崔素萍，孫美玲,，崔麗琴，劉術(shù)明，張洪微

(1.黑龍江八一農(nóng)墾大學(xué)食品學(xué)院，黑龍江大慶163319；2.黑龍江貝因美乳業(yè)有限公司，黑龍江綏化151400)

0 引言

黑龍江省安達市的牧場是國內(nèi)優(yōu)質(zhì)草場，全國奶牛重點生產(chǎn)基地之一，具有得天獨厚的養(yǎng)牛和畜產(chǎn)品加工優(yōu)勢。

英國學(xué)者Biye chen（2014）[1]認為，原料乳成份和理化性質(zhì)的變化對乳品加工企業(yè)具有重要的意義。現(xiàn)有的研究證明，在一年的不同季節(jié)，牛乳中許多重要的成份和理化性質(zhì)都會發(fā)生改變[2-5]。

黑龍江省安達地區(qū)有獨特的氣候特點，每年有5個月的月平均溫度低于0℃，并且常年晝夜溫差大?；旧厦磕?0月至第二年的3月屬于枯草期，6月，7月，8月是盛草期。

本文擬對安達地區(qū)2010年1月至2013年12月的牛乳中乳蛋白質(zhì)、乳脂肪和乳糖質(zhì)量分數(shù)進行研究，分析原料乳中三大主要營養(yǎng)物質(zhì)的變化規(guī)律，以期為獲得優(yōu)質(zhì)的牛乳提供理論依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 原料乳樣品的采集

1.1.1 采樣時間

收集了2010年1月-2013年12月黑龍江省安達地區(qū)乳品廠的檢測數(shù)據(jù)。

1.1.2 采樣地點及采樣方法

供試原料乳來自黑龍江安達地區(qū)各牧場和奶站的健康無病奶牛的綜合奶樣。

乳樣按牧場及奶站為最小單位進行蛋白質(zhì)、脂肪及乳糖質(zhì)量分數(shù)的檢測。乳樣采集完畢后，將其混勻，現(xiàn)場采集1 d的乳樣，取250 mL乳樣裝入已消毒的取樣瓶中，密封并迅速冷卻，在冰盒內(nèi)冷藏，當(dāng)天運回實驗室，測定乳中的常規(guī)營養(yǎng)成分。最終取全天原料乳平均數(shù)據(jù)進行統(tǒng)計分析。

1.2 儀器與設(shè)備

FT-120多功能乳成份分析儀：FOSS Analyticai AS公司。

1.3 試驗方法

1.3.1 乳脂肪及乳蛋白質(zhì)質(zhì)量分數(shù)的測定方法

取搖勻后樣品50 mL，在水浴鍋中加熱至40℃左右，利用FT-120多功能乳成份分析儀，測定原料乳中脂肪及蛋白質(zhì)的質(zhì)量分數(shù)。

1.3.2 乳糖質(zhì)量分數(shù)的測定方法

按照GB5413.5-2010方法進行，采用液相色譜法對乳糖質(zhì)量分數(shù)進行檢測。

1.4 收集安達地區(qū)溫度資料

2010年1月至2013年12月的溫度資料，由安達市氣象站提供。

1.5 統(tǒng)計分析

利用SPSS12.0分析系統(tǒng)對數(shù)據(jù)進行統(tǒng)計分析。

2 結(jié)果與分析

2.1 安達地區(qū)溫度變化情況

統(tǒng)計2010年1月～2013年12月，每月的平均氣溫，結(jié)果如圖1所示。

圖1 2010年1月～2013年12月黑龍江省安達地區(qū)月平均溫度

由圖1可知，每年的1月、2月、3月、11月及12月，月平均溫度低于0℃，其它月平均溫度高于0℃；每年的1月、2月和12月，月平均溫度在-15～-22℃之間，其中，1月份月平均溫度最低為-21℃左右；每年的6月、7月、8月，月平均溫度在20～24℃之間，其中，7月份月平均溫度最高為24℃左右；2010年1月～2013年12月，安達地區(qū)溫度變化趨勢相同，各年間的溫度變化基本穩(wěn)定。

2.2 原料乳中蛋白質(zhì)、脂肪和乳糖質(zhì)量分數(shù)變化的特點

2.2.1 季節(jié)變化特點

2010年1月～2013年12月，原料乳中乳蛋白質(zhì)、乳脂肪和乳糖質(zhì)量分數(shù)季節(jié)變化情況如表1所示。

表1 2010年1月～2013年12月原料乳中乳蛋白質(zhì)、乳脂肪和乳糖質(zhì)量分數(shù)季節(jié)變化特點

由表1可知，2010年1月～2013年12月，原料乳中乳蛋白質(zhì)、乳脂肪和乳糖質(zhì)量分數(shù)在年間、季節(jié)間都存在著差異；從2010年至2013年，乳蛋白質(zhì)、乳脂肪的年平均質(zhì)量分數(shù)呈遞減趨勢，乳糖質(zhì)量分數(shù)呈增加趨勢。

乳蛋白質(zhì)質(zhì)量分數(shù)在每年的春季、夏季最低，春季和夏季間質(zhì)量分數(shù)無顯著差異，每年的秋季、冬季質(zhì)量分數(shù)顯著高于春、夏兩季，且秋季質(zhì)量分數(shù)最高；乳脂肪質(zhì)量分數(shù)在每年的春季、夏季顯著低于秋季、冬季，且夏季最低，秋季、冬季在全年最高，秋季、冬季兩季的質(zhì)量分數(shù)并無顯著差異；乳糖質(zhì)量分數(shù)的變化幾乎與乳蛋白質(zhì)、乳脂肪質(zhì)量分數(shù)變化相反。

2.2.2 乳蛋白質(zhì)質(zhì)量分數(shù)旬間變化規(guī)律

2010年1月～2013年12月原料乳中蛋白質(zhì)質(zhì)量分數(shù)旬間變化特點，結(jié)果如圖2所示。

由圖2可以看出，在2010年1月～2013年12月間，原料乳中蛋白質(zhì)質(zhì)量分數(shù)變化情況如下：

2010年全年，乳蛋白質(zhì)質(zhì)量分數(shù)大于3.0%，1月至6月上旬，蛋白質(zhì)質(zhì)量分數(shù)呈下降趨勢，6月中旬至12月下旬，蛋白質(zhì)質(zhì)量分數(shù)呈上升趨勢。其中，4月中旬至8月上旬，蛋白質(zhì)質(zhì)量分數(shù)在3.01%～3.09%間波動，且蛋白質(zhì)質(zhì)量分數(shù)全年最低；1月上旬至4月上旬、8月中旬至12月下旬，蛋白質(zhì)質(zhì)量分數(shù)在3.1%～3.2%間波動，9月下旬至12月下旬，蛋白質(zhì)質(zhì)量分數(shù)全年最高。

圖2 2010年1月～2013年12月原料乳中蛋白質(zhì)質(zhì)量分數(shù)旬間變化情況

2011年，1月至7月下旬，蛋白質(zhì)質(zhì)量分數(shù)呈下降趨勢，8月上旬至12月下旬，蛋白質(zhì)質(zhì)量分數(shù)呈上升趨勢。其中，2月上旬至8月下旬，蛋白質(zhì)質(zhì)量分數(shù)在2.96%～3.08%間波動，且6月中旬至7月下旬，蛋白質(zhì)質(zhì)量分數(shù)全年最低為2.96%～2.99%；1月、8月上旬至12月下旬，蛋白質(zhì)質(zhì)量分數(shù)大于3.0%；1月、9月上旬至12月下旬，蛋白質(zhì)質(zhì)量分數(shù)在3.1%～3.31%間波動，9月中旬至12月下旬，蛋白質(zhì)質(zhì)量分數(shù)全年最高為3.2%～3.31%。

2012年，除1月上旬，蛋白質(zhì)質(zhì)量分數(shù)為3.25%外，其它時間質(zhì)量分數(shù)全部低于3.1%。3月下旬至9月中旬，蛋白質(zhì)質(zhì)量分數(shù)小于3.0%，在2.87%～2.98%間波動，其它時間蛋白質(zhì)的質(zhì)量分數(shù)大于3.0%，小于3.1%。

2013年，2月上旬至8月中旬，蛋白質(zhì)質(zhì)量分數(shù)低于3.0%，1月、8月下旬至12月下旬，蛋白質(zhì)質(zhì)量分數(shù)大于于3.0%，且8月下旬至12月下旬，蛋白質(zhì)質(zhì)量分數(shù)在3.05%～3.24%波動，并呈上升趨勢，9月下旬至12月下旬，蛋白質(zhì)質(zhì)量分數(shù)全年最高為3.2%～3.24%。

綜上所述，在2010年1月～2013年12月間，原料乳中蛋白質(zhì)質(zhì)量分數(shù)變化在年間、季節(jié)間及每年的各旬之間都存在一定的差異。但總趨勢是，每年的8月中、下旬至12月，蛋白質(zhì)質(zhì)量分數(shù)成上升趨勢，而每年9月中下旬至12月下旬，蛋白質(zhì)質(zhì)量分數(shù)全年最高；6月至7月，蛋白質(zhì)質(zhì)量分數(shù)全年最低。不同年間的乳蛋白質(zhì)質(zhì)量分數(shù)變化趨勢基本相同。

2.2.3 乳脂肪質(zhì)量分數(shù)旬間變化規(guī)律

2010年1月～2013年12月原料乳中脂肪質(zhì)量分數(shù)旬間變化情況如圖3所示。

由圖3可以看出，在2010年1月～2013年12月間，原料乳中脂肪質(zhì)量分數(shù)變化情況如下：

2010年，1月至6月下旬，乳脂肪質(zhì)量分數(shù)呈下降趨勢，7月上旬至12月下旬，乳脂肪質(zhì)量分數(shù)呈上升趨勢。5月上旬至8月下旬，乳脂肪質(zhì)量分數(shù)小于3.5%，在3.34%～3.47%間波動，且全年最低，其它時間，乳脂肪質(zhì)量分數(shù)大于3.5%，在3.5%～3.76%波動。

圖3 2010年1月～2013年12月原料乳中脂肪質(zhì)量分數(shù)旬間變化情況

2011年，1月至7月中旬，乳脂肪質(zhì)量分數(shù)呈下降趨勢，7月下旬至12月下旬，乳脂肪質(zhì)量分數(shù)呈上升趨勢。4月中旬至9月上旬，乳脂肪質(zhì)量分數(shù)小于3.5%，在3.33%～3.49%間波動，且全年最低，其它時間，乳脂肪質(zhì)量分數(shù)大于3.5%，在3.5%～3.71%波動。

2012年，1月至7月下旬，乳脂肪質(zhì)量分數(shù)呈下降趨勢，8月上旬至12月下旬，乳脂肪質(zhì)量分數(shù)呈上升趨勢。3月下旬至9月上旬，乳脂肪質(zhì)量分數(shù)小于3.5%，在3.25%～3.48%間波動，且全年最低，其它時間，乳脂肪質(zhì)量分數(shù)大于3.5%，在3.5%～3.71%間波動。

2013年，1月至6月下旬，乳脂肪質(zhì)量分數(shù)呈下降趨勢，7月上旬至12月下旬，乳脂肪質(zhì)量分數(shù)呈上升趨勢。3月下旬至9月上旬，乳脂肪質(zhì)量分數(shù)小于3.5%，在3.25%～3.47%間波動，且全年最低，其它時間，乳脂肪質(zhì)量分數(shù)大于3.5%，在3.5%～3.67%間波動。

綜上所述，在2010年1月～2013年12月間，原料乳中乳脂肪質(zhì)量分數(shù)變化在年間及每年的各旬之間都存在一定的差異。但總趨勢是，每年的1月下旬至7月中、下旬，乳脂肪質(zhì)量分數(shù)呈下降趨勢，每年的8月至12月乳脂肪質(zhì)量分數(shù)成上升趨勢，而每年6月至7月，乳脂肪質(zhì)量分數(shù)全年最低。不同年間的乳蛋白質(zhì)質(zhì)量分數(shù)變化趨勢基本相同。

2.2.4 乳糖質(zhì)量分數(shù)變化規(guī)律

2010年～2013年原料乳乳糖質(zhì)量分數(shù)變化情況如圖4所示。

圖4 2010年1月～2013年12月原料乳中乳糖質(zhì)量分數(shù)變化情況

由圖4可知，2010年1月～2013年12月，原料乳乳糖質(zhì)量分數(shù)年間變化差異較大，基本與乳蛋白質(zhì)和乳脂肪質(zhì)量分數(shù)變化的趨勢相反，1月至8月下旬，乳糖質(zhì)量分數(shù)呈上升趨勢，6月、7月、8月乳糖質(zhì)量分數(shù)比較高。

2.3 乳蛋白質(zhì)、乳脂肪及乳糖質(zhì)量分數(shù)隨溫度變化的特點

每年中，乳蛋白質(zhì)、乳脂肪、乳糖質(zhì)量分數(shù)與溫度變化的關(guān)系如圖5～圖8所示。

圖5 2010年原料乳中乳蛋白質(zhì)、乳脂肪及乳糖質(zhì)量分數(shù)與溫度變化的關(guān)系

圖6 2011年原料乳中蛋白質(zhì)、脂肪及乳糖質(zhì)量分數(shù)與溫度變化的關(guān)系

圖7 2012年原料乳中乳蛋白質(zhì)、乳脂肪及乳糖質(zhì)量分數(shù)與溫度變化的關(guān)系

由圖5～圖8可知，原料乳中乳蛋白質(zhì)、乳脂肪質(zhì)量分數(shù)的變化趨勢與溫度的變化趨勢相反，在每年溫度比較高的6月、7月、8月（6月、7月、8月的平均溫度為21～24℃），乳蛋白質(zhì)、乳脂肪質(zhì)量分數(shù)基本最低；乳糖質(zhì)量分數(shù)的變化與溫度變化的關(guān)系比較復(fù)雜。

圖8 2013年原料乳中乳蛋白質(zhì)、乳脂肪及乳糖質(zhì)量分數(shù)與溫度變化的關(guān)系

3 討論

黑龍江省安達地區(qū)原料乳中，乳蛋白質(zhì)，乳脂肪和乳糖質(zhì)量分數(shù)在年間及每年季節(jié)間都有自身的變化規(guī)律。

近幾年來，隨著消費者對健康飲食關(guān)注度的提高，人們對牛乳的品質(zhì)特性關(guān)注度也在提高。國內(nèi)外學(xué)者已經(jīng)對氣候條件、飼養(yǎng)條件、飼養(yǎng)方法對牛乳中蛋白質(zhì)的氨基酸組成，脂肪酸組成進行了研究[6]，Heck(2009)[7]在研究荷蘭牛乳中營養(yǎng)成分與季節(jié)變化關(guān)系中發(fā)現(xiàn)，在一年中，乳糖質(zhì)量分數(shù)基本恒定，乳蛋白質(zhì)，乳脂肪的質(zhì)量分數(shù)季節(jié)變化明顯，在荷蘭，7月份蛋白質(zhì)和脂肪質(zhì)量分數(shù)都最低，分別為3.21%和4.10%，12月份乳蛋白質(zhì)質(zhì)量分數(shù)最高，為3.21%，1月份乳脂肪質(zhì)量分數(shù)最高為4.57%；Heck認為，這可能是不同的溫度和不同的飼料組成導(dǎo)致的，因為在冬季，牛會消耗更多的干飼料，而夏天，牛會吃過多的青草，并且在戶外的時間長。分析DairyCo網(wǎng)站上[8]提供的2009年～2013年英國牛的原料乳數(shù)據(jù)發(fā)現(xiàn)，英國牛乳的乳脂肪水平每年從1月份到7月份是下降的，在8月，9月份，急劇增加到4.2%，而在10月，11月，12月保持穩(wěn)定，乳蛋白質(zhì)與乳脂肪有相似的變化規(guī)律。英國科學(xué)家Biye chen（2014）[1]認為，原料乳中的乳蛋白質(zhì)，乳脂肪有季節(jié)變化規(guī)律。Larsen（2014）[9]研究也發(fā)現(xiàn)，季節(jié)的變化影響乳脂肪的質(zhì)量分數(shù)及組成。

大量研究表明，影響原料乳成份及成份組成的因素有很多，其中，環(huán)境因素、季節(jié)因素及飼料是影響牛乳產(chǎn)量和品質(zhì)的重要因素[10]。季節(jié)的變化也會造成牛乳中主要營養(yǎng)成份的改變[11,12]。夏季的高溫、高濕，奶牛會產(chǎn)生熱應(yīng)激[13]，奶牛的熱應(yīng)激是造成牛乳品質(zhì)下降的一個重要因素，奶牛出現(xiàn)熱應(yīng)激后，奶牛采食量下降，牛乳產(chǎn)量下降，乳蛋白質(zhì)率和乳脂率下降。而當(dāng)秋季溫度下降后，奶牛的熱應(yīng)激減少，乳蛋白質(zhì)率和乳脂率就會上升[5]。瑞典學(xué)者研究表明，夏季牛乳樣品中的脂肪質(zhì)量分數(shù)比較低，并且牛乳中成份的組成與氣候條件和飼料成份有很大關(guān)系[14]。

飼料的變化也能造成牛乳中主要營養(yǎng)成份的改變，夏季，牛主要以新鮮的青綠飼料為食，冬季，以青貯飼料和農(nóng)作物秸稈為主。在一年四季中，牧場對奶牛精飼料的補給相對平衡，而粗飼料的補給完全取決于季節(jié)性變化，粗飼料的攝入量與牛乳品質(zhì)成正相關(guān)。另外，夏季，牛飲水過多，也會導(dǎo)致乳脂率下降[15]。DairyCo（2015）[16]網(wǎng)站的一項調(diào)查數(shù)據(jù)表明，從1998年至2014年間，英國每年蛋白質(zhì)的平均質(zhì)量分數(shù)略呈下降趨勢，1998年、1999年，蛋白質(zhì)質(zhì)量分數(shù)都分別是3.30%左右，但是從2008年至2014年，蛋白質(zhì)質(zhì)量分數(shù)在3.26%～3.28%間波動。

在黑龍江省安達地區(qū)，進入春季以后，氣溫逐漸回暖，4月初，青草逐漸長出，奶牛飼料中鮮草比例逐漸增大，奶牛每日攝水量逐漸增多，產(chǎn)奶量相應(yīng)增加，牛乳中乳蛋白質(zhì)和乳脂肪質(zhì)量分數(shù)下降明顯，夏季，是盛草期，奶牛攝入青草的比例最大，乳蛋白質(zhì)和乳脂肪的質(zhì)量分數(shù)偏低；從9月開始，安達地區(qū)逐漸進入枯草期，奶牛攝入青草的比例減少，干草比例加大，乳蛋白質(zhì)和乳脂肪的質(zhì)量分數(shù)逐漸升高，隨著溫度的逐漸降低，蛋白質(zhì)和脂肪質(zhì)量分數(shù)又表現(xiàn)出明顯的上升趨勢，另外，隨著氣溫的迅速下降，奶牛的飲水量降低，產(chǎn)奶量相應(yīng)下降，導(dǎo)致牛乳中蛋白質(zhì)和脂肪相對質(zhì)量分數(shù)逐漸上升，11月至第二年的3月，奶牛飼料的構(gòu)成比例基本不變。

4 結(jié)論

2010年1月至2013年12月的數(shù)據(jù)表明：

（1）黑龍江省安達地區(qū)原料乳中乳蛋白質(zhì)、乳脂肪、乳糖質(zhì)量分數(shù)，在年間及每年的季節(jié)間都存在著差異，并且，從2010年到2013年，乳蛋白質(zhì)、乳脂肪質(zhì)量分數(shù)每年呈遞減趨勢；

（2）每年中，乳蛋白質(zhì)、乳脂肪質(zhì)量分數(shù)的變化趨勢與溫度的變化趨勢相反；

（3）不同年間的乳蛋白質(zhì)質(zhì)量分數(shù)、乳脂肪質(zhì)量分數(shù)變化趨勢基本相同?；旧显诿磕甑?月至7月，乳蛋白質(zhì)、乳脂肪的質(zhì)量分數(shù)呈下降趨勢，8月至12月下旬，乳蛋白質(zhì)、乳脂肪質(zhì)量分數(shù)呈上升趨勢。乳蛋白質(zhì)質(zhì)量分數(shù)在每年的春季、夏季最低，春季和夏季間無顯著差異（P＜0.05水平），每年的秋季、冬季變化顯著（P＜0.05水平）高于春、夏兩季，且秋季質(zhì)量分數(shù)最高；在每年的春季、夏季乳脂肪質(zhì)量分數(shù)顯著（P＜0.05水平）低于秋季、冬季，且夏季最低，秋季、冬季在全年最高，秋季、冬季兩季的質(zhì)量分數(shù)并無顯著差異；乳糖質(zhì)量分數(shù)的變化幾乎與乳蛋白質(zhì)、乳脂肪質(zhì)量分數(shù)變化相反。

黑龍江省安達地區(qū)乳品生產(chǎn)企業(yè)可以參考該地區(qū)近4年原料乳中主要營養(yǎng)成分質(zhì)量分數(shù)的變化情況，適時調(diào)整產(chǎn)品的種類和產(chǎn)品的配方。另外，為了保證原料乳的品質(zhì)及安全，乳品加工企業(yè)應(yīng)該建立自己的奶源基地，科學(xué)飼養(yǎng)，科學(xué)管理，使生牛乳全年高質(zhì)量生產(chǎn)。

[1]BIYE C,MICHAEL J L,ALISTAIR S G.Effect of Seasonal Variation on the Composition and Properties of Raw Milk Destined for Process?ing in the UK[J].Food Chemistry,2014,158:216-223.

[2]DairyCo.org.uk Market information,supply&production,2013.URL http://www.dairyco.org.uk/market-information/supply-pro?duction/composition-andhygiene/uk-milk-composition/ Accessed 04.04.2013.

[3]程蕾,王肆玖,劉曉華,等.乳成分隨季節(jié)的變化規(guī)律及其相關(guān)性研究[J].湖北農(nóng)業(yè)科學(xué),2011,50(11):2280-2286.

[4]SCHWENDEL B H,WESTER T J,MOREL P C H,et al.Invited review:Organic and Conventionally Produced milk-An Evaluation of Factors Influencing Milk Composition[J].Journal of Dairy Science,2015,98（2）:721-746.

[5]常玲玲,楊章平,陳仁金,等.南方集約化飼養(yǎng)條件下荷斯坦奶牛乳脂率和乳蛋白率變化規(guī)律的初步研究[J].中國畜牧雜志,2010,46(1):43-47.

[6]MAURICE-VAN EIJNDHOVEN M H T,HIEMSTRA S J,CA?LUS M P L,et al.Short communication:Milk Fat Composition of 4 Ccattle Breeds in the Netherlands[J].Journal of Dairy Science,2011,94(2):1021-1025.

[7]HECK J M L,VAN VALENBERG H J F,DIJKSTRA J,et al.Sea?sonal Variation in the Dutch Bovine Raw Milk Composition[J].Jour?nal of Dairy Science,2009,92(10):4745-4755.

[8]DairyCo.Market information,supply&production,2013.URL http://www.dairyco.org.uk/market information/supply production/com?position and hygiene/uk milk composition.

[9]LARSEN M K,ANDERSEN K K,KAUFMANN N,et al.Seasonal Variation in the Composition and Melting Behavior of Milk Fat[J].Journal of Dairy Science,2014,97（8）:1-10.

[10]LIM J M,NESTOR K E J,KUNG L J.The Effect of Hybrid Type and Dietary Proportions of Corn Silage on the Lactation Performance of High-Producing Dairy Cows[J].Journal of Dairy Science,2015,98（2）:1195-1203.

[11]崔雯.季節(jié)對牛乳成份的影響[J].乳業(yè)科學(xué)與技術(shù),2009,（1）:39-41.

[12]劉鋒,金曙光,馬劍波.內(nèi)蒙古不同地區(qū)不同季節(jié)牛乳常規(guī)營養(yǎng)成分的研究[J].中國畜牧獸醫(yī),2009,36（3）:131-133.

[13]LAMBERTZ C,SANKER C,GAULY M.Climatic Effects on Milk Production Traits and Somatic Cell Score in Lactating Holstein-Frie?sian Cows in Different Housing Systems[J].Journal of Dairy Science,2014,97（1）:319-329.

[14]LARSEN M K,NIELSEN J H,BUTLER G,M.K,Nielsen J.H,But?ler G,etal.Milk Quality as Affected by Feeding Regimens in a Coun?try with Climatic Variation[J].Journal of Dairy Science,2010,93(7):2863-2873.

[15]賈平元.夏季奶牛采食量、乳脂率、乳蛋白率異常的原因以及防范措施[J].畜牧與飼料科學(xué),2006,(4):7-8.

[16]DairyCo.Market Iinformation,supply&production,2015.URL http://www.dairyco.org.uk/resources library/market information/supply production/compositional quality.