王建+王沁梅+田莉莉+楊晨+于素華+楊春

摘 要 冰膠是在低于體系凝固點以下，通過聚合或交聯(lián)反應(yīng)制備的疏松的、大孔狀的凝膠，其在分析化學(xué)領(lǐng)域的應(yīng)用，主要是將分子印跡技術(shù)的構(gòu)效預(yù)知性、特異識別性與冰膠的多孔結(jié)構(gòu)和高通量結(jié)合，構(gòu)成“分子印跡冰膠法”； 分子印跡冰膠法在蛋白質(zhì)分離純化方面，對于保持蛋白質(zhì)的生物活性，有獨特的優(yōu)勢。冰膠通常制備成顆粒包埋型分子印跡冰膠填充柱或整體柱，也可制備成分子印跡選擇性分離膜；所選的模板成分可以是無機離子、小分子或大分子，也可以是大分子上的某些片段；既可以是單分子（片段、離子），也可以是多種分子（片段、離子）的混和物，即混和模板法；既可以直接是目標(biāo)物本身，還可以是目標(biāo)物質(zhì)的結(jié)構(gòu)類似物、同位素標(biāo)記物及目標(biāo)物質(zhì)的片段，即虛擬模板法；甚至還可直接以復(fù)雜樣品中的高豐度組分作為模板制備分子印跡冰膠，使高豐度組分被選擇性吸附，從而使低豐度成分的信號增強，即待定模板法。

關(guān)鍵詞 冰膠； 分子印跡； 填充柱； 整體柱； 分離膜； 模板分子； 評述

1 引 言

在室溫及以上溫度下單體通過聚合制備出的多孔聚合物叫常規(guī)凝膠， 如在0℃～20℃下進(jìn)行聚合反應(yīng)，因溫度低于溶劑的凝固點，此時含有單體或聚合物前體的半凝固反應(yīng)體系發(fā)生聚合或交聯(lián)，其產(chǎn)物在室溫下解凍， 除水后形成疏松的、大孔狀的凝膠聚合物叫冰凍凝膠，簡稱冰膠（Cryogel）；當(dāng)以水為溶劑時，水既為分散劑，同時又充當(dāng)致孔劑，通過相分離形成冰膠的超大孔結(jié)構(gòu)，即水凝結(jié)成的冰晶生長并連為一體，形成完全相連的冰凍骨架，點綴于其中的富含反應(yīng)物的液態(tài)有機微相，反應(yīng)后形成孔壁， 并保持雙鏈結(jié)構(gòu)；冰晶的形狀與尺寸決定了冰膠內(nèi)部相連的大孔的形狀與尺寸[1，2]。

通過選擇合適的模板、單體、交聯(lián)劑分子，或通過不同方法在冰膠內(nèi)部孔表面進(jìn)行化學(xué)修飾或接枝改性，得到具有不同形貌、不同孔結(jié)構(gòu)與不同識別功能的活性位點，在提高選擇性的同時，兼顧增加吸附容量[3]。冰膠的彈性孔壁本身具有較好的力學(xué)穩(wěn)定性，在多次壓縮50%以上，或經(jīng)多次干燥、溶漲后，冰膠的孔結(jié)構(gòu)與性能均不變，極有利于干態(tài)儲藏、再生和重復(fù)使用[4]。利用冰膠的溫敏特性，改變溫度，冰膠整體發(fā)生膨脹與收縮，冰膠內(nèi)部的孔結(jié)構(gòu)也會隨之而變化，從而改善分子印跡冰膠整體柱的柱效，改善分離[5，6]。

Bereli等[7]于2008年開始了分子印跡冰膠法（Molecular imprinting cryogel， MIC）的研究，它將冰膠的大孔結(jié)構(gòu)和高通量特性與分子印跡技術(shù)的構(gòu)效預(yù)知性和特異識別特性結(jié)合，構(gòu)成了一種獨特的親合分離技術(shù)[8]，應(yīng)用于從復(fù)雜環(huán)境水樣及血液、尿液、發(fā)酵液、細(xì)胞破裂上清液等生物樣品中快速、高選擇性地進(jìn)行手性識別、生物分離、去除重金屬離子、定向解毒等[9，10]，親合性提取小分子、無機離子以及多肽、蛋白質(zhì)、核酸等生物大分子，甚至可直接固定與分離病毒粒子、細(xì)胞器、細(xì)胞及微生物等[11]。

2 結(jié)構(gòu)與性質(zhì)

冰膠制備過程如圖1所示。當(dāng)以水為溶劑時，將模板物質(zhì)、結(jié)構(gòu)單體、功能單體、交聯(lián)劑（或聚合物如聚乙烯醇（pVA）與交聯(lián)劑戊二醛（GA）[12]）加入水中，在0℃～

20℃時，由（NH4）2S2O8、 S2O8等氧化劑與NaHSO3、N，N，N，N-四甲基乙二胺等還原劑組成的引發(fā)體系引發(fā)低溫自由基聚合反應(yīng)，再經(jīng)室溫解凍并洗去模板分子后，得到具有合適空間結(jié)構(gòu)的分子印跡冰膠[3，4]。

圖1 分子印跡冰膠制備過程示意圖

Fig.1 A schematic representation for preparation of molecular imprinting cryogel

2.1 單體與交聯(lián)劑

目前，冰膠聚合物的結(jié)構(gòu)單體主要為：甲基丙烯酸羥乙酯（HEMA）[3]、丙烯酰胺（AAM）[13]、N，N-二甲基丙烯酰胺（DMAM）[14]、N-異丙基丙烯酰胺（NIPAm）[15]、乙烯己內(nèi)酰胺（VCL）[16]、乙二醇二甲基丙烯酸酯（EGDMA）[17]及2-丙烯酰胺基-2-甲基丙烷磺酸（AMPS）[18]等。部分結(jié)構(gòu)單體如圖2所示。因pHEMA有較好的化學(xué)惰性、較高的機械強度、較好的化學(xué)穩(wěn)定性和生物穩(wěn)定性，以及較好的生物相容性，故HEMA應(yīng)用最多[19]。

功能單體具有與目標(biāo)物質(zhì)類似的空間結(jié)構(gòu)與官能團(tuán)，可進(jìn)一步增加冰膠對目標(biāo)分子的選擇特性或吸附容量，并提高對生物樣品的相容性。如表 1所示，功能單體多為N-甲基丙烯酰胺衍生物，它的功能基多為氨基酸甲酯系列，能提供酯基、亞氨基， 與目標(biāo)物質(zhì)形成較強的極性鍵、氫鍵、配位鍵或范德華力[20]。

加入交聯(lián)劑后，可得到力學(xué)性能較好的具有三維立體網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)的冰膠，使其具有適當(dāng)?shù)挠捕扰c溶脹性質(zhì)；其上的官能團(tuán)亦可增加對目標(biāo)物質(zhì)的識別能力[11]。如圖3所示，N，N′-亞甲基雙丙烯酰胺（MBAAm）是目前應(yīng)用最多的交聯(lián)劑，它除可使冰膠結(jié)構(gòu)三維化外，其分子上的亞胺基與羰基還可與橋鍵性金屬離子（如Cu2+）部分配位，利用金屬離子的殘余鍵位與目標(biāo)分子（如氨基酸）上的咪唑基、巰基、吲哚基等發(fā)生配位，增加與生物分子的親合性，應(yīng)用于對多肽和蛋白質(zhì)的純化[21]；此外，EGDMA [22]（圖2b）、戊二醛（GA）[23]亦可作交聯(lián)劑。

2.2 模板分子

制備分子印跡冰膠的模板物質(zhì)可以是Fe3+ [23]， BrO3[24]， AsO3

4[25]等簡單的無機離子，也可以是雌二醇（E2）[23]、L-谷氨酰胺[26]、L-谷氨酰胺[27]、L-組氨酸[28]等小分子，同時，還可以是多種小分子共同充當(dāng)模板成分，即混合模板或多模板法[29]，如Denizli等[8]以E2、4-壬基酚（4-NP）及莠去津（ATR）的混和物為模板，用以去除水體中的E2和ATR。

溶菌酶（Lys）[30]、膽紅素（BIL）[31]、人血清蛋白（HSA）[19]、α-2b干擾素[32]、碳酸酐酶（CAH）[33]等生物大分子均可充當(dāng)模板物質(zhì)；當(dāng)獲得某些生物大分子有困難時，可利用這些大分子的某個片段為模板制備冰膠，以選擇性識別大分子，從而降低成本。如免疫球蛋白G（IgG）的Fab片段[34]和Fc片段[35]都曾作為模板制備分子印跡冰膠以吸附人血漿中的IgG。endprint

以目標(biāo)物質(zhì)的結(jié)構(gòu)類似物、同位素標(biāo)記物等為模板，因具有與目標(biāo)分子相近的空間結(jié)構(gòu)與官能團(tuán)，所制備出的冰膠同樣可能對目標(biāo)物質(zhì)有較好的選擇性，此即虛擬模板法（Dummy template）[25]。虛擬模板法可解決目標(biāo)物質(zhì)有毒、成本高的問題，更重要的是，可避免直接模板法可能存在的“模板滲漏”，排除由此引起的對目標(biāo)物質(zhì)定量精密度的干擾，提高檢測的可靠性和準(zhǔn)確性[36，37]。如Baggiani等[18]制備了六氟代雙酚A（FBPA）分子印跡冰膠分析雙酚A（BPA）。

待定模板法（Pending template）是根據(jù)冰膠結(jié)構(gòu)將對樣品中高豐度組分優(yōu)先印跡的原理，通過待定模板法獲得分子印跡，除掉樣品中的高豐度雜質(zhì)[38]。如圖4所示，直接以含多種蛋白質(zhì)的雞蛋清為模板，制備出同時含酸

圖4 待定模板印跡聚合物與樣品中蛋白質(zhì)分子作用示意圖[39]

Fig.4 Interactions between the pending template and protein molecules[39]

性基團(tuán)和堿性基團(tuán)的兩性電解質(zhì)冰膠整體柱，用于處理雞蛋清樣品時，樣品中多個高豐度蛋白質(zhì)組分被印跡，其信號因可被分子印跡冰膠特異性吸附去除而降低，低豐度蛋白質(zhì)的信號增強[39]。

2.3 孔結(jié)構(gòu)及其影響因素

冰膠表面及內(nèi)部特定的印跡腔體與官能團(tuán)性質(zhì)，共同影響對目標(biāo)物質(zhì)的親合程度與可接近程度?？衫帽砻嫖椒治觯˙ET）、孔徑、吸附等溫線等方法，討論模板與聚合物基體的化學(xué)結(jié)構(gòu)、空間結(jié)構(gòu)及酸效應(yīng)、鹽效應(yīng)、pH值等條件與萃取富集效率和選擇性的相關(guān)性?？刂七m當(dāng)原料配比與反應(yīng)條件，可調(diào)整冰膠內(nèi)部孔徑大小與分布，產(chǎn)生適度的大孔、介孔與微孔的平衡，使冰膠兼有較高的傳質(zhì)速度和大的比表面積，表現(xiàn)出良好的吸附與色譜行為[40]。

因為制備溫度不同，冰膠孔結(jié)構(gòu)及吸附容量與常溫凝膠有較大差別。Ran等[41]以牛血清白蛋白（BSA）為模板，分別在

20℃和25℃制備了2-丙烯酰胺基-2-甲基-1-丙烷磺酸（AMPS）、NIPAm和AAM的共聚凝膠，前者具有更多、更規(guī)則的50～100 μm孔腔，其對BSA的吸附容量為后者的2.8倍。

制備冰膠時，水凝固成的冰晶占據(jù)了80%～90%， 甚至更大的空間，聚合反應(yīng)只在冰晶縫隙間的非凝固微液相內(nèi)發(fā)生，反應(yīng)完成后， 經(jīng)室溫解凍，得到具有超大孔（1～100 μm i.d.）、結(jié)構(gòu)疏松的冰膠，其孔壁厚度為1～10 μm至15～50 μm，其中還含有介孔（2～50 nm i.d.）、微孔（<2 nm），總孔容積（20～40 cm3/g）；冰膠內(nèi)部的大孔結(jié)構(gòu)相互連通，流體流動通道大，因而具有良好的流體力學(xué)性質(zhì)，回壓低，擴散阻力小，傳質(zhì)快而高效，無機離子、小分子、生物大分子， 甚至細(xì)胞，均可透過冰膠；當(dāng)冰膠用于復(fù)雜環(huán)境水樣及生物樣品中的目標(biāo)物質(zhì)的選擇性吸附和脫附時，平衡時間都短，可高通量快速處理大體積水樣[42]。

孔徑對冰膠吸附性能與選擇性的影響較為復(fù)雜?？讖皆酱?，樣品流速越大，處理樣品的速度越快，但此時冰膠內(nèi)部比表面積小，作用位點少，同時，目標(biāo)物與冰膠接觸時間太短，不利于有效的吸附目標(biāo)物質(zhì)；孔徑越小、壁越薄，處理樣品的速度越慢，但此時冰膠具有較大的比面積，可提供較高的吸附容量[43]。

選擇帶有特定官能團(tuán)的模板分子、單體或聚合物前體、或往冰膠骨架上通過修飾R、COO等疏水性官能團(tuán)或OH、NH2和SH等親水性官能團(tuán)，可改變冰膠表面及內(nèi)部腔體的極性；還可引入SO3或NR+3等離子性基團(tuán)，使冰膠帶上不同性質(zhì)的電荷，甚至還可使冰膠分子同時帶上正、負(fù)電荷，成為既親油又親水的雙親分子； 不同極性及離子性的目標(biāo)物質(zhì)均可與其通過靜電作用、范德華力或氫鍵，甚至可與金屬離子形成較強的配位鍵，產(chǎn)生高的選擇性以及高的吸附容量，使冰膠具有需要的分析性能、離子交換性能、催化性能[4，19]。

同時，冰膠的超孔結(jié)構(gòu)也有利于大面積地將短分子鏈接枝到冰膠孔壁，提高對生物大分子的吸附容量，并加快分子在冰膠內(nèi)部的傳質(zhì)[10，11]。如Savina等[45]將AAc接枝到pAAM冰膠上，所得冰膠對低分子量配基（如Cu2+）的吸附容量隨接枝度的增加而線性增大；其對大分子量配基如Lys的吸附容量，當(dāng)接枝度低于40%時，也隨接枝度的增加而線性增大；當(dāng)接枝度由60%增至70%時，吸附量急劇增加3倍。如圖5所示，該冰膠與Lys間發(fā)生的是類似于蛋白質(zhì)-聚合物間的觸手型相互作用。

此外，冰膠與無機納米粒子復(fù)合，可調(diào)整冰膠內(nèi)部孔壁厚度與孔徑大小，改善冰膠力學(xué)性能、吸附性能與分析性能，并可使其多功能化[45]；一方面，在冰膠中添加微納尺度的炭黑、Al2O3、SiO2、碳納米管等多孔無機填料，可以起到補強劑的作用，制備出有機、無機復(fù)合的冰膠，增加冰膠的強度，使孔結(jié)構(gòu)更為堅固，增加耐壓性[23]；另一方面，可利用納米粒子超高的比表面積，增加凝膠對目標(biāo)物質(zhì)的吸附性能；此外，通過添加磁性成分制備出的磁性離子印跡聚合物，不僅具有特定的分子識別位點，而且具有磁響應(yīng)特性，在外加磁場作用下，易于分離回收，廣泛應(yīng)用于醫(yī)藥、水處理和環(huán)保等領(lǐng)域[26]；含Tb3+的分子印跡冰膠熒光納米顆粒，兼有選擇性識別與熒光監(jiān)測含組氨酸殘基的蛋白質(zhì)（如Lys和Cyt C）的功能[46]。

3 冰膠在分析化學(xué)中的應(yīng)用

3.1 材料的賦形

冰膠可制備成粉末狀、片狀、棒狀、整體材料等形狀。通過改變冰膠賦形，進(jìn)一步改善冰膠性能，如制備成冰膠分子印跡整體柱，可直觀考察目標(biāo)物質(zhì)及其結(jié)構(gòu)類似物的競爭性保留機制，或制備成冰膠包埋分子印跡顆粒，進(jìn)一步提高比表面積從而提高吸附量，或制備成冰膠分子印跡分離膜，從而實現(xiàn)高通量、快速處理大量生物樣品的目的。

3.1.1 顆粒包埋與整體柱endprint

將分子印跡顆粒均勻分散，包埋于冰膠中，可形成“顆粒包埋結(jié)構(gòu)冰膠”，其與目標(biāo)分子的作用位點位于冰膠骨架的表面或亞表面，比表面積增大，作用位點增多，對目標(biāo)分子有更好的可接近性，吸附容量顯著提高[43，47]。如將膽固醇（Chol）印跡的微球包埋于pHEMA中所制備的冰膠，比表面積增加4.5倍，可去除水體中80% Chol，并可重復(fù)使用20次[48]；將E2分子印跡顆粒（5～10 μm）包埋于pHEMA中制備的冰膠，可去除水體中88%的E2[49]。

在普通HPLC色譜柱中，固定相多為表面多孔型填料，孔徑較小，同時，因為固定相粒子形狀與尺寸的非均勻性，即使在最緊密填充的情況下，固定相粒子間的空間也占色譜柱總?cè)莘e的27%或以上，固定相與目標(biāo)分子間的作用位點較少，對目標(biāo)分子的容量因子較小；分子印跡冰膠整體柱內(nèi)具有大孔、介孔及微孔，可以實現(xiàn)快速的對流傳質(zhì)。同時，冰膠內(nèi)印跡腔體對目標(biāo)分子具有特異性空間結(jié)構(gòu)識別功能，以及與目標(biāo)分子間存在官能團(tuán)相互作用，尤其是冰膠內(nèi)孔表面經(jīng)化學(xué)修飾、接枝修飾及與無機納米粒子復(fù)合改性后，與目標(biāo)物質(zhì)的作用位點數(shù)大增，其對目標(biāo)物質(zhì)的容量因子更大，因而具有更高的柱效[51]。如可將分子印跡顆粒包埋入冰膠中，制備成分子印跡冰膠整體柱， 分析或分離天然水體和紅酒樣品中的BPA [18]、魚眼和鏈球菌培養(yǎng)物中的玻尿酸（HA）[11]等，以獲得較高的吸附容量及選擇因子。

3.1.2 分離膜 為了能更高效地從大量生物樣品中快速分離、純化蛋白質(zhì)，可將分子印跡冰膠制備成分離膜。如圖6所示，Asliyuce 等[14]先利用乙肝表面抗體（anti-HBs）、EGDMA、HEMA共聚制備出分子印跡顆粒，再將其與引發(fā)劑、HEMA置于兩片玻璃間，獲得分子印跡pHEMA冰膠膜，并切割成直徑25 mm的圓片，用以純化乙肝陽性人體血漿中的anti-HBs。該冰膠印跡分離膜在流動相線速度為0.50 mL/min下使用10次后，其對anti-HBs的吸附容量僅降低5%。

3.2 分子印跡冰膠法的應(yīng)用

3.2.1 小分子 分子印跡冰膠法應(yīng)用于選擇性識別小分子，目前主要用于快速定向去除復(fù)雜環(huán)境樣品中的雌激素等內(nèi)分泌干擾物，以改善一般污水處理廠對環(huán)境雌激素去除效果差的現(xiàn)狀[51]。如以分子印跡冰膠整體柱可完全去除水溶液中痕量的E2（2 μg/L），廢水樣品流速可達(dá)50 mL/min，比普通整體柱高10倍以上[17]；以pVA冰膠流動床可在4 min內(nèi)去除廢水中100% E2和86% ATR[15]；此外，分子印跡冰膠法還應(yīng)用于BPA[8]、谷氨酸（Glu）[52]的分析研究。

3.2.2 大分子 在溫和條件下制備蛋白質(zhì)分子印跡冰膠，可保持蛋白質(zhì)的生命活性，抑制蛋白質(zhì)的變性和構(gòu)象改變，從而保持更高的選擇性，故分子印跡冰膠法應(yīng)用于選擇性分析、分離純化或去除生物樣品中的蛋白質(zhì)[11]、快速監(jiān)控疾病、提取動物源藥物，有獨特的優(yōu)勢[26]。如以分子印跡冰膠提取人血漿中的BIL[53]、去除人血清中的HSA[19]、吸附胰島素（INS）[20]、提取雞蛋清里的Lys[30]、吸附α-2b干擾素[32]、從牛紅細(xì)胞中純化CAH[33]等。

3.2.3 無機離子 無機金屬離子和結(jié)構(gòu)單體、功能單體及交聯(lián)劑等成分低溫共聚，解凍后洗去離子，留下無機離子的空位而被“記憶”下來，所得離子印跡冰膠即對無機離子有選擇性吸附作用。無機離子的電荷數(shù)、幾何構(gòu)型和配位數(shù)、幾何尺寸、與配體間相互作用的專屬性都會對離子印跡冰膠的選擇性、吸附容量、吸附動力學(xué)行為產(chǎn)生影響[54]。如以離子印跡冰膠法測定貧血病人血漿中的Fe3+[23]、高選擇性去除飲用水中的低濃度溴酸鹽（<10 μg/L）[24]、吸附除去廢水樣品中的As（V）[25]等。

分子印跡冰膠在分析化學(xué)中的應(yīng)用例子見表 2。

4 其它應(yīng)用

利用冰膠官能團(tuán)上的N， O， S等原子先與Cu2+， Co2+， Zn2+， Ni2+等過渡金屬離子部分配位，再讓目標(biāo)分子上的N， O， S與金屬離子進(jìn)一步配位至飽和，使冰膠與目標(biāo)分子間的相互作用疊加上作用力更強、定向性更高、結(jié)合快速、熱力學(xué)穩(wěn)定的配位作用，有利于提高對目標(biāo)分子的吸附量[40]；基于與過渡金屬離子間配位作用制備的分子印跡冰膠具有催化效應(yīng)[55]，如冰膠單體與過渡金屬離子配位后聚合得到的冰膠仿酶材料，其對降解農(nóng)藥（如對氧磷）的催化性能比未印跡的冰膠高數(shù)十倍至數(shù)百倍[18， 43]；由脂肪固定化酶、AAM、MBAAm、AAc及AA共聚得到的分子印跡冰膠，當(dāng)其應(yīng)用于催化三油酸甘油酯（Olein）與甲醇間的酯交換反應(yīng)時，其傳質(zhì)性能、催化性能及穩(wěn)定性均優(yōu)于常規(guī)凝膠固定化酶[56]。

5 結(jié)論與展望

分子印跡冰膠法將分子印跡技術(shù)的構(gòu)效預(yù)知性、特異識別性與冰膠大孔結(jié)構(gòu)的快速高通量及其可控孔結(jié)構(gòu)、化學(xué)與機械穩(wěn)定性結(jié)合，構(gòu)成了一種獨特的親合分離技術(shù)。分子印跡冰膠法具有很好的生物相容性，且有利于保持蛋白質(zhì)的生物活性。分子印跡冰膠可制備成填充柱或整體柱，也可制備成分離膜。分子印跡冰膠法分離的對象可以是小分子、大分子及無機離子。冰膠中應(yīng)用模板的方法有常規(guī)模板法、虛擬模板法、單一模板法、混和模板法、待定模板法等。

然而，目前所制備的冰膠強度偏低，但冰膠強度對于其實際應(yīng)用有不利影響。例如， 將分子印跡冰膠整體柱應(yīng)用于高效液相色譜分析時，冰膠須有足夠的機械強度，至少能承受約50 MPa的柱壓，才能保證其分析性能的穩(wěn)定性和分析數(shù)據(jù)的重現(xiàn)性；再如，將分子印跡冰膠膜應(yīng)用于排污口及河道等處以快速富集、去除特定污染物時，冰膠自身機械強度及其與支撐體間的附著強度，都會影響其承壓性、耐沖擊性及使用成本。

除了將冰膠與高模量納米級無機填料復(fù)合，增大冰膠連續(xù)相整體強度外，在冰膠配料中增大交聯(lián)劑含量、在冰膠分子的主鏈或支鏈中引入極性官能團(tuán)或芳環(huán)等剛性基團(tuán)以及通過交聯(lián)聚合等方法，可進(jìn)一步提高冰膠的內(nèi)聚力與機械強度，將對保證冰膠材料的持久有效性及工程實用性有重要意義。endprint

References

1 Gun′ko V M， Savina I N， Mikhalovsky S V. Adv. Colloid Interface Sci.， 2013， 187： 1-46

2 YANG Chun， LUAN Xin-Jie， ZHAO Mei-Feng， HU Xiao-Ya. Journal of Instrumental Analysis， 2013， 32 （2）： 249-252

楊 春， 欒新杰， 趙美鳳， 胡效亞. 分析測試學(xué)報， 2013， 32（2）： 249-252

3 Lan H， Gan N， Pan D， Hu F， Li T， Long N， Qiao L. J. Chromatogr. A， 2014， 1331： 10-18

4 Hu Y， Wang Y， Chen X， Hu Y， Li G. Talanta， 2010， 80（5）： 2099-2105

5 Tamahkar E， Bereli N， Say R， Denizli A. J. Sep. Sci.， 2011， 34（23）： 3433-3440

6 Liu H， Liu M， Bai L， Sun S， Liu Y， Yang G. Talanta， 2011， 85（2）： 1193-1198

7 Bereli N， Andac M， Baydemir G， Say R， Galaev I Y， Denizli A. J. Chromatogr. A， 2008， 1190（1-2）： 18-26

8 Denizli A， Say R， Pikin E. React. Funct. Polym.， 2003， 55（1）： 99-107

9 Cetin K， Denizli A. Colloids Surf. B， 2015， 126： 401-406

10 FAN Hong-Tao， SUN Ting， DONG Jia， TONG Gui-Feng， SUI Dian-Peng. Chemistry， 2009， （1）： 10-14

范洪濤， 孫 挺， 董 佳， 仝桂鋒， 隋殿鵬. 化學(xué)通報， 2009， （1）： 10-14

11 Unluer O B， Ersoz A， Denizli A， Demirel R， Say R. J. Chromatogr. B， 2013， 934： 46-52

12 Yuling H， Yangyang W， Xiaoguang C， Yufei H， Gongke L. Talanta， 2010， 80（5）： 2099-2105

13 Xue W， Champ S， Huglin M B， Jones T G J. Eur. Polym. J.， 2004， 40（3）： 467-476

14 Asliyuce S， Uzun L， Rad A Y， Unal S， Say R， Denizli A. J. Chromatogr. B， 2012， 889： 95-102

15 Le Noir M， Plieva F M， Mattiasson B. J. Sep. Sci.， 2009， 32（9）： 1471-1479

16 Hajizadeh S， Xu C， Kirsebom H， Ye L， Mattiasson B. J. Chromatogr. A， 2013， 1274： 6-12

17 Le Noir M， Plieva F， Hey T， Guieysse B， Mattiasson B. J. Chromatogr. A， 2007， 1154（1-2）： 158-164

18 Baggiani C， Baravalle P， Giovannoli C， Anfossi L， Giraudi G. Anal. Bioanal. Chem.， 2010， 397（2）： 815-822

19 Andac M， Galaev I Y， Denizli A. Colloids Surf. B， 2013， 109： 259-265

20 Cavus A， Baysal Z， Alkan H. Colloids Surf. B， 2013， 107： 84-89

21 Luo Q， Zou H， Xiao X， Guo Z， Kong L， Mao X. J. Chromatogr. A， 2001， 926（2）： 255-264

22 Uygun M， Uygun D A， Ozcalskan E， Akgol S， Denizli A. J. Chromatogr. B， 2012， 887-888： 73-78

23 Aslyüce S， Bereli N， Uzun L， Onur M A， Say R， Denizli A. Sep. Purif. Technol.， 2010， 73（2）： 243-249

24 Hajizadeh S， Kirsebom H， Galaev I Y， Mattiasson B. J. Sep. Sci.， 2010， 33（12）： 1752-1759

25 Onnby L， Pakade V， Mattiasson B， Kirsebom H. Water Res.， 2012， 46（13）： 4111-4120

26 WANG Ying， LI Nan. Chemical Industry and Engineering Progress， 2010， 29： 2315-2323endprint

王 穎， 李 楠. 化工進(jìn)展， 2010， 29： 2315-2323

27 Reddy P S， Kobayashi T， Abe M， Fujii N. Eur. Polym. J.， 2002， 38（3）： 521-529

28 Bereli N， Saylan Y， Uzun L， Say R， Denizli A. Sep. Purif. Technol.， 2011， 82： 28-35

29 Zhang C， Jia X， Wang Y， Zhang M， Yang S， Guo J. J. Sep. Sci.， 2014， 37（4）： 419-426

30 Bereli N， Anda M， Baydemir G， Say R， Galaev I Y， Denizli A. J. Chromatogr. A， 2008， 1190（1-2）： 18-26

31 Baydemir G， Andac M， Percin I， Derazshamshir A， Denizli A. J. Mol. Recognit.， 2014， 27（9）： 528-536

32 Erturk G， Bereli N， Tumer M A， Say R， Denizli A. J. Mol. Recognit.， 2013， 26（12）： 633-642

33 Uygun M， Karagozler A A， Denizli A. Artif. Cells Nanomed. Biotechnol.， 2014， 42（2）： 128-137

34 Asliyuce S， Uzun L， Say R， Denizli A. React. Funct. Polym.， 2013， 73（6）： 813-820

35 Bereli N， Erturk G， Tumer M A， Say R， Denizli A. Biomed. Chromatogr.， 2013， 27（5）： 599-607

36 Rabieizadeh M， Kashefimofrad S M， Naeimpoor F. J. Sep. Sci.， 2014， 37（20）： 2983-2990

37 Andac M， Galaev I Y， Yavuz H， Denizli A. Methods in Molecular Biology（Clifton， N.J.）， 2015， 1286： 233-237

38 Kubo T， Hosoya K， Otsuka K. Anal. Sci.， 2014， 30（1）： 97-104

39 Yang C， Luan X， Zhao M， Liu G， Wang J， Qu Q， Hu X. Electrophoresis， 2013， 34（9-10）： 1383-1389

40 HUANG Jian-Xiang， HU Yu-Ling， HU Yu-Fei， LI Gong-Ke. Chinese J. Anal. Chem.， 2012， 40（4）： 643-650

黃健祥， 胡玉玲， 胡玉斐， 李攻科. 分析化學(xué)， 2012， 40（4）： 643-650

41 Ran D， Wang Y， Jia X， Nie C. Anal. Chim. Acta， 2012， 723： 45-53

42 Lan H， Gan N， Pan D， Hu F， Li T， Long N， Qiao L. J. Chromatogr. A， 2014， 1331： 10-18

43 GUO Yong， GUO Tian-Ying. Polym. Bull.， 2013， （1）： 112-126

郭 勇， 郭天瑛. 高分子通報， 2013， （1）： 112-126

44 Savina I N， Mattiasson B， Galaev I Y. Polymer， 2005， 46（23）： 9596-9603

45 WANG Mei， DENG Fang. Polym. Bull.， 2014， （9）： 97-102

王 玫， 鄧 芳. 高分子通報， 2014， （9）： 97-102

46 Uzun L， Uzek R， Senel S， Say R， Denizli A. Mater. Sci. Eng. C， 2013， 33（6）： 3432-3439

47 Burova T V， Grinberg N V， Kalinina E V， Ivanov R V， Lozinsky V I， Alvarez-Lorenzo C， Grinberg V Y. Macromol. Chem. Phys.， 2011， 212（1）： 72-80

48 Caktu K， Baydemir G， Ergun B， Yavuz H. Artif. Cells Nanomed. Biotechnol.， 2014， 42（6）： 365-375

49 Koc I， Baydemir G， Bayram E， Yavuz H， Denizli A. J. Hazard. Mater.， 2011， 192（3）： 1819-1826

50 Kuyukina M S， Ivshina I B， Kamenskikh T N， Bulicheva M V， Stukova G I. Int. Biodeter. Biodegr， 2013， 84： 118-125endprint

51 Srivastava A， Shakya A K， Kumar A. Enzyme Microb. Technol.， 2012， 51（6-7）： 373-381

52 Aydoan C， Anda M， Bayram E， Say R， Denizli A. Biotechnol. Prog.， 2012， 28（2）： 459-466

53 Baydemir G， Bereli N， Andac M， Say R， Galaev I Y， Denizli A. Colloids Surf. B， 2009， 68（1）： 33-38

54 Yamamoto T， Ohmori T， Kim Y H. Carbon， 2010， 48（3）： 912-915

55 Babac C， Yavuz H， Galaev I Y， Pikin E， Denizli A. Reac. Funct. Polym.， 2006， 66（11）： 1263-1271

56 YANG Chun， ZHAO Mei-Feng， LUAN Xin-Jie， LIU Guo-Feng， WANG Jian， HU Xiao-Ya. Modern Chemical Industry， 2013， 33（10）： 80-82

楊 春， 趙美鳳， 欒新杰， 劉國鋒， 王 建， 胡效亞. 現(xiàn)代化工， 2013， 33（10）： 80-82

57 Baydemir G， Bereli N， Andac M， Say R， Galaev I Y， Denizli A. React. Funct. Polym.， 2009， 69（1）： 36-42

58 Baydemir G， Anda M， Perin I， Derazshamshir A， Denizli A. J. Mol. Recognit.， 2014， 27（9）： 528-536

59 Bereli N， Saylan Y， Uzun L， Say R， Denizli A. Sep. Purif. Technol.， 2011， 82（0）： 28-35

60 Erturk G， Bereli N， Ramteke P W， Denizli A. Appl. Biochem. Biotech.， 2014， 173（5）： 1250-1262

61 Ergun B， Baydemir G， Andac M， Yavuz H， Denizli A. J. Appl. Polym. Sci.， 2012， 125（1）： 254-262

Research Progress of Molecular Imprinting Cryogelendprint