王 弦，李 梅，吳 強(qiáng)，吳正升

(1.安徽醫(yī)科大學(xué)基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院病理解剖學(xué)教研室，安徽合肥 230032;2.安徽醫(yī)科大學(xué)第二附屬醫(yī)院病理科，安徽合肥 230601)

近年來(lái)，隨著我國(guó)與國(guó)外在教育方面的交流不斷深入，外國(guó)留學(xué)生到我國(guó)接受高等教育的人數(shù)日漸增多，其中也包括相當(dāng)數(shù)量的醫(yī)學(xué)專(zhuān)業(yè)留學(xué)生。留學(xué)生教學(xué)成為各大高校面臨的一大挑戰(zhàn)，也對(duì)教師的教學(xué)水平和教學(xué)質(zhì)量提出了更高的要求［1］。病理學(xué)是高等醫(yī)學(xué)院校的一門(mén)重要的形態(tài)學(xué)學(xué)科，是基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)與臨床醫(yī)學(xué)的橋梁性學(xué)科，在學(xué)習(xí)過(guò)程中，必須以解剖學(xué)、組織學(xué)、生理學(xué)等課程為基礎(chǔ)，是醫(yī)學(xué)生在進(jìn)入專(zhuān)業(yè)課程之前的必修科目［2］。傳統(tǒng)的病理學(xué)實(shí)驗(yàn)教學(xué)以單張的病例切片為基礎(chǔ)，講述的是機(jī)體在病變狀態(tài)下的改變，而在實(shí)踐中，我們發(fā)現(xiàn)很多學(xué)生在學(xué)習(xí)病理學(xué)時(shí)，相應(yīng)基礎(chǔ)知識(shí)很多已經(jīng)遺忘，甚至很多正常的組織形態(tài)也不能夠識(shí)別［3］。加之在留學(xué)生教學(xué)中，絕大多數(shù)留學(xué)生來(lái)華之前未接受過(guò)醫(yī)學(xué)教育或培訓(xùn)，專(zhuān)業(yè)理論基礎(chǔ)較差，入學(xué)時(shí)的水平參差不齊，所以采用傳統(tǒng)的“填鴨式”教學(xué)在留學(xué)生教學(xué)中效果就顯得非常的不好。為此，我們擬將病理實(shí)驗(yàn)課教學(xué)大綱里常見(jiàn)疾病按照人體系統(tǒng)分組，將每一組的疾病和正常組織制作成同一張切片，使用這種新型的教學(xué)切片可以使學(xué)生在認(rèn)識(shí)疾病的形態(tài)特點(diǎn)的同時(shí)，可以復(fù)習(xí)到正常的組織結(jié)構(gòu)，起到舉一反三的作用。

1 材料和方法

1.1 樣本的收集和處理 收集2012—2014年安徽醫(yī)科大學(xué)第二附屬醫(yī)院病理科人體正常肺、肝、胃、直腸、皮膚、乳腺等組織器官及相應(yīng)病變共22例(見(jiàn)表1)，4%中性緩沖福爾馬林固定18～24 h，3～5 mm厚度取材。

1.2 普通蠟塊和切片的制作 將收集到的組織進(jìn)行常規(guī)的脫水、透明、浸蠟和包埋制成蠟塊，再將所有蠟塊切片(3μm厚)，蘇木素—伊紅(HE)染色:(1)二甲苯(Ⅰ)10 min，(2)二甲苯(Ⅱ)10 min，(3)二甲苯∶無(wú)水乙醇(1∶1)2 min，(4)100%乙醇(Ⅰ)3 min，(5)100%乙醇(Ⅱ)3 min，(6)80%乙醇 3 min，(7)蒸餾水 3 min，(8)蘇木精液染色5 min，(9)流水稍洗去蘇木精液1～3 s，(10)1%鹽酸乙醇1～3 s，(11)稍水洗 10 ～30 s，(12)蒸餾水過(guò)洗 1 ～2 s，(13)0.5% 伊紅液染色1～3 min，(14)蒸餾水稍洗 1～2 s，(15)80%乙醇稍洗 1～2 s，(16)95%乙醇(Ⅰ)2～3 s，(17)95%乙醇(Ⅱ)3 ～5 s，(18)無(wú)水乙醇(Ⅰ)2 min，(19)無(wú)水乙醇(Ⅱ)2 min，(20)二甲苯(Ⅰ)2 min，(21)二甲苯(Ⅱ)2 min，(22)中性樹(shù)膠封固。

表1 實(shí)驗(yàn)樣本組織的收集

1.3 典型病變區(qū)域的定位 在光鏡下觀察所有切片，對(duì)正常組織和病變組織上典型的圖像區(qū)域進(jìn)行標(biāo)記，然后對(duì)應(yīng)相應(yīng)的組織蠟塊，用記號(hào)筆圈下區(qū)域。

1.4 教學(xué)對(duì)照蠟塊的設(shè)計(jì)和制作 溶解之前制作的組織蠟塊，將組織中之前記號(hào)筆圈下的區(qū)域用鋒利的刀片切下，然后按照“正常－病變(1～3)”的順序?qū)⒉煌到y(tǒng)的對(duì)照組織包埋在一個(gè)蠟塊里。

1.5 教學(xué)對(duì)照蠟塊的切片和染色 不同系統(tǒng)組的對(duì)照蠟塊制作完成以后，常規(guī)切片3μm，撈片時(shí)注意方向，從載玻片的標(biāo)簽端開(kāi)始，按照“正?！∽?1——病變2——病變3”的順序撈片。常規(guī)HE染色，中性樹(shù)膠封片。待樹(shù)膠完全干燥以后，用記號(hào)筆在切片組織的上方標(biāo)記序號(hào)，以便查閱。

2 結(jié)果

肉眼觀察所設(shè)計(jì)的6組切片，排列較為整齊、美觀，組織大小基本一致，較為規(guī)整。鏡下觀察切片，染色適中，蘇木素伊紅對(duì)比鮮明，組織結(jié)構(gòu)良好，病變區(qū)域典型，正常組織與各種疾病對(duì)比性強(qiáng)，且可辨別度高(以直腸組為例，見(jiàn)圖1)。根據(jù)標(biāo)簽和切片上的編號(hào)，可以快速的查閱到疾病的名稱(chēng)。

3 討論

病理學(xué)是連接基礎(chǔ)與臨床的橋梁學(xué)科，是英文授課臨床醫(yī)學(xué)專(zhuān)業(yè)(MBBS)留學(xué)生的必修課。作為一門(mén)具有高度實(shí)踐性的形態(tài)學(xué)科，病理課的教學(xué)有它的優(yōu)勢(shì)和新的問(wèn)題。優(yōu)勢(shì)在于:形態(tài)學(xué)變化比較客觀和直觀，實(shí)驗(yàn)課內(nèi)容和理論知識(shí)相輔相成，實(shí)驗(yàn)學(xué)時(shí)較多，理論課學(xué)習(xí)之后通過(guò)實(shí)驗(yàn)課對(duì)大體標(biāo)本和組織學(xué)切片以及實(shí)物圖片、模式圖等病理形態(tài)的觀察，可以進(jìn)一步加深對(duì)理論知識(shí)的理解和鞏固。病理學(xué)的問(wèn)題在于:一方面，病理學(xué)講述的是機(jī)體在病變狀態(tài)下的改變，因此要求學(xué)生有正常機(jī)體的結(jié)構(gòu)、形態(tài)和生理特點(diǎn)的扎實(shí)基礎(chǔ)，即病理學(xué)的學(xué)習(xí)要以解剖學(xué)、組織學(xué)和生理學(xué)的知識(shí)為基礎(chǔ)，而在實(shí)踐中，上述基礎(chǔ)學(xué)科均在病理學(xué)教學(xué)的前一個(gè)學(xué)期完成，學(xué)生在學(xué)習(xí)病理學(xué)時(shí)，相應(yīng)基礎(chǔ)知識(shí)很多已經(jīng)遺忘;另一方面，病理學(xué)的學(xué)習(xí)是為臨床學(xué)科的學(xué)習(xí)打下基礎(chǔ)，是為臨床學(xué)科服務(wù)，而學(xué)生在學(xué)習(xí)病理學(xué)時(shí)，尚未涉及臨床學(xué)科，導(dǎo)致學(xué)生不知道學(xué)習(xí)病理學(xué)的意義和目的所在，無(wú)法做到有效的理解和消化。因此，在傳統(tǒng)教學(xué)中基礎(chǔ)學(xué)科、病理學(xué)和臨床學(xué)科三者出現(xiàn)明顯脫節(jié)，又由于留學(xué)生的教育背景、文化差異、語(yǔ)言習(xí)慣等差異的因素，使得傳統(tǒng)的教育方式則不能用在留學(xué)生的教學(xué)方面［4］。

在本文里，我們探索采用將疾病組織和正常組織放在一張切片上，而且根據(jù)教學(xué)大綱的安排，對(duì)疾病進(jìn)行分類(lèi)分組，具有以下幾個(gè)優(yōu)點(diǎn):(1)留學(xué)生在觀察某一種疾病特點(diǎn)的同時(shí)，可以舉一反三，不僅復(fù)習(xí)了之前《組織學(xué)》中學(xué)習(xí)到的正常組織的形態(tài)特點(diǎn)，又可以和本系統(tǒng)的其它疾病的形態(tài)特點(diǎn)進(jìn)行對(duì)比，可以更好的理解和記憶，比較適合于組織學(xué)基礎(chǔ)較差的學(xué)生;(2)將組織放在同一張切片上，大大節(jié)省了教學(xué)資源，比如本應(yīng)提供28張切片的教學(xué)內(nèi)容，現(xiàn)在只需要7張切片，一方面節(jié)約了制片成本，另一方面使得在教學(xué)過(guò)程中更加簡(jiǎn)潔明朗，留學(xué)生很容易根據(jù)標(biāo)簽和編號(hào)就可以查閱到疾病的名稱(chēng)，并且大大節(jié)省了教學(xué)資源的儲(chǔ)備空間;(3)采用對(duì)照教學(xué)切片的方法，是借鑒了組織微陣列的實(shí)驗(yàn)技術(shù)方法［5］，但是較組織微陣列而言，因不需要借助組織芯片儀，本方法更為簡(jiǎn)便，可以在大多數(shù)的教學(xué)單位進(jìn)行開(kāi)展;(4)由于切片和染色是在一張切片上進(jìn)行的，所以有效的避免了因不同批次切片和染色造成的誤差;(5)由于每一塊組織的面積較小，而且是經(jīng)過(guò)挑選之后的典型區(qū)域，所以學(xué)生在觀察切片的時(shí)候更容易找到病變結(jié)構(gòu)。

但是，由于本方法屬于教學(xué)探索階段，難免會(huì)有方法上的局限性:(1)由于單個(gè)疾病在切片上的面積較小，因而所攜帶的信息量較小，對(duì)于一些需要觀察連續(xù)病變的疾病或者多層結(jié)構(gòu)的疾病，往往不能反應(yīng)全面，如動(dòng)脈粥樣硬化中的膽固醇結(jié)晶等結(jié)構(gòu);(2)從制片技術(shù)角度來(lái)說(shuō)，對(duì)于一些較為致密的組織或者含有脂肪的組織，在制作成較大的對(duì)照蠟塊時(shí)，較難切片，并且同一系統(tǒng)不同疾病的組織由于質(zhì)地的不同，往往切片會(huì)有不完整或者皺褶，如子宮頸組織，乳腺組織等［6］;(3)從教學(xué)切片美觀和技術(shù)處理難度的角度來(lái)看，多個(gè)組織包埋在一個(gè)蠟塊里，不容易將它們包埋在一個(gè)底面上，并且有時(shí)不能保證平整，所以我們?cè)谥谱鹘虒W(xué)切片時(shí)，盡量避免這個(gè)問(wèn)題，同時(shí)切片應(yīng)盡可能修到最大面，保證組織的完整性和美觀。所以此法我們將繼續(xù)研究并進(jìn)一步改進(jìn)。

基于以上的特點(diǎn)，我們認(rèn)為將疾病與正常組織對(duì)照切片運(yùn)用在留學(xué)生的病理學(xué)實(shí)驗(yàn)課教學(xué)上，具有效率高、表述準(zhǔn)確、簡(jiǎn)便易行、舉一反三、可比性強(qiáng)、較為節(jié)省等優(yōu)點(diǎn)，可以提高我校的留學(xué)生教學(xué)質(zhì)量，并且此方法值得改進(jìn)與推廣，具有一定的應(yīng)用前景。

［1］裴 靜，王本忠，劉 弋.PBL與傳統(tǒng)教學(xué)結(jié)合在留學(xué)生普外科教學(xué)中的應(yīng)用［J］.安徽醫(yī)藥，2014，18(12):2419－2421.

［2］吳正升，王曉楠，王超群，等.組織微陣列結(jié)合顯微數(shù)碼互動(dòng)教學(xué)系統(tǒng)在病理實(shí)驗(yàn)教學(xué)中的應(yīng)用［J］.安徽醫(yī)藥，2010，14(10):1239－1240.

［3］薛 花，吳 強(qiáng).激發(fā)學(xué)生學(xué)習(xí)興趣，提高病理學(xué)教學(xué)質(zhì)量［J］.安徽醫(yī)藥，2005，9(1):72－73.

［4］宋 櫻，項(xiàng)峰鋼，李玉軍，等.留學(xué)生病理學(xué)教學(xué)實(shí)驗(yàn)與探索［J］.山西醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào)(基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)教育版)，2010，12(1):83－85.

［5］吳正升，吳 強(qiáng)，丁向東，等.組織微陣列在病理學(xué)實(shí)驗(yàn)教學(xué)中應(yīng)用初探［J］.醫(yī)學(xué)教育與探索，2008，7(8):814－816.

［6］趙 鵑，潘志芹，李志燕.影響病理切片質(zhì)量的因素及糾正方法［J］.診斷病理學(xué)雜志，2008，15(1):F0002.