廖美林　馬作江

摘 要：建立了高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法同時(shí)測定蔬菜中敵敵畏、甲胺磷、乙酰甲胺磷、甲拌磷、氧化樂果、二嗪農(nóng)、呋喃丹、樂果、甲基毒死蜱、毒死蜱、甲基對硫磷、對硫磷12種農(nóng)藥殘留的檢測方法，分別選取黃瓜、菠菜和大蔥等蔬菜樣品，經(jīng)過0.1%醋酸乙腈提取、濃縮以及分散萃取，在電噴霧離子源ESI正離子模式下多重反應(yīng)監(jiān)測（MRM）對所選取的蔬菜農(nóng)藥殘留進(jìn)行檢測。最終測定結(jié)果顯示，該方法簡便靈敏，準(zhǔn)確快速，檢出限低，回收率達(dá)到70%以上，可實(shí)現(xiàn)對蔬菜種多種農(nóng)藥同時(shí)快速測定。

關(guān)鍵詞：高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜 蔬菜 農(nóng)藥殘留

中圖分類號：TS207 文獻(xiàn)標(biāo)識碼：A 文章編號：1674-098X（2015）09（c）-0117-02

我國屬于農(nóng)業(yè)生產(chǎn)大國，面臨14億人的飲食需求，為保證農(nóng)副產(chǎn)品的有效成長，使用農(nóng)藥也是一道有效的工序。伴隨著廣泛的使用農(nóng)藥，在蔬菜出口中也因?yàn)橛袡C(jī)農(nóng)藥殘留問題導(dǎo)致了大量的經(jīng)濟(jì)損失?，F(xiàn)在由于我國的農(nóng)藥種類比較繁多，如果單一的進(jìn)行一項(xiàng)一項(xiàng)的檢測，那么就會耗費(fèi)大量的人力物力，且效率低下[1-2]，因此在近年來，通過基質(zhì)同時(shí)進(jìn)行多種農(nóng)藥殘留的檢測方法，即簡單，有顯著有效的解決了這一問題。該文采用液相色譜、質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)同時(shí)檢測蔬菜中12農(nóng)藥殘留，結(jié)果準(zhǔn)確可靠，提高了分析效率。

1 實(shí)驗(yàn)部分

1.1 儀器和試劑

高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜聯(lián)用儀Agilent 1290/6460 LC/MS/MS （ESI源），Agilent公司；氮?dú)獍l(fā)生器NM32LA，PEAK公司；電子天平AUY220，島津公司；Milli-Q超純水器，美國Milli-Q公司；超聲波清洗儀SB25-12D，寧波新芝生物科技股份有限公司；氮?dú)獯蹈蓛xN-EVAP， 美國Organomation公司；旋渦混合器XW-80A，上海滬西分析儀器廠有限公司。

敵敵畏（Dichlorvos）、甲胺磷（Methamidophos）、乙酰甲胺磷（Acephate）、甲拌磷（Phorate）、氧化樂果（Omethoate）、二嗪農(nóng)（Diazinon）、呋喃丹（Carbofuran）、樂果（Dimethoate）、甲基毒死蜱（Chlorpyrifos_methyl）、毒死蜱（Chlorpyrifos）、甲基對硫磷（Parathion-methyl）、對硫磷（Parathion-ethyl）購自德國Dr.Ehrenstorfer公司；甲醇、乙腈、甲酸、乙酸為質(zhì)譜純，購自德國Merck公司；0.22 μm微孔濾膜購自Ameritech公司。

1.2 溶液配制

分別取一定的農(nóng)藥標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行混合溶于甲醇中，配置好1g/L的儲備溶液，將其放置到于4℃冰箱進(jìn)行保存。臨用前將標(biāo)準(zhǔn)儲備液用甲醇溶液逐步的進(jìn)行稀釋，然后達(dá)到相應(yīng)的混合工作標(biāo)準(zhǔn)使用液。

1.3 樣品制備處理

蔬菜樣品經(jīng)組織搗碎機(jī)制成勻漿后，分別稱取樣品20 g于離心管中，加入50 mL0.1%的乙酸-乙腈溶液渦旋混勻提取，對提取液加入3 g的無水硫酸鎂和1 g無水乙酸鈉進(jìn)行搖勻靜置10 min。吸取10 mL上清液，在45℃的水浴環(huán)境下進(jìn)行氮?dú)獯蹈?。加入甲醇進(jìn)行渦旋溶解定容至5 mL容量瓶中，最后加入石墨進(jìn)行渦旋脫色，過0.22 μm有機(jī)相微孔濾膜于進(jìn)樣瓶中。

1.4 儀器分析條件

色譜條件色譜柱：Agilent ZORBAX SB–C18型（50 mm×2.1 mm，1.8 μm）；流動(dòng)相A：0.1%甲酸溶液，流動(dòng)相B：甲醇；梯度洗脫：柱溫：30℃；進(jìn)樣量：2.0 μL；流速為0.3 mL/min。

質(zhì)譜條件 離子源：電噴霧離子源ESI：掃描方式：正離子掃描；檢測方式：選擇反應(yīng)檢測（MRM）；干燥氣溫度（Gas Temp）：325 ℃；干燥氣流速（Gas Flow）：10 L/min；霧化器壓力（Nebulizer）：20 psi；鞘氣溫度（Sheath Gas Temp）：300 ℃；鞘氣流速（Sheath Gas Flow）：12 L/min；毛細(xì)管電壓（Capillary）：3500 V；高純氮?dú)猓杭兌炔坏?9.999%，采用MRM模式外標(biāo)法定量。12種農(nóng)藥標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)總離子流圖。（見表1）

2 實(shí)驗(yàn)結(jié)果

通過液相色譜分離技術(shù)進(jìn)行分離，經(jīng)質(zhì)譜分析參數(shù)進(jìn)行數(shù)據(jù)的截取分析，對于整體的溶液內(nèi)結(jié)構(gòu)來說，都能夠給與很好的保留。在通過色譜分析，就能夠分析出其中的數(shù)據(jù)信息了，分別對0.25，0.50，1.0，2.0 mg/L的標(biāo)準(zhǔn)混合液進(jìn)行色譜分析，得到各種農(nóng)殘的的最低檢出限、準(zhǔn)曲線和回收率。（見表2）

3 討論

3.1 質(zhì)譜條件優(yōu)化

在對農(nóng)藥標(biāo)準(zhǔn)品純度等相關(guān)因素作綜合考慮之后，為避免發(fā)生離子干擾，在實(shí)驗(yàn)過程中需要選用一根短C18優(yōu)化柱，對所選取的農(nóng)藥單標(biāo)進(jìn)樣并實(shí)施優(yōu)化柱粗分離。對每種農(nóng)藥的母離子和子離子采用全掃描及子離子掃描模式確定；還要對碰撞電壓以及碰撞能量等相關(guān)參數(shù)實(shí)施優(yōu)化，以此對每種物質(zhì)特征進(jìn)行確定，通常情況下豐度較高的是定量離子，反之則為定性離子。在本次研究中質(zhì)譜數(shù)據(jù)所采用的分析方式為MRM模式，任何一種分析物均會有一個(gè)時(shí)間窗口，從而最大化提高每個(gè)離子的駐留時(shí)間，從而提高檢測方法的信噪比，這一模式和傳統(tǒng)檢測方式相比，不用將采集時(shí)間窗口截取以此對離子駐留時(shí)間實(shí)施增加，也就能夠?qū)鹘y(tǒng)模式中須卻確保足夠分離度將采集時(shí)間窗口進(jìn)行截取，和快速測定之間的矛盾有效處理[3-4]。在相同色譜和質(zhì)譜條件下，也就能夠?qū)崿F(xiàn)MRM和Dynamic MRM采集方式對比。

3.2 樣品的提取與凈化分析

筆者這里主要是針對12種農(nóng)藥進(jìn)行的分析，由于他們的溶解性有著很大的區(qū)別，所以在通過提取儀器進(jìn)行提取的過程中，需要有效的控制時(shí)間，而同時(shí)根據(jù)溶劑的性質(zhì)以及農(nóng)藥的物理性質(zhì)，就基質(zhì)的特點(diǎn)方面，也需要進(jìn)行分析。乙腈是農(nóng)藥提取的最常用溶劑，對于各種有機(jī)農(nóng)藥的提取效果都十分明顯[5]。而由于乙腈的沸點(diǎn)比較高，在進(jìn)行濃縮的過程中，就會浪費(fèi)大量的時(shí)間，所以在進(jìn)行提取的時(shí)候，往往至提取有機(jī)氯時(shí)采用，丙酮-石油醚則作為主要的混合溶劑針對這些其他的農(nóng)藥進(jìn)行溶劑提取[6]。

在進(jìn)行蔬菜樣品的含水量提取中，我們針對的是干燥樣品的農(nóng)藥殘留提取，這些樣品的含量比較多，所以也有必要除去水分以后再進(jìn)行提取。

3.3 色譜條件和質(zhì)譜條件的選取

我們在進(jìn)行色譜的提取的過程中，在針對質(zhì)譜條件的優(yōu)化中就比較容易對農(nóng)藥中產(chǎn)生的有機(jī)離子部分進(jìn)行選取，這對于整體的線性范圍和標(biāo)準(zhǔn)曲線方面，都能夠給與很好的檢測。通過這一方法進(jìn)行有機(jī)提取以后，就可以進(jìn)行三者之間的對比，然后確定其中殘留農(nóng)藥的種類和殘留農(nóng)藥的含量，從確定所檢測的農(nóng)產(chǎn)品是否殘留過多的農(nóng)藥。不過這個(gè)檢測的結(jié)果也有一定的弊端，那就是對于檢測的結(jié)果仍存在一定的下限，那就是5μg/L。

3.4 農(nóng)藥回收和蔬菜樣品分析

選擇的黃瓜、菠菜和大蔥，在其機(jī)制中對不同水平的回收檢測標(biāo)準(zhǔn)中，都有精確的數(shù)據(jù)，對于黃瓜的28種農(nóng)藥檢測結(jié)果也證明其回收率達(dá)到了75%～103%精密度小于14.3%；菠菜回收率70%～108%，精密度小于15.0%；大蔥回收率為70%～100%，精密度小于14.7%?？梢砸姷眠@種方法對于檢測農(nóng)藥的殘留上，是能夠滿足我們現(xiàn)在的研究需求的。

3.5 樣品分析

將這種方法應(yīng)用到其他的蔬菜中，進(jìn)行豌豆、胡蘿卜、花菜、西蘭花等20多種市場蔬菜調(diào)查，其中檢測到多種蔬菜在不同程度上都有一定的農(nóng)藥殘留。集中較多的是菠菜、豌豆、蘿卜、黃瓜等無包衣農(nóng)副產(chǎn)品。因?yàn)槠渖L結(jié)構(gòu)的關(guān)系，這些蔬菜在生長的過程中無法避免的接受到了農(nóng)藥的噴灑，采摘期，也沒有得到及時(shí)的分解，這就導(dǎo)致在銷售的過程中，出現(xiàn)了農(nóng)藥的殘留[7-8]。

4 結(jié)語

通過液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法進(jìn)行蔬菜的多種農(nóng)藥殘留研究過程中，驗(yàn)證到這種方法對于進(jìn)行農(nóng)副產(chǎn)品的農(nóng)藥殘留的提取效果是明顯的，同時(shí)對于分析其中殘留的農(nóng)藥成分方面，也能夠十分精確地完成農(nóng)藥的定向研究。

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