徐真諦 楊小生

(重慶市墊江縣中醫(yī)院 重慶 408300)

臨床微生物實(shí)驗(yàn)室在對(duì)苛養(yǎng)菌和耐藥菌進(jìn)行檢測(cè)時(shí)出現(xiàn)嚴(yán)重挑戰(zhàn)，在培養(yǎng)苛養(yǎng)菌和進(jìn)行藥敏試驗(yàn)時(shí)對(duì)生長(zhǎng)環(huán)境以及培養(yǎng)菌的要求比較多，這樣就相應(yīng)提升了實(shí)驗(yàn)室藥敏試驗(yàn)的技術(shù)難度[1]。此次研究旨在探討分析呼吸道苛養(yǎng)菌的分離培養(yǎng)以及耐藥性，收集呼吸道感染患者的痰標(biāo)本1200份作為研究對(duì)象，現(xiàn)將此次研究報(bào)告作如下匯報(bào)。

1 資料與方法

1.1 一般材料

(1)樣本來源：選取我院2016年11月～2017年11月收治的呼吸道感染患者的痰標(biāo)本；

(2)培養(yǎng)基：羊血瓊脂平板和嗜血桿菌巧克力平板都是由微生物實(shí)驗(yàn)室自行配置；

(3)試劑：M-H藥敏瓊脂，KB法藥敏植片，ATB ATREP藥敏試驗(yàn)板，ATB HAEMO藥敏試驗(yàn)板，Nitrocefin紙片[2]；

(4)質(zhì)控菌株：肺炎鏈球菌ATCC 49619，流感嗜血桿菌ATCC 49247。

1.2 方法

(1)接種樣本：在獲取痰標(biāo)本之后需要及時(shí)接種于嗜血桿菌分離用羊血瓊脂平板和巧克力張平板上，將溫度控制在35℃，在5%二氧化碳條件下培養(yǎng)24h，在此期間需要密切觀察細(xì)菌生長(zhǎng)情況；

(2)分離鑒定和藥敏試驗(yàn)：手工鑒定主要是按照臨床檢驗(yàn)操作流程，藥敏試驗(yàn)主要是應(yīng)用K-B紙片擴(kuò)散法，之后以肺炎鏈球菌ATCC 49619和流感嗜血桿菌ATCC 49247進(jìn)行質(zhì)控，結(jié)果根據(jù)美國(guó)實(shí)行的標(biāo)準(zhǔn)判定[3]，還可以應(yīng)用ATB ATREP藥敏試驗(yàn)板，ATB HAEMO藥敏試驗(yàn)板進(jìn)行抗生素藥敏試驗(yàn)；

(3)β-內(nèi)酰胺酶試驗(yàn)：在β-內(nèi)酰胺酶紙片上添加生理鹽水，之后在Nitrocefin紙片上菌落進(jìn)行涂布，等待10min之后如果變?yōu)榧t色，就表示該菌種產(chǎn)生β-內(nèi)酰胺酶。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

對(duì)所有患者數(shù)據(jù)資料采用SPSS20.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行分析處理，計(jì)數(shù)資料用%表示，P<0.05為統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

在所有檢測(cè)的痰樣本當(dāng)中共分離出118株流感嗜血桿菌，占9.83%；64株副流感嗜血桿菌，占5.33%；207株肺炎鏈球菌，占17.25%。

流感嗜血桿菌藥敏試驗(yàn)結(jié)果見表1。

表1 118株流感嗜血桿菌藥敏試驗(yàn)結(jié)果

藥名敏感株樹(敏感率/%)耐藥株樹(耐藥率/%)氨芐西林/棒酸115(97.46)6(1.69)頭孢噻吩98(83.05)20(16.95)氨芐西林65(55.08)53(44.92)四環(huán)素31(26.27)87(73.73)氧氟沙星92(77.97)26(22.03)氯霉素109(92.37)9(7.63)磺胺甲惡唑25(21.19)93(78.81)頭孢曲松111(94.07)9(7.63)利福平118(100)0(0)阿奇霉素118(100)0(0)

副流感嗜血桿菌藥敏試驗(yàn)結(jié)果見表2。

表2 64株副流感嗜血桿菌藥敏試驗(yàn)結(jié)果

藥名敏感株樹(敏感率/%)耐藥株樹(耐藥率/%)氨芐西林34(53.13)30(46.88)氨芐西林/棒酸61(95.31)3(4.69)頭孢噻吩54(84.38)10(15.63)四環(huán)素16(25)48(75)氧氟沙星24(37.5)40(62.5)磺胺甲惡唑30(46.88)34(53.13)氯霉素55(85.64)9(14.06)利福平64(100)0(0)頭孢曲松57(89.06)7(10.94)阿奇霉素57(89.06)7(10.94)

肺炎鏈球菌藥敏試驗(yàn)結(jié)果見表3。

表3 肺炎鏈球菌藥敏試驗(yàn)結(jié)果

藥名敏感株樹(敏感率/%)耐藥株樹(耐藥率/%)中介株樹(中介率/%)阿莫西林202(97.58)2(0.97)2(0.97)頭孢噻肟203(98.07)4(1.93)0(0)紅霉素10(4.83)197(95.17)0(0)克林霉素53(25.60)151(72.95)3(1.45)四環(huán)素11(5.31)196(94.67)0(0)左氧氟沙星128(61.84)79(38.16)0(0)氯霉素131(63.29)76(36.71)0(0)磺胺甲惡唑25(12.07)172(83.09)9(4.35)萬古霉素207(100)0(0)0(0)青霉素173(83.57)13(6.28)21(10.14)

β-內(nèi)酰胺酶檢測(cè)結(jié)果：在118株流感嗜血桿菌產(chǎn)β-內(nèi)酰胺酶共有35株，產(chǎn)酶率為29.66%；在64株副流感嗜血桿菌當(dāng)中產(chǎn)出12株β-內(nèi)酰胺酶，產(chǎn)酶率為18.75%。

3 討論

呼吸道常見苛養(yǎng)菌為肺炎鏈球菌和流感嗜血桿菌，由于受到標(biāo)本性質(zhì)、取材方法以及培養(yǎng)方式的影響，其具有較低的檢出率[4]。在調(diào)查研究嗜血桿菌時(shí)，流感嗜血桿菌對(duì)氨芐西林的耐藥率為44.92%，副流感嗜血桿菌對(duì)其耐藥率為46.88%，此次研究結(jié)果均高于其他學(xué)者的研究結(jié)果。流感嗜血桿菌對(duì)磺胺甲惡唑、四環(huán)素以及氨芐西林等藥物高度耐藥，副流感嗜血桿菌對(duì)氧氟沙星、四環(huán)素以及氨芐西林具有較高的耐藥性，流感嗜血桿菌對(duì)阿奇霉素和利福平?jīng)]有表現(xiàn)出耐藥性，因此在治療嗜血桿菌感染患者時(shí)就可以應(yīng)用第三代頭孢藥物。

嗜血桿菌對(duì)氨芐西林的耐受性主要是因?yàn)楫a(chǎn)生了β-內(nèi)酰胺酶，其次還有非酶介導(dǎo)機(jī)制導(dǎo)致β-內(nèi)酰胺酶呈現(xiàn)陰性，從而使氨芐西林表現(xiàn)出耐藥性。以上研究結(jié)果能夠看出，流感嗜血桿菌對(duì)氨芐西林的耐藥率為44.92%，產(chǎn)酶率為29.66%；副流感嗜血桿菌對(duì)氨芐西林的耐藥性為46.88%，產(chǎn)酶率為18.75%。在研究期間需要注重氯霉素耐藥株能夠產(chǎn)生β-內(nèi)酰胺酶，氯霉素耐藥性大多數(shù)都是由于氯霉素乙酰轉(zhuǎn)移酶的出現(xiàn)。

肺炎鏈球菌能夠?qū)е禄颊叱霈F(xiàn)細(xì)菌性疾病，嚴(yán)重可造成死亡。按照此次研究結(jié)果的特點(diǎn)能夠看出，肺炎鏈球菌對(duì)克林霉素、四環(huán)素以及紅霉素等表現(xiàn)出較高的耐藥性，顯著高于國(guó)內(nèi)其他研究結(jié)果，對(duì)青霉素的耐藥性的中介率也達(dá)到6.28%和 10.14%，因此需要加深研究和分析。

綜上所述，對(duì)呼吸道苛養(yǎng)菌的分離培養(yǎng)和藥敏試驗(yàn)，指導(dǎo)臨床中抗生素合理用藥，對(duì)藥物耐藥率的減低有促進(jìn)作用。