李晶

[摘要]目的：探討熒光定量PCR在病原微生物檢測(cè)中的應(yīng)用價(jià)值。方法：選取南陽(yáng)市第一人民醫(yī)院收治的800例患者作為研究對(duì)象，其中淋球菌（NG）感染206例，沙眼衣原體（CT）感染358例，解脲支原體（UU）感染236例。使用熒光PCR檢測(cè)儀進(jìn)行檢測(cè)。結(jié)果：研究結(jié)果發(fā)現(xiàn)CT檢測(cè)，陽(yáng)性例數(shù)為38例，陽(yáng)性率為1 0.61%，NG陽(yáng)性率為14.08%，陽(yáng)性率最高，UU陽(yáng)性檢測(cè)率為14.41%，僅次于NG。結(jié)論：采用熒光定量PCR對(duì)病原微生物進(jìn)行檢測(cè)，可以有效提高檢測(cè)的準(zhǔn)確度，值得推廣使用。

[關(guān)鍵詞]熒光定量PCR；病原微生物；淋球菌；解脲支原體

熒光定量PCR，是一種新的定量測(cè)驗(yàn)技術(shù)，這種檢測(cè)技術(shù)有效保留了常規(guī)PCR的優(yōu)勢(shì)，具有較高的特異性和靈敏性，而且還可以有效降低檢測(cè)的假陽(yáng)性率。對(duì)此，本院對(duì)熒光定量PCR在病原微生物檢測(cè)中的應(yīng)用價(jià)值進(jìn)行了研究，具體研究情況如下：

1資料與方法

1.1一般資料

選取南陽(yáng)市第一人民醫(yī)院門(mén)診科、泌尿科以及皮膚科收治的患者800例作為研究對(duì)象，其中男性390例，女性410例，其中淋球菌（NG）感染206例，解脲支原體（UU）感染236例，沙眼衣原體（CT）感染358例。取這些患者的宮頸、尿道分泌物進(jìn)行檢測(cè)。

1.2檢測(cè)儀器及工具

在本研究中，使用的檢測(cè)儀器為美國(guó)生產(chǎn)的型號(hào)為BIO-RAD iCylcer的熒光PCR檢測(cè)儀，檢測(cè)中所使用的試劑盒為核酸擴(kuò)增熒光檢測(cè)試劑盒。

1.3檢測(cè)原理

在進(jìn)行檢測(cè)時(shí)，在常規(guī)PCR的基礎(chǔ)上，添加了熒光雙標(biāo)記探針的使用，在該探針上會(huì)標(biāo)記2個(gè)熒光基團(tuán)。將其中的一個(gè)熒光基團(tuán)標(biāo)記在探針的5'端，同時(shí)將另一個(gè)熒光基團(tuán)標(biāo)記在探針的3'端。通過(guò)這兩個(gè)標(biāo)記可以構(gòu)成一個(gè)完整的能量傳遞結(jié)構(gòu)。也就是說(shuō)5'端熒光基團(tuán)所發(fā)出的熒光，能夠被另外一端的熒光基團(tuán)所吸收或抑制。在檢測(cè)中，無(wú)特異性PCR發(fā)生時(shí)，探針的熒光信號(hào)不會(huì)發(fā)生任何的變化。但是如果有特異性PCR擴(kuò)增發(fā)生時(shí)，探針會(huì)在PCR檢測(cè)過(guò)程中，Taq酶的5'到3'外切酶活性作用會(huì)將5探針信號(hào)切斷，從而導(dǎo)致切下的3'端熒光基團(tuán)抑制作用會(huì)消失，而切下的5'端熒光基團(tuán)信號(hào)會(huì)增長(zhǎng)。探針的3'端羥基已被去除或封閉，不具有延伸能力。熒光信號(hào)會(huì)隨著PCR產(chǎn)物的增長(zhǎng)而不斷增長(zhǎng)。

1.4檢測(cè)方法

首先使凍存的細(xì)胞完全溶解，加入樣品處理液，以13000r/min將標(biāo)本進(jìn)行離心，10分鐘后使用RNA去除掉上清液，完成上述操作后，采用常規(guī)堿裂解法將CT、NG、UU-DNA提取出來(lái)。提取完成后，就可以對(duì)其進(jìn)行熒光PCR檢測(cè)了。首先將各反應(yīng)管放入熒光PCR檢測(cè)儀上，在不同條件下對(duì)其進(jìn)行擴(kuò)增，共進(jìn)行42次該循環(huán)。等到所有反應(yīng)都結(jié)束后，使用電腦對(duì)所獲得的數(shù)據(jù)進(jìn)行分析，并計(jì)算出結(jié)果。每次檢驗(yàn)完成后均需要做陽(yáng)性和陰性對(duì)照。

2結(jié)果

檢測(cè)完成后，嚴(yán)格按照試劑盒上的說(shuō)明，對(duì)熒光定量PCR檢測(cè)的結(jié)果進(jìn)行分析，研究結(jié)果發(fā)現(xiàn)CT檢測(cè)，陽(yáng)性例數(shù)為38例，陽(yáng)性率為10.61%，NG陽(yáng)性率為14.08%，陽(yáng)性率最高，UU陽(yáng)性檢測(cè)率為14.41%，見(jiàn)表1。

3討論

病原微生物種類(lèi)眾多，會(huì)對(duì)人的機(jī)體造成巨大影響，其中，淋球菌（NG）、解脲支原體（UU）、沙眼衣原體（CT）都是非常常見(jiàn)的病原微生物，患者一旦感染上這些病原微生物，會(huì)對(duì)患者的健康造成很大影響，因此，提高對(duì)病原微生物診斷的準(zhǔn)確性具有非常重要的臨床意義，可以為臨床的診斷和治療提供重要的參考作用。傳統(tǒng)對(duì)病原微生物的檢測(cè)主要是通過(guò)細(xì)菌培養(yǎng)、細(xì)菌涂片等方式進(jìn)行檢測(cè)，但是這些檢測(cè)方法的檢測(cè)率普遍較低，且所需周期較長(zhǎng)，會(huì)影響患者的及時(shí)治療。

PCR檢測(cè)技術(shù)的應(yīng)用在一定程度上提高了檢測(cè)的準(zhǔn)確率，早期的PCR檢測(cè)技術(shù)雖然彌補(bǔ)了傳統(tǒng)檢測(cè)方式的不足，但是還是存在假陽(yáng)性較高等問(wèn)題，無(wú)法有效發(fā)揮對(duì)臨床治療的指導(dǎo)作用。隨著PCR檢測(cè)技術(shù)的不斷發(fā)展完善，熒光定量PCR的檢測(cè)能力更強(qiáng)，靈敏性和特異性都較好，能夠正確指導(dǎo)臨床做出診斷，是臨床治療的重要參考，因此，應(yīng)進(jìn)一步加強(qiáng)其在臨床診治中的應(yīng)用。