余維良 鄭明海 方國平 余承勇

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秀珍菇固體專用菌種液化生產(chǎn)自動接種技術與固液兩態(tài)菌種的出菇比較

余維良1鄭明海1方國平2余承勇1

（1.開化縣農(nóng)業(yè)科學研究所，浙江 開化 324300；2.浙江菇老爺食品有限公司，浙江 開化 324300）

介紹秀珍菇液化菌種生產(chǎn)自動接種技術，其工藝流程為專用固體菌種（菌絲塊）→菌種液化（原始液制備）→二級液化工藝→流水線自動接種→菌袋菌絲培養(yǎng)→開袋出菇→采收?？偨Y(jié)液化菌種袋與固體菌種袋出菇的比較試驗結(jié)果：液化種菌袋比固體種菌袋的菌絲粗壯，結(jié)實；栽培袋成品率液化種為98.8%，固體種為93.5%；液化種的秀珍菇總產(chǎn)量比固體種提高4.7%。比較指出兩種接種方式的接種效率、菌種成本和產(chǎn)量質(zhì)量的差異性。

秀珍菇；液化菌種；固體菌種；自動接種；比較試驗

目前，我國食用菌生產(chǎn)中普遍采用的傳統(tǒng)三級固體菌種繁育工藝，生產(chǎn)效率低，培養(yǎng)周期長，菌種染菌率高，無法突破手工化、作坊式生產(chǎn)模式，使規(guī)模企業(yè)與散戶制種處在同一競爭平臺，是造成目前食用菌生產(chǎn)安全、質(zhì)量事故頻發(fā)的根源，也是食用菌企業(yè)效益欠佳的主要原因。在浙江大學食用菌研究中心的技術指導下，開化縣農(nóng)業(yè)科學研究所承擔實施了開化縣科技局2014年立項的“秀珍菇液化菌種生產(chǎn)自動接種技術研究與應用”項目（項目編號2014008），研究秀珍菇固體專用菌種液化生產(chǎn)、自動接種和出菇管理技術。

1 秀珍菇液化菌種生產(chǎn)自動接種技術

1.1 生產(chǎn)工藝流程

專用固體菌種（菌絲塊）→菌種液化（原始液制備）→二級液化工藝→流水線自動接種→菌袋菌絲培養(yǎng)→開袋出菇→采收。

1.2 秀珍菇固體專用菌種液化技術

（1）專用固體菌種（菌絲塊）的選擇。為了確保液化菌種純度，專用固體菌種（菌絲塊）使用前必須認真檢查菌種來源、生產(chǎn)日期、純度等，秀珍菇專用固體菌種（菌絲塊）必須在5 ℃環(huán)境下保存，保質(zhì)期30天。

（2）菌種液化原始液制備。將秀珍菇專用固體菌種（菌絲塊）通過勻漿儀粉碎，菌絲塊與無菌水1︰3制得菌種液化原始液。

（3）液化原始液二次稀釋技術。采用無菌操作，將液化原始液按1︰35進行稀釋，菌液與無菌水充分混合后攪拌5 min，使菌液充分均勻后方可接種。

通過采用此工藝，菌液有極高的純度、良好的種性，同時還有良好的流動性和均質(zhì)性，菌絲在液化培養(yǎng)中大小均勻，提高了菌液質(zhì)量和活力。

1.3 液化菌種流水線自動接種技術

（1）接種前準備。待滅菌鍋氣壓降至零時打開鍋門，及時出鍋，漲、破菌袋分開，輕拿輕放防止破袋，連同推車放在接種室。搬運結(jié)束進行消毒。待菌袋降溫至30 ℃以下時接種。

（2）液化接種流水線滅菌。液化罐、空氣過濾器、管道的滅菌在投料前，氣路、料路、液化罐必須用蒸汽進行滅菌，消除所有死角的雜菌，確保系統(tǒng)處于無菌狀態(tài)。

液化罐滅菌：打開液化罐進料口加水100 L，而后密封。及時通蒸汽，至壓力表達1.5～2 kg/cm2、溫度表指示121 ℃時，即可進行過濾器、管道和接種流水線滅菌，保持蒸汽暢通1 h。

過濾器滅菌：首先關閉進氣閥閥門，而后打開蒸汽閥閥門，同時少許打開管道排氣閥，幾分鐘后排氣閥有蒸汽排出，保持1 h。

接種流水線滅菌。待溫度表指示121 ℃時，打開液化罐接種閥門，使之處于正常工作狀態(tài)，然后打開接種放液閥門，保持蒸汽暢通1 h。

（3）液化接種技術。①液化罐接種：接種前把無菌接種過濾器移入液化罐上方位置，向罐內(nèi)通氣，使罐有空氣排出，保持罐內(nèi)始終處于正壓狀態(tài)，用酒精棉花圍住接種口周圍并點燃，戴上醫(yī)用厚手套，擰開接種口，在酒精火焰的保護區(qū)內(nèi)將菌種接入罐內(nèi)。然后將接種口蓋在火焰上，經(jīng)滅菌后擰緊，最后熄滅火焰。②流水線自動接種：利用氣壓差將工藝液體壓出，罐壓可控制在0.05 MPa，不要超過允許范圍。菌種接入罐內(nèi)打開進氣閥恒壓狀態(tài)，稍開放氣閥，讓罐內(nèi)菌液攪拌5 min，使菌液充分均勻。而后打開出料管閥門，接種機置于工作狀態(tài)時，即可開始接種，每袋用種量25 mL。③液化罐、管道清洗：出料結(jié)束后，應立即放水清洗液化罐及料路管道閥門，并開動空壓機，向液化罐供氣攪拌，沖洗干凈管道的菌液。

1.4 液化菌種接種菌袋的菌絲培養(yǎng)和出菇管理技術

（1）菌絲培養(yǎng)。經(jīng)接種的菌包及時搬運到培養(yǎng)場地，每天排放結(jié)束后用消毒盒消毒，溫度前7天控制在25 ℃，而后控制在22～23 ℃，每天記錄培養(yǎng)溫度；濕度控制在60%～65%，早晚打開排風扇通風各1 h，保持培養(yǎng)室空氣新鮮。接種后經(jīng)30天培養(yǎng)，菌絲基本長滿袋，但長勢參差不齊，需再培養(yǎng)10天左右使菌絲后熟。

（2）適時開袋。菌包接種后經(jīng)40天左右培養(yǎng)，菌絲長滿全袋，即可上架排場。繼續(xù)培養(yǎng)10天左右，促進原基形成，結(jié)合制冷設施循環(huán)利用，實行分批搔菌出菇。

（3）溫差刺激，促使菇蕾形成。第一潮菇開袋出菇，采用10 ℃以上溫差刺激，形成的菇蕾整齊，潮次分明。若一潮菇自然出菇，二潮菇溫差刺激出菇，形成菇蕾參差不齊，影響子實體產(chǎn)量與品質(zhì)。

（4）出菇管理。開袋后及時蓋上農(nóng)用薄膜保濕，菇房溫度控制在25～27 ℃，濕度控制在85%～90%，一般在適宜的環(huán)境下3～5天即可出現(xiàn)菇蕾。此時不要向菇蕾直接噴水，以免造成菇蕾死亡。等到子實體菇柄伸長達2～3 cm以后、菌蓋直徑達1 cm 以上時，可以用噴霧器結(jié)合通風向子實體噴霧狀水。盡量不要噴施“關門水”，以免造成濕度過大，通風不足而導致病害發(fā)生。

（5）采收。子實體菌蓋直徑達到3～4 cm，便可以采收，采大留小。溫度高于28 ℃，子實體生長快，24 h不間斷采收；并及時入冷庫保存，以保證鮮菇的品質(zhì)。

（6）轉(zhuǎn)潮管理。第一潮采收后，除去殘留的菇柄及死菇，停止噴水，增加通風量，養(yǎng)菌約20天后菌袋浸水24 h左右，直至菌袋表面軟化。推進5 ℃冷庫保持12～15 h，再上架出菇，一般20天左右可采收。按以上管理方法進行下一潮的催蕾、出菇管理，整個生長周期采收6～7潮菇。

2 液化菌種袋與固體菌種袋的出菇比較

2.1 材料與方法

（1）供試菌株。秀珍菇液化種由浙江大學食用菌研究中心提供；固體栽培種由浙江菇老爺食品有限公司提供。

（2）試驗配方。棉籽殼48%，木屑30%，麩皮15%，玉米粉5%，石膏粉1%，石灰粉1%。

（3）試驗方法。試驗在開化縣東青合作社和月明合作社內(nèi)進行。于2013年9月24～25日開始制袋，按常規(guī)生產(chǎn)拌料，裝袋，滅菌。采用規(guī)格為18×38（cm）的聚乙烯袋，每袋裝干料0.6 kg（濕料重1.25 kg），料高18～19 cm，料中間打孔，用無棉蓋封口。滅菌壓力1.2～1.3 MPa，保持3.5 h；出鍋后用制冷機將菌袋溫度降到28 ℃后開始接種。9月26～27日分別利用“zju-8”型封閉連續(xù)智能液化系統(tǒng)及自動接種流水線接液化種，用接種箱接固體種，各5 200袋，置于培養(yǎng)室，培養(yǎng)室溫度控制在24～27 ℃。觀察發(fā)菌情況，記錄萌發(fā)及滿袋時間，長速和污染情況，統(tǒng)計成品率。菌絲滿袋后按常規(guī)方法進行出菇管理，比較產(chǎn)量、商品性、生物轉(zhuǎn)化率、抗逆性和發(fā)病率。

2.2 試驗結(jié)果

（1）發(fā)菌情況。液化種栽培袋菌種定植萌發(fā)需19 h，菌絲封面吃料需5天，15天后菌袋中間及底部袋壁出現(xiàn)菌絲，菌絲發(fā)滿的時間為32～35天，菌絲日平均長速0.475 cm；固體種栽培袋菌種定植萌發(fā)時間24 h，菌絲封面吃料時間5～6天，菌絲滿袋時間45～48天，菌絲日均長速0.42 cm。直觀對比的結(jié)果表明，液化種菌袋比固體種菌袋結(jié)實，菌絲萌發(fā)快、粗壯。栽培袋成品率液化種為99.2%，固體種為92.5%（表1）。

（2）出菇情況。液化種和固體種最早一批在11月5日上架、解環(huán)蓋，11月7日割袋口，11月9日和10日液化種和固體種原基形成，11月15日開始采收第一潮菇，按各品種農(nóng)藝性狀記錄，統(tǒng)計產(chǎn)量。根據(jù)前兩潮出菇情況分析結(jié)果，液化種比固體種出菇密度大，前者子實體單生，產(chǎn)量略高，商品性菇比例比固體種高20%。

表1 秀珍菇液化種與固體種菌絲培養(yǎng)階段的狀況比較

注：試驗地點為東青合作社。接種和菌絲吃料日期格式為月/日。

本次試驗采用溫差刺激出菇方式，分批進行開袋，每批可采收5潮菇，統(tǒng)計總產(chǎn)量，液化菌種比固體菌種產(chǎn)量提高4.7%（表2）。

3 秀珍菇液化菌種與固體菌種的比較

表2 栽培袋液化種與固體種農(nóng)藝性狀產(chǎn)量的比較

表3 液化種與固體種生產(chǎn)成本對比表

3.1 接種效率與菌種成本

以生產(chǎn)1萬袋秀珍菇為例。僅考慮液化菌種新工藝就可減少用種量90%，菌種成本節(jié)省95%（不包括縮短栽培周期、提高單產(chǎn)等增值部分），詳見表3。如綜合考慮如下因素，則效益更加顯著：一是由于用種量減少，相應地降低了固定資產(chǎn)投入、管理成本和能耗等，大幅節(jié)約了社會資源；二是可以使菌種規(guī)?；咝Х庇蔀楝F(xiàn)實。液化菌種不僅用量少，且保質(zhì)期長達20天，同時還可實現(xiàn)種質(zhì)的同步檢測，與生產(chǎn)性栽培時間一致，克服了常規(guī)固體三級菌種培育時的種性檢測延后的弊端；三是為栽培生產(chǎn)環(huán)節(jié)的傳統(tǒng)食用菌產(chǎn)業(yè)升級轉(zhuǎn)型提供了技術保障。液化菌種新工藝的應用，可使香菇、木耳、金針菇等傳統(tǒng)分散栽培、量大面廣的季節(jié)性生產(chǎn)菇種實現(xiàn)工廠化育袋（菌袋工廠）、分散性栽培管理的新模式，從而徹底解決目前產(chǎn)業(yè)中存在的各種弊端，使產(chǎn)業(yè)發(fā)展走上可持續(xù)的良性軌道。

“zju-8型” 封閉連續(xù)智能液化系統(tǒng)包括20 L液化罐、100 L-100 L（2個）稀釋罐、蒸汽滅菌裝置、通氣裝置、循環(huán)冷卻裝置及系統(tǒng)儀表自控裝置等部分，可實現(xiàn)對菌種液化-接種等系統(tǒng)全部功能的人工智能化控制。系統(tǒng)單產(chǎn)液化菌種能力為200 L，可接固體栽培袋5 000袋，日可生產(chǎn)2次，接種1萬袋。液化菌種菌液滲透性好，可縮短發(fā)菌時間10～15天，菌絲健壯，成品率比固體菌種提高6.7%；流水線接種縮短接種時間，降低人工及材料費用30%，兩項合計每袋節(jié)約成本0.16元（表4）。

表4 液化與固體接種成品率、人工費用和節(jié)本增效統(tǒng)計表

注：供試菌種數(shù)量均為5 000袋。

3.2 產(chǎn)量和質(zhì)量比較

通過2013—2014年連續(xù)兩年不同點的秀珍菇液化菌種與固體菌種的子實體商品性狀及產(chǎn)量的比較，液化菌種子實體單生，勻稱美觀，潮次明顯，優(yōu)質(zhì)菇比例達86%以上，鮮菇增產(chǎn)5.4%。出菇后發(fā)病率0.5%，比固體菌種下降1.5%（表5）。

目前，我國食用菌主要以家庭分散式生產(chǎn)為主，而食用菌生產(chǎn)又是勞動密集型，單一生產(chǎn)成本高，抵御市場能力弱。采用食用菌液化菌種生產(chǎn)接種技術，有顯著優(yōu)勢，降低勞動強度，大幅度降低生產(chǎn)成本，提高生產(chǎn)效率。推廣食用菌液化菌種生產(chǎn)接種技術，需以“公司＋合作社+農(nóng)戶”的發(fā)展模式，形成以公司為龍頭成立定點菌包加工廠，合作社、農(nóng)戶負責出菇管理，減少菇農(nóng)固定設備投資，降低菌袋生產(chǎn)風險。

表5 秀珍菇液化與固體菌種子實體產(chǎn)量及商品性狀對比試驗

4 小結(jié)

在培養(yǎng)溫度23～27 ℃、菌袋濕度適宜的條件下，液化種栽培袋比固體種栽培袋發(fā)菌快，菌絲白，粗壯有力，成品率穩(wěn)定。自然季節(jié)栽培秀珍菇，出菇溫度一般控制在13～25 ℃范圍內(nèi)，溫度低于10 ℃或高于28 ℃時子實體易發(fā)黃萎縮和產(chǎn)生畸形菇，液化種菌袋比固體種菌袋出菇密度大，子實體單生，產(chǎn)量高，商品菇比例高，菌袋轉(zhuǎn)潮快、抗逆性強、不易軟化。

致謝 本課題得到國家食用菌產(chǎn)業(yè)體系和開化縣科技項目資金的資助。課題實施得到浙江大學陳再鳴副教授的技術指導，在此一并致謝。

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2095-0934（2015）02-102-04