1.3 試劑苯胺紅不加熱血清反應素試驗（TRUST）采用上海榮盛生物技術有限公司生產的試劑盒；梅毒螺旋體酶聯免疫吸附試驗（TP-ELISA）采用珠海麗珠試劑股份有限公司生產的梅毒螺旋體抗體診斷試劑盒；膠體金試驗（SYP）使用英科新創(chuàng)（廈門）科技有限公司生產的梅毒螺旋體抗體檢測試劑盒；梅毒螺旋體明膠顆粒凝集試驗（TPPA）采用日本富士瑞必歐株式會生產的試劑盒。

1.2 方法

1.2.1 TRUST檢測梅毒螺旋體抗體嚴格參照試劑說明書操作。結果判定：出現肉眼可見凝集為陽性。

1.2.2 TP-ELISA檢測梅毒螺旋體抗體嚴格參照試劑說明書操作。結果判定：臨界值（CUTOFF）=0.10+Max [0.05+Mw（NC）]。樣品A值小于臨界值（CUTOFF）為陰性，樣品A值大于或等于臨界值為陽性。結果判讀由西門子全自動酶免分析系統(tǒng)BEPIⅡ自動完成。

1.2.3 SYP檢測梅毒螺旋體抗體嚴格參照試劑說明書操作。結果判定：測試區(qū)和對照區(qū)都出現一條紫紅色條帶為陽性，僅對照區(qū)出現一條紫色條帶為陰性。

1.2.4 TPPA檢測梅毒螺旋體抗體嚴格參照試劑說明書操作。結果判定：未致敏粒子（最終稀釋倍數1∶40）的反應圖像判定為陰性，致敏粒子（最終稀釋倍數1∶80以上）的反應圖像判定為陽性。

1.3 統(tǒng)計學處理應用SPSS17.0統(tǒng)計軟件進行數據分析，計數資料以率表示，采用配對四格表資料的χ2檢驗，P＜0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

2 結果

2.1 各方法檢測結果58份血清標本中，以TPPA檢測結果作為標準[3-5]，TRUST檢出陽性8例，占總數的13.79%；TP-ELISA檢出陽性23例，占總數的39.66%；SYP檢出陽性23例，占總數的39.66%。見表1。

表1 各方法檢測結果[n（%）]

2.2 各方法的靈敏性和特異性比較以TPPA檢測結果作為標準[3-5]，TP-ELISA和SYP的靈敏性均為100%，特異性為97.14%，而TRUST的靈敏性只有34.78%，特異性97.14%。TRUST與TPPA比較，差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.05），而TP-ELISA、SYP與TPPA法比較，差異均無統(tǒng)計學意義（P＞0.05）。見表2。

表2 各方法的靈敏性和特異性比較[%（n/n）]

3 討論

梅毒螺旋體血清學檢測與患者體內相應抗體的產生有很大關系。通常正常人在感染梅毒螺旋體2周后體內開始產生抗梅毒螺旋體抗體IgM，再2周后IgG產生。IgG會隨著患者癥狀的持續(xù)發(fā)展而不斷增加。對于未經治療的隱形梅毒，通過檢測能得到較強的IgG反應和溫和的IgM反應，而治愈后的患者體內，相當長的時間內仍然會存在有較高的IgG抗體。感染過程中，人體除了產生特異性梅毒螺旋體抗體，還會相應地產生一些非特異性抗體，如心磷脂抗體等。所以血清學檢測分為非特異性抗體檢測和特異性抗體檢測。

非特異性抗體檢測，如性病研究實驗室試驗（VDRL）、血清不加熱的反應素玻片試驗（USR）、快速血漿反應素環(huán)狀卡片試驗（RPR）和TRUST。上述方法的原理主要是利用含卵磷脂、心磷脂和膽固醇的抗體在IgM和IgG表面絮凝，出現肉眼可見的的凝集作為陽性判斷。其優(yōu)勢在于檢測試劑便宜，易于操作。但是針對的是梅毒非特異性抗體，其他炎癥導致的抗體同樣能檢測到，試驗的靈敏性也有賴于方法本身和感染階段[6]。

特異性抗體檢測，如TP-ELISA、SYP、梅毒密螺旋體血凝試驗（TPHA）、梅毒螺旋體抗體吸收試驗（FTAABS）和TPPA。上述方法以梅毒特異性IgM和IgG抗體為檢測對象，提高了檢測的真陽性率，具有快速、靈敏、特異性強等優(yōu)點。

本研究選擇臨床運用較多的4種血清學方法進行研究，結果發(fā)現，非特異性抗體檢測試驗TRUST與特異性抗體檢測試驗TPPA的結果存在顯著差異。這與TRUST試驗本身的局限性有關。TRUST檢測的是人體內的心磷脂抗體。由于梅毒螺旋體感染后心磷脂抗體的出現晚于特異性抗螺旋體抗體，而且梅毒晚期又可能轉陰，因此，TRUST不適于一期梅毒早期和三期梅毒的診斷[7]，對潛伏期和神經梅毒也不敏感。此外，該方法容易受到結核、紅斑狼瘡、類風濕性關節(jié)炎、猩紅熱等疾病干擾，產生假陽性結果。所以單獨的TRUST結果意義不大。但TRUST滴度變化與梅毒治療情況呈正相關，適用于療效觀察、隨訪和復發(fā)的輔助診斷[8]。

本研究結果顯示，特異性血清學檢測TP-ELISA、SYP和TPPA結果比較，差異無統(tǒng)計學意義（P＞0.05），在梅毒螺旋體檢測方面都有較高的靈敏性和較好的特異性。而且SYP操作簡單，價格便宜，適用于梅毒螺旋體的血清學快速檢測；ELISA適用于大批量標本的檢測，加上全自動酶聯免疫試驗儀的出現，自動化程度不斷提高，大大減少了傳統(tǒng)手工操作造成的人為誤差。但是血清學特異性抗體檢測的是梅毒IgM和IgG混合抗體[9]，不能區(qū)分患者屬于感染病程中還是曾經感染。單獨特異性血清學檢測的陽性結果容易造成臨床的過度檢查和過度治療。

雖然卡方檢驗所得結論認為3種血清學特異性抗體檢測之間無統(tǒng)計學差異，但在個別樣本中還是存在結果的不同。SYP和TP-ELISA都各有1例假陽性結果。ELISA檢測標本的假陽性通過做3個平行孔復查后，發(fā)現結果為陰性，與SYP、TPPA的陰性結果一致，考慮為ELISA檢測中的偶然誤差，如儀器洗板不完全造成的OD值偏高。SYP出現的1例陽性，用金標試紙復查結果仍為陽性，但TRUST、ELISA和TPPA結果都為陰性?？紤]為金標試紙條的假陽性。所以在實際工作中，不能用1種血清學特異性抗體檢測方法來判斷梅毒檢測的陽性結果。建立合適的檢測模式很有必要。

2011年，美國疾病預防與控制中心推薦ELISA作初篩。在此基礎上作者可以建立自己的檢測模式：特異性血清學檢測，先用ELISA法做批量標本的初篩檢測，陽性結果用金標試紙快速復查，排除ELISA的假陽性結果。對于2種方法結果不符的標本，再用TPPA做確認。同時，結合非特異性抗體血清學檢測中滴度的變化和患者臨床癥狀進行綜合分析。相信臨床醫(yī)生能很好地掌握患者的實際情況，做出正確的判斷。

[1]陳彬，徐克，林小敏，等.81946例住院患者梅毒抗體檢測結果分析[J].中華傳染病雜志，2013，31（8）：479-482.

[2]Susanne Norris Zanto（CLS（NCA）SM（NRCM），Deputy Laboratory Director，Montana DPHHS LaboratoryServices Bureau，et al.Changing Algorithms in Syphilis Laboratory Diagnosis[J].Clinical Microbiology Newsletter，2010，32（8）：59-64.

[3]徐海英.ELISA篩查聯合TPPA應用于400份血清梅毒檢測的結果分析[J].吉林醫(yī)學，2012，33（36）：7960.

[4]陳俊，樓躍民，朱笑頻，等.RPR與TP-ELISA聯檢對產婦梅毒檢測結果分析[J].中國衛(wèi)生檢驗雜志，2013，23（2）：397-398.

[5]宋賢響，田禮軍，鄒華新.4種實驗室檢測方法對兒童梅毒的臨床診斷價值分析[J].中國醫(yī)藥導報，2014，11（5）：89-92.

[6]黃文喜，章平，鄭和平，等.梅毒螺旋體血清學檢驗研究進展[J].中國醫(yī)學工程，2014，22（2）：193.

[7]Binnicker MJ.Which algorithm should be used to screen for syphilis?[J].Curr Opin Infect Dis，2012，25（1）：79.

[8]李丹，崔巍，高偉.血清中梅毒抗體檢測的研究進展[J].內蒙古醫(yī)學雜志，2010，57（3）：321-324.

[9]陳霖，毛遠麗.梅毒的實驗室檢測與篩查流程[N].中國醫(yī)學論壇報，2012-10-25.

10.3969/j.issn.1009-5519.2015.05.036

:B

:1009-5519（2015）05-0730-02

2014-10-17）

鄧?。?982-），男，湖南長沙人，碩士研究生，主管檢驗師，主要從事臨床免疫工作；E-mail：andyy1y1@163.com。